發(fā)布時間：2018-06-23 19:01

  本文選題：cinaciguat + 高糖�。� 參考：《山東大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：研究背景糖尿病血管病變因其較高的發(fā)生率、致殘率以及致死率成為糖尿病最主要的并發(fā)癥之一。內(nèi)皮功能損傷是糖尿病血管病變的始動環(huán)節(jié)和關(guān)鍵。高糖可通過多種機(jī)制損傷內(nèi)皮功能,如氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等。一氧化氮(NO)作為一種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,能夠通過NO/可溶性鳥苷酸環(huán)化酶(sGC)/環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)信號途徑發(fā)揮血管舒張、抗炎、抗氧化的作用。病理情況下,NO與sGC均被氧化,使此信號通路無法正常進(jìn)行。Cinaciguat(以下簡稱CIN)是一種新發(fā)現(xiàn)的sGC激活劑,其既不依賴NO又可激活被氧化的sGC,從而激活上述通路發(fā)揮抗炎、抗氧化的特性。有研究表明其對心肌梗死、心肌缺血或再灌注損傷、氧化應(yīng)激引起的內(nèi)皮功能紊亂、新生血管內(nèi)膜形成、以及心肌肥大等均有改善作用。但CIN在糖尿病血管病變的發(fā)病過程中的作用尚不明確。因此本研究選擇高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)損傷模型,模擬糖尿病的體內(nèi)環(huán)境,探索CIN對糖尿病血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。研究目的觀察CIN對高糖環(huán)境下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮(NO)、氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)以及炎癥相關(guān)指標(biāo)的影響,評價其對糖尿病血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用,并初步探討其作用機(jī)制,為糖尿病血管病變的靶向治療提供理論依據(jù)。研究方法1.細(xì)胞來源及培養(yǎng)：購買的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株置于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中,放入37℃、5%的C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2.高糖損傷模型的建立：根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果,采用葡萄糖濃度為33.3mmol/L作用于體外培養(yǎng)的HUVECs細(xì)胞48h建立高糖損傷模型。3.CIN對細(xì)胞增殖活性的影響：HUVECs細(xì)胞生長至70%-80%融合時,高糖(33.3mmol/L)孵育48h誘導(dǎo)損傷,用CIN(0.01、0.1、1和10μmol/L)處理細(xì)胞48h,MTT法測細(xì)胞存活率。4.實驗分組：HUVECs細(xì)胞生長至70%-80%融合時,將HUVECs隨機(jī)分為4組：①正常組(葡萄糖濃度為5.5mmol/L):②正常組+CIN組(葡萄糖濃度為5.5mmol/L+CIN濃度為1μmol/L)；③高糖組(葡萄糖濃度33.3mmol/L)；④高糖組+CIN組(葡萄糖濃度為33.3mmol/L+CIN濃度為1μm01/L).處理48h用于后續(xù)實驗。5.采用硝酸還原酶法測NO水平。6.氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)的檢測：利用熒光探針DCFH-DA檢測ROS,采用硫代巴比妥酯法、黃嘌呤氧化酶法檢測MDA.SOD的含量。7.采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測ICAM-1、VCAM-1的mRNA表達(dá)水平。8.采用免疫印跡法檢測ICAM-1、VCAM-1、NF-κ Bp65的蛋白表達(dá)水平。研究結(jié)果1.細(xì)胞存活率的檢測：與正常組相比,高糖組細(xì)胞存活率降為(40.7±10.1)%,與正常組相比下降了59.3%(P0.01)。與高糖組相比,高糖+CIN(0.01、0.1、1、10κmol/L)各組的細(xì)胞活性增加為(60.0±13.6)%,(79.1±11.6)%,(93.1±9.1)%、(93.4±9.3)%,與正常組相比增加了40%、20.9%、6.9%、6.6%(均P0.05)。但CIN1μmol/L與CIN10μmol/L相比細(xì)胞活性無明顯差別(P0.05)。2.NO的生成量：與正常組相比,高糖組NO生成量明顯減少(18.26±2.03μmol/L vs 12.78±0.92μm01/L,P=0.000).與高糖組相比,高糖組+CIN組NO生成量明顯增加(12.78±0.92μmol/L vs 17.24±1.69μmol/L,P=0.001)。與正常組相比,正常組+CIN組NO生成量無顯著差異(P0.05)。3.氧化應(yīng)激：與正常組相比,高糖組ROS生成量顯著增加(1.00-0.00 vs 2.57±0.44,P=0.002).MDA含量也顯著增加(1.32±0.37nmol/ml vs 9.32±2.21nmol/ml,P=0.001),SOD活性顯著減低(22.82±4.17 U/ml vs 10.79±2.66 U/ml,P=0.000).與高糖組相比,高糖組+CIN組ROS生成量顯著降低(2.57±0.44 vs 1.61±0.28,P=0.01),MDA的生成量也顯著降低(9.32±2.21nmol/m1 vs 4.22±1.55 nmol/ml,P=0.007),SOD的活性顯著升高(10.79±2.66 U/ml vs 18.09±3.36 U/ml,P=0.001).與正常組相比,正常組+CN組ROS、MDA生成量以及SOD活性無顯著性差異(P0.05)。4.炎癥相關(guān)指標(biāo)：與正常組相比,高糖組ICAM-1、VCAM-1 mRNA以及蛋白表達(dá)均顯著增高(P0.05), NF-KBp65蛋白表達(dá)也顯著增高(P0.05)；與高糖組相比,高糖組+CIN組ICAM-1、 VCAM-1 mRNA以及蛋白表達(dá)均顯著降低(P0.05)、NF-KBp65蛋白表達(dá)也顯著降低(P0.05)。與正常組相比,正常組+CIN組ICAM-1, VCAM-1以及NF-KBp65表達(dá)無顯著性差異(P0.05)。研究結(jié)論1.高糖可使體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞存活減少,而cinaciguat可逆轉(zhuǎn)被高糖抑制的內(nèi)皮細(xì)胞的活性,保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞。2.高糖使內(nèi)皮細(xì)胞存活減少的機(jī)制包括NO的生成減少、氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)以及炎癥因子增多。3. cinaciguat可通過提高NO含量,減少氧化應(yīng)激相關(guān)產(chǎn)物ROS和MDA的生成,提高抗氧化酶SOD的活性以及抑制炎癥相關(guān)指標(biāo)ICAM-1、VCAM-1、 NF-κBp65的表達(dá)發(fā)揮對內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。
[Abstract]:The effect of CIN on vascular endothelial cells in diabetic vascular endothelial cells was studied . The effects of NO and sGC on the endothelial function , the formation of new angiogenesis and the protective effect of CIN on diabetic vascular endothelial cells were studied .
( 3 ) high glucose group ( glucose concentration : 33.3 mmol / L ) ;
The expression level of ICAM - 1 , VCAM - 1 and NF - 魏B were measured by means of RT - PCR . Results : Compared with the normal group , the content of ICAM - 1 , VCAM - 1 mRNA was decreased by 59.3 % ( P0.01 ) . Compared with high - sugar group , NO production in high - sugar group was significantly increased ( 12.78 鹵 0.92 渭mol / L vs 17.24 鹵 1.69 渭mol / L , P = 0.001 ) . Compared with the normal group , there was no significant difference in NO production in the normal group and the normal group ( P0.05 ) . The ROS production in the high sugar group increased significantly ( 1.00 - 0.00 vs 2.57 鹵 0.44 , P = 0.002 ) compared with the normal group . The content of MDA also increased significantly ( 1.32 鹵 0.37 nmol / ml vs 9.32 鹵 2.21nmol / ml , P = 0.001 ) , and SOD activity was significantly decreased ( 22.82 鹵 4.17 U / ml vs 10.79 鹵 2.66 U / ml , P = 0.000 ) . Compared with the high - sugar group , the amount of ROS in the high - sugar group was significantly decreased ( 2.57 鹵 0.44 vs 1.61 鹵 0.28 , P = 0.01 ) , and the amount of MDA increased significantly ( 9.32 鹵 2.21nmol / ml vs 4.22 鹵 1.55 nmol / ml , P = 0.007 ) . The activities of SOD increased significantly ( 10.79 鹵 2.66 U / ml vs 18.09 鹵 3.36 U / ml , P = 0.001 ) . Compared with the normal group , the levels of ROS , MDA and SOD in the normal group were significantly higher than those in the normal group ( P0.05 ) .
Compared with the normal group , the expression of ICAM - 1 , VCAM - 1 mRNA and protein in high sugar group and CIN group were significantly decreased ( P0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2

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1 李亞楠;可溶性鳥苷酸環(huán)化酶激活劑cinaciguat對高糖狀態(tài)下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響[D];山東大學(xué);2016年

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本文編號：2058088