本文選題：C-Mpl + 骨小梁�。� 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報》2017年23期

【摘要】：目的觀察C-Mpl對骨骼代謝平衡的影響,并對其機制進(jìn)行初步研究。方法以6月齡野生型(WT)小鼠和C-Mpl敲除小鼠(C-Mpl-/-)作為研究對象。采用Micro-CT掃描,進(jìn)行股骨遠(yuǎn)端骨小梁參數(shù)分析,包括骨密度(BMD)、骨體積與組織體積比(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁數(shù)目(Tb.N)、骨小梁分離度(Tb.Sp)和結(jié)構(gòu)模型指數(shù)(SMI)。通過三點彎曲試驗記錄股骨生物力學(xué)強度,Von Kossa及茜素紅礦化染色觀察骨礦化水平,微板法檢測血清鈣、磷水平變化。TRAP染色觀察破骨細(xì)胞數(shù)量,體外流式細(xì)胞儀檢測破骨細(xì)胞凋亡。流式細(xì)胞儀檢測破骨細(xì)胞的ROS含量,q PCR和Western blot分析p38、p-p38、Fox O1和Nrf2表達(dá)變化。結(jié)果 Micro-CT掃描結(jié)果提示,與WT小鼠比較,C-Mpl-/-小鼠股骨干骺端松質(zhì)骨明顯增多,BMD、BV/TV、Tb.N顯著升高,而Tb.Sp和SMI明顯降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);Tb.Th兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。生物力學(xué)分析結(jié)果顯示,C-Mpl-/-小鼠斷裂負(fù)荷和剛度明顯低于WT小鼠(P0.05)。C-Mpl-/-小鼠股骨Von Kossa染色和成骨細(xì)胞茜素紅染色均弱于WT小鼠,且血清中鈣、磷含量亦明顯低于WT小鼠(P0.05)。TRAP染色結(jié)果顯示,與WT小鼠相比較,C-Mpl-/-小鼠破骨細(xì)胞數(shù)量顯著減少(8.667±1.202 vs 18.000±1.732,P0.05)。流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn),C-Mpl-/-小鼠破骨細(xì)胞凋亡率較WT小鼠明顯增加[(14.54±1.17)%vs(5.38±0.56)%,P0.05],且C-Mpl-/-小鼠破骨細(xì)胞的ROS水平明顯低于WT小鼠破骨細(xì)胞(6 833.0±176.4 vs 12 933.0±202.8,P0.05)。q PCR結(jié)果顯示C-Mpl-/-小鼠破骨細(xì)胞中Fox O1和Nrf2表達(dá)水平較WT小鼠破骨細(xì)胞明顯降低(P0.05),Western blot結(jié)果也證實C-Mpl-/-小鼠破骨細(xì)胞中p-p38、Fox O1和Nrf2表達(dá)均顯著下降(P0.05)。結(jié)論 C-Mpl基因?qū)趋来x存在一定影響,C-Mpl敲除顯著加速小鼠體內(nèi)破骨細(xì)胞的凋亡,抑制破骨細(xì)胞生成,最終可能導(dǎo)致C-Mpl-/-小鼠的骨骼衰老速度和骨質(zhì)疏松程度均明顯減慢。
[Abstract]:Objective to observe the effect of C-Mpl on bone metabolic balance and its mechanism. Methods six months old wild type WTM mice and C-Mpl knockout mice (C Mpl- r -) were used as the study subjects. The trabecular parameters of distal femur were analyzed by Micro-CT scanning, including bone density, ratio of bone volume to tissue volume, trabecular thickness, trabecular number, trabecular separation and structural model index. Biomechanical strength of femur was recorded by three point bending test. Bone mineralization level was observed by Von Kossa and alizarin red mineralization staining. Serum calcium and phosphorus levels were detected by microplate method. The number of osteoclasts was observed by trap staining. Apoptosis of osteoclasts was detected by flow cytometry in vitro. The ROS content of osteoclasts was detected by flow cytometry (FCM) and Western blot was used to analyze the expression of p38, p-p38, Fox O1 and Nrf2 in osteoclasts. Results the results of Micro-CT scan showed that compared with WT mice, the number of bone in metaphyseal cancellous bone of C-Mpl-R mice was significantly increased, while Tb.Sp and SMI were significantly decreased. There was no significant difference between the two groups. The results of biomechanical analysis showed that the breaking load and stiffness of C-Mpl-r / -mice were significantly lower than those of WT mice (P 0.05N. C-Mpl-r / -mice), the Von Kossa staining of femur and alizarin red staining of osteoblasts were weaker than those of WT mice, and the calcium in serum was lower than that in WT mice. Compared with WT mice, phosphorus content was significantly lower than that of WT mice (P 0.05N. Trap staining). Compared with WT mice, the number of osteoclasts in C-Mpl-r / -mice was significantly decreased by 8.667 鹵1.202 vs 18.000 鹵1.732P 0.05. Flow cytometry showed that the apoptosis rate of osteoclasts in C-Mpl-r-mice was significantly higher than that in WT mice [14.54 鹵1.17)%vs(5.38 鹵0.56], and the ROS level of osteoclasts in C-Mpl-r-mice was significantly lower than that in WT mice (6 833.0 鹵176.4 vs 12 933.0 鹵202.8% P0.05. Q PCR). The results showed that Fox in C-Mpl-r-mouse osteoclasts was significantly lower than that in WT mice. The expression levels of O1 and Nrf2 in osteoclasts of WT mice were significantly lower than those in osteoclasts of WT mice. The results of Western blot also confirmed that the expressions of p-p38, Fox O1 and Nrf2 in osteoclasts of C-Mpl-r-mice were significantly lower than those of osteoclasts of WT mice (P 0.05). Conclusion C-Mpl gene has a certain effect on bone metabolism. C-Mpl knockout can accelerate the apoptosis of osteoclasts and inhibit the formation of osteoclasts in mice, which may result in the reduction of bone senescence and osteoporosis in C-Mpl-r-mice.
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)軍事預(yù)防醫(yī)學(xué)院全軍復(fù)合傷研究所 創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國家重點實驗室;解放軍第九八醫(yī)院骨科;解放軍第九八醫(yī)院神經(jīng)外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(81573084) 重慶市科技創(chuàng)新領(lǐng)軍人才支持計劃(CSTCKJCXLJRC06)~~
【分類號】：R580

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本文編號：1972482