本文選題：Caveolin-3 + 突變　； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的Caveolin-3(CAV3,微囊蛋白3)蛋白是一種肌細(xì)胞特異蛋白,在調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)通路、葡萄糖代謝以及維持肌肉生理結(jié)構(gòu)和功能發(fā)揮重要作用。2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)的發(fā)病具有明顯的遺傳背景,我們前期發(fā)現(xiàn)T2DM病人存在CAV3基因的外顯子突變。CAV3基因突變還與多種肌組織病變有關(guān),其中一種人類常染色體顯性遺傳的肢帶型肌營(yíng)養(yǎng)不良(limb girdle muscular dystrophy-1C, LGMD-1C)是由于CAV3基因的編碼區(qū)P104L突變導(dǎo)致,肌無(wú)力為主要臨床表現(xiàn)。T2DM和LGMD-1C的發(fā)病是否由于CAV3突變導(dǎo)致骨骼肌細(xì)胞糖代謝障礙、糖利用下降和供能不足尚未清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在從細(xì)胞水平研究T2DM的CAV3基因P47L突變和LGMD-1C的CAV3基因P104L突變對(duì)骨骼肌細(xì)胞胰島素信號(hào)通路及其糖代謝的影響,探討T2DM及LGMD-1C的發(fā)病機(jī)制。方法我們利用生物信息學(xué)分析LGMD-1C的P104L突變以及T2DM病人CAV3基因編碼區(qū)的3個(gè)錯(cuò)義突變：K14N、D15H和P47L,選P47L和P104L突變點(diǎn)在野生型CAV3的基礎(chǔ)上構(gòu)建表達(dá)載體,用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒Lipofectamine3000轉(zhuǎn)染入C2C12成肌細(xì)胞中。建立4組表達(dá)不同基因型的細(xì)胞株：轉(zhuǎn)染對(duì)照空載體的陰性對(duì)照(NC)組、轉(zhuǎn)染野生型CAV3基因的野生型(WT)組、轉(zhuǎn)染P47L突變組和轉(zhuǎn)染P104L的突變組。用葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法(GOD-POD)和糖原測(cè)定試劑盒分別檢測(cè)100nM胰島素刺激后4組分化的C2C12細(xì)胞的葡萄糖消耗和糖原合成,Western blot檢測(cè)胰島素介導(dǎo)的糖代謝相關(guān)信號(hào)分子的蛋白表達(dá)量,免疫共聚焦觀察CAV3和GLUT4的細(xì)胞定位和表達(dá)。結(jié)果(1)通過(guò)生物信息學(xué)綜合分析,K14N、D15H和P47L突變使蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)都發(fā)生了改變,并且P47L突變位于Caveolin (CAV)家族的保守序列區(qū),P104L位于CAV3蛋白的穿膜區(qū)。(2)與WT組相比,P47L和P104L突變組中的C2C12成肌細(xì)胞胰島素刺激后葡萄糖的消耗和糖原合成減少(P0.05)；與NC組比較,過(guò)表達(dá)野生型CAV3增加葡萄糖的消耗(P0.05)和糖原合成。(3) Western blot結(jié)果顯示,與WT組相比,P47L和P104L突變組中CAV3、CAV1和磷酸化的Akt(pAkt)蛋白表達(dá)降低；4組細(xì)胞總蛋白GLUT4和Akt表達(dá)無(wú)明顯差異。免疫共聚焦可以看出,與WT組相比,P47L組細(xì)胞膜上CAV3和GLUT4表達(dá)減少；與NC組相比,WT組細(xì)胞膜上GLUT4表達(dá)明顯增多。而P104L突變使CAV3和GLUT4聚集在核旁,胞膜上表達(dá)缺失。結(jié)論CAV3基因P47L和P104L突變都導(dǎo)致C2C12細(xì)胞葡萄糖攝取和糖原合成減少,其原因可能是突變通過(guò)減少膜上CAV3的表達(dá),抑制胰島素信號(hào)的Akt通路,導(dǎo)致GLUT4移位到胞膜受阻,從而減少葡萄糖攝取和糖原合成。此外,這兩個(gè)突變都導(dǎo)致CAV家族的另一個(gè)亞型CAV1減少,而CAV1在骨骼肌細(xì)胞胰島素依賴的葡萄糖攝取中起到重要作用。骨骼肌細(xì)胞葡萄糖利用障礙和葡萄糖供能不足可能參與T2DM和LGMD-1C的發(fā)病機(jī)制。
[Abstract]:Objective Caveolin - 3 ( CAV3 ) protein was a kind of muscle cell specific protein , which plays an important role in regulating insulin signaling pathway , glucose metabolism and maintaining the physiological structure and function of muscle .
Compared with NC group , overexpression of wild type CAV3 increased glucose consumption ( P0.05 ) and glycogen synthesis . ( 3 ) Western blot analysis showed that the expression of CAV3 , CAV1 and phosphorylation in P47L and P104L groups decreased compared with WT group .
Compared with WT group , the expression of CAV3 and GLUT4 in P47L group was decreased compared with WT group .
Conclusion CAV3 gene P47L and P104L can decrease the glucose uptake and glycogen synthesis of C2C12 cells . Conclusion CAV3 gene P47L and P104L can decrease the glucose uptake and glycogen synthesis of C2C12 cells .
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉文斌;鄭基;王t ;葛軍;史虹莉;;上海市五角場(chǎng)社區(qū)中老年人糖代謝障礙現(xiàn)狀與相關(guān)因素分析[J];中國(guó)慢性病預(yù)防與控制;2005年06期

2 陳三民;;淺談心血管內(nèi)科住院患者糖代謝異常臨床觀察[J];中國(guó)衛(wèi)生產(chǎn)業(yè);2012年10期

3 黃亞莉,尹世達(dá),周建光,張海峰,韓�？�,王迎;448例老年人體脂分布特征及其與糖代謝障礙的關(guān)系[J];中華老年心腦血管病雜志;2001年04期

4 王汝蓮,徐俊波,張廷杰,伍悅蕾,王靜,阮蕾,朱軾,陳明,秦方,謝玲,周蘭春,吳時(shí)達(dá),閻亞非,文瑞蓮,陳爾琴,張莉,王文艷,曾佳;成都市區(qū)糖代謝障礙現(xiàn)狀與相關(guān)因素的現(xiàn)況研究[J];中國(guó)慢性病預(yù)防與控制;2003年02期

5 胡新勇;糖代謝障礙在創(chuàng)傷多器官功能不全綜合征中的作用及極化液的臨床應(yīng)用探討[J];現(xiàn)代診斷與治療;2004年06期

6 李靜;;“糖代謝”說(shuō)課設(shè)計(jì)[J];衛(wèi)生職業(yè)教育;2013年02期

7 江麗;徐靜靜;;1934名40歲以上高校教師糖代謝異常調(diào)查[J];中國(guó)校醫(yī);2014年03期

8 孫晉華,趙玲,戴光華;143例糖代謝障礙的分析報(bào)告[J];中國(guó)基層醫(yī)學(xué);1996年02期

9 沈絢梅,呂燕平,靳麗娟;肺心病急性加重期糖代謝異常的臨床觀察[J];中國(guó)基層醫(yī)藥;2003年08期

10 王昆潤(rùn);;糖代謝障礙患者發(fā)生脂蛋白含量異常血癥、高血壓和冠心病的頻率[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));1990年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前2條

1 王占科;;高度重視創(chuàng)傷后糖代謝障礙與多器官功能不全綜合征實(shí)驗(yàn)室診斷[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2010年

2 王占科;陳自力;熊曉平;楊莉萍;劉振玉;黃強(qiáng);;糖代謝障礙相關(guān)指標(biāo)診斷創(chuàng)傷后多器官功能不全綜合征標(biāo)準(zhǔn)探討[A];第十屆全軍檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 鄧玉風(fēng);Caveolin-3基因P47L和P104L突變對(duì)骨骼肌細(xì)胞糖代謝的影響及其機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

2 戴煒;肝功能損害與糖代謝異常關(guān)系的臨床研究[D];暨南大學(xué);2006年

3 黃崇兵;甲狀腺功能亢進(jìn)癥與糖代謝和生長(zhǎng)激素的關(guān)系[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

4 詹雅詩(shī);惡性腫瘤患者糖代謝紊亂的臨床分析[D];暨南大學(xué);2008年

5 曾芙蓉;不同糖代謝狀態(tài)下血清SICAM-1/SVCAM-1表達(dá)及與炎癥相關(guān)性的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

6 潘寅兵;不同麻醉方法對(duì)食道癌開(kāi)胸手術(shù)病人應(yīng)激紅細(xì)胞糖代謝限速酶和膜流動(dòng)性的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

，

本文編號(hào)：1989893