本文選題：干擾素-γ + 2型固有淋巴細(xì)胞��； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景過敏性氣道炎癥是過敏性哮喘的病理生理基礎(chǔ),由對外部刺激不適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答引起。長期以來一直認(rèn)為哮喘是由抗原誘導(dǎo)Th2細(xì)胞活化引起的。近期的研究表明2型固有淋巴細(xì)胞(Group 2 innate lymphoid cells,ILC2s)在哮喘的發(fā)生過程中發(fā)揮重要的作用。ILC2s廣泛分布于脂肪相關(guān)淋巴集簇和包括皮膚、肝臟、肺、小腸、內(nèi)臟脂肪組織在內(nèi)的非淋巴組織。上皮來源的細(xì)胞因子胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)、白細(xì)胞介素-33(Interleukin-33,IL-33)、IL-25均可以活化ILC2s。IL-33是IL-1家族中的一員,IL-33可以與ILC2s表面表達(dá)的ST2-IL-1受體輔助蛋白復(fù)合體結(jié)合,活化ILC2s,并分泌大量Th2型細(xì)胞因子IL-5、IL-13等。IL-5可以促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞的聚集、加劇炎癥反應(yīng);IL-13可以促進(jìn)杯狀細(xì)胞分泌黏液和平滑肌細(xì)胞收縮。初始CD4+T細(xì)胞可以分化為Th1或Th2細(xì)胞,Th1型細(xì)胞因子和Th2型細(xì)胞因子可以交叉調(diào)節(jié)Th2和Th1細(xì)胞的發(fā)育和分化。干擾素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)可以由Th1細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞和其他細(xì)胞分泌,可以觸發(fā)1型免疫反應(yīng)、抑制2型免疫反應(yīng)。然而IFN-γ對ILC2s功能的影響目前尚不清楚。鑒于ILC2s是Th2細(xì)胞的“鏡像細(xì)胞”,我們猜測IFN-γ對ILC2s可能也存在抑制作用。研究目的本研究采用經(jīng)鼻滴入IL-33的方法建立小鼠急性過敏性氣道炎癥模型,并用IFN-γ進(jìn)行干預(yù),觀察IFN-γ對小鼠急性過敏性氣道炎癥的影響,并探究IFN-γ抑制小鼠急性過敏性氣道炎癥中ILC2s的作用機(jī)制及其對IL-5、IL-13產(chǎn)生的影響,為臨床急性過敏性氣道炎癥的治療提供理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法24只雌性C57BL/6(6-8w)小鼠隨機(jī)分為4組,每組6只。IL-33模型組、單獨(dú)IFN-γ組、PBS對照組、IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組。在實(shí)驗(yàn)第0 d和第3 d進(jìn)行滴鼻刺激,第6 d處死小鼠收集支氣管灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid,BALF)和肺組織。肺組織切片進(jìn)行蘇木素-伊紅染色(Hematoxylin and eosin,HE)和過碘酸-雪弗染色(Periodic acid-Schiff reagent,PAS)觀察病理變化。流式細(xì)胞術(shù)對ILC2s、嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行分析。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測肺勻漿和BALF上清中IL-5和IL-13的含量。實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real time polymerase chain reaction,Real-time PCR)檢測IL-5、IL-13和ST2 m RNA表達(dá)量的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.小鼠肺組織切片染色結(jié)果(1)HE結(jié)果顯示:與PBS對照組相比,IL-33模型組細(xì)支氣管及伴行血管周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤;與IL-33模型組相比,IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組肺組織中仍有炎性細(xì)胞浸潤,但明顯減輕。(2)PAS結(jié)果顯示:與PBS對照組相比,IL-33模型組支氣管黏膜處可見大量杯狀細(xì)胞增生且分泌大量黏液;與IL-33模型組相比,IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組支氣管黏膜雖有杯狀細(xì)胞增生和黏液分泌,但明顯減少。2.小鼠BALF和肺單細(xì)胞懸液中ILC2s和嗜酸性粒細(xì)胞的流式結(jié)果流式結(jié)果顯示:與PBS對照組相比,IL-33模型組BALF和肺組織中的嗜酸性粒細(xì)胞和ILC2s占總上樣細(xì)胞數(shù)的比例和絕對值均升高(P0.05);與IL-33模型組相比,IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組BALF和肺組織中的嗜酸性粒細(xì)胞ILC2s占總上樣細(xì)胞數(shù)的比例和絕對值均降低(P0.05)。3.小鼠BALF與肺勻漿上清中IL-5、IL-13 ELISA結(jié)果ELISA結(jié)果顯示:與PBS對照組相比,IL-33模型組小鼠BALF和肺勻漿上清中的IL-5、IL-13含量升高(P0.05);與IL-33模型組相比,IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組BALF和肺勻漿上清中IL-5、IL-13含量降低(P0.05)。4.小鼠肺IL-5、IL-13、ST2 Real-time PCR結(jié)果Real-time PCR結(jié)果顯示:與PBS對照組相比,IL-33模型組小鼠肺中IL-5、IL-13、ST2 m RNA表達(dá)量增加(P0.05);與IL-33模型組相比,IL-33+IFN-γ聯(lián)合刺激組IL-5、IL-13、ST2 m RNA表達(dá)量降低(P0.05)。結(jié)論1.經(jīng)鼻滴入IL-33可以成功誘導(dǎo)小鼠急性過敏性氣道炎癥模型。2.IFN-γ可以抑制ILC2s的增殖和活化并降低IL-5、IL-13的水平從而減弱炎癥反應(yīng)。
[Abstract]:Background allergic airway inflammation is the pathophysiological basis of allergic asthma, which is caused by an inappropriate immune response to external stimuli. It has long been thought that asthma is caused by the activation of antigen induced Th2 cells. Recent studies have shown that type 2 Group 2 innate lymphoid cells, ILC2s) in the process of asthma .ILC2s is widely distributed in fat related lymphoid clusters and non lymphoid tissues including skin, liver, lung, small intestine and visceral adipose tissue. Epithelial cell factor Thymic stromal lymphopoietin (TSLP), interleukin -33 (Interleukin-33, IL-33), IL-25 all can be found. Activated ILC2s.IL-33 is a member of the IL-1 family. IL-33 can combine with the ST2-IL-1 receptor auxiliary protein complex expressed on the surface of ILC2s, activate ILC2s, and secrete a large number of Th2 type cytokines, IL-5. IL-13 and other.IL-5 can promote the aggregation of eosinophils and aggravate the inflammatory reaction; IL-13 can promote the secreting mucus and smooth muscle fine of goblet cells. The initial CD4+T cells can differentiate into Th1 or Th2 cells. Th1 type cytokines and Th2 type cytokines can cross regulate the development and differentiation of Th2 and Th1 cells. Interferon gamma (Interferon- y, IFN- gamma) can be secreted by Th1 cells, CD8+T cells, NK cells and other cells, and can trigger type 1 immunoreaction and inhibit type 2 immunization. However, the effect of IFN- gamma on the function of ILC2s is not yet clear. Given that ILC2s is a "mirror cell" of Th2 cells, we suspect that IFN- gamma may also have a inhibitory effect on ILC2s. The purpose of this study was to establish an acute allergic airway inflammation model in mice by nasal drip into IL-33 and to observe the IFN- gamma with IFN- gamma intervention. The effect of IFN- on acute allergic airway inflammation in mice and the mechanism of ILC2s in acute allergic airway inflammation in IFN- gamma inhibition mice and its effect on the production of IL-5 and IL-13 were explored to provide a theoretical basis for the treatment of acute allergic airway inflammation. 24 female C57BL/6 (6-8W) mice were randomly divided into 4 groups with 6.IL-33 in each group. Model group, single IFN- gamma group, PBS control group, IL-33+IFN- gamma combined stimulation group. At zeroth D and third D, the nasal drip irritation was carried out, and sixth D were killed in the mice to collect bronchial lavage fluid (Bronchial alveolar lavage fluid, BALF) and lung tissue. Eriodic acid-Schiff reagent, PAS) observation of pathological changes. Flow cytometry was used to analyze ILC2s and eosinophils. Enzyme linked immunosorbent assay (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) was used to detect IL-5 and IL-13 in lung homogenate and BALF supernatant. CR) detection of changes in the expression of IL-5, IL-13 and ST2 m RNA. Experimental results 1. mice lung tissue section staining results (1) HE results showed: compared with the PBS control group, there was a large number of inflammatory cell infiltration around the bronchioles and the accompanying vessels in the IL-33 model group, and there was still inflammatory cell infiltration in the lung tissue of the IL-33+IFN- gamma stimulation group compared with the IL-33 model group. (2) PAS results showed that a large number of goblet cells proliferated and secreted a large number of mucus in the bronchial mucosa of the IL-33 model group compared with the PBS control group. Compared with the IL-33 model group, the bronchial mucosa of the IL-33+IFN- gamma combined stimulation group had goblet cell proliferation and mucus secretion, but significantly reduced the BALF and lung single cell suspension of.2. mice. The flow cytometric results of ILC2s and eosinophils showed that compared with the PBS control group, the proportion and absolute value of eosinophils and ILC2s in the BALF and lung tissues in the IL-33 model group were increased (P0.05), and BALF in the IL-33+IFN- gamma combined stimulation group and the eosinophil IL in the lung tissue compared with the IL-33 model group. The proportion and absolute value of the total number of C2s cells decreased (P0.05).3. mice BALF and lung homogenate supernatant, IL-5, IL-13 ELISA results ELISA results showed: compared with the PBS control group, IL-33 model group mice BALF and lung homogenate supernatant increased content; compared with the model group, the combined stimulation group and lung homogenization IL-5, IL-13 content decreased (P0.05).4. mice lung IL-5, IL-13, ST2 Real-time PCR results, and Real-time PCR results showed that compared with the PBS control group, the expression amount increased in the model group. Conclusion 1. IL-33 can successfully induce acute allergic airway inflammation in mice by nasal drip..2.IFN- gamma can inhibit the proliferation and activation of ILC2s and reduce the level of IL-5, IL-13 and thus weaken the inflammatory response.
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R562.25

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本文編號：2030888