本文選題：血管平滑肌 + 胰島素�。� 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：研究背景及目的我國大約有4085萬人是糖尿病患者,其人數(shù)已經(jīng)位居世界第二。隨著生活水平的改善及提高,糖尿病的發(fā)病率也隨之上升。為此,人類的身體及心理健康遭到了嚴(yán)重的危害。當(dāng)患者被診斷為糖尿病時,常發(fā)現(xiàn)已經(jīng)并存了血管并發(fā)癥,特別是動脈粥樣硬化性心、腦血管病。近來,大量臨床研究資料及糖尿病血管并發(fā)癥的研究表明,糖尿病患者比非糖尿病患者更能合并動脈粥樣硬化。與此同時,胰島素抵抗更多地見于血管發(fā)生了動脈粥樣硬化的糖尿病患者。胰島素抵抗表現(xiàn)為體內(nèi)各組織或細(xì)胞對胰島素的反應(yīng)遲鈍,即其敏感性不足或消失,機(jī)體中組織或細(xì)胞出現(xiàn)胰島素抵抗,繼而與胰島素相關(guān)的一些生物作用降低,最終會引起血液中胰島素濃度代償性地增高,出現(xiàn)高胰島素血癥。所以,高胰島素血癥可以作為胰島素抵抗的一個重要標(biāo)志。許多臨床研究顯示,當(dāng)糖尿病患者的血管發(fā)生了粥樣斑塊時,其血液中胰島素的濃度往往處于較高水平。以上這些都說明了,當(dāng)糖尿病患者合并了動脈粥樣硬化時,胰島素抵抗及后續(xù)引起的高胰島素血癥是其重要的高危因素。2型糖尿病患者的血管性疾病有很多,其中包括血管內(nèi)粥樣斑塊的形成及血管再通后的再狹窄等。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),這些血管性疾病的病理過程都相同,即血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)發(fā)生表型轉(zhuǎn)換。當(dāng)VSMC的表型發(fā)生轉(zhuǎn)換后(由分化的靜止表型向去分化的合成表型轉(zhuǎn)換),其正常生理功能發(fā)生改變,即出現(xiàn)增強(qiáng)的增殖、遷移能力以及紊亂的收縮舒張功能。目前,在對血管增生性疾病的發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制中,VSMC表型轉(zhuǎn)換以及高胰島素血癥對VSMC影響的分子機(jī)制研究也成為了現(xiàn)今研究的熱點(diǎn)。作為VSMC表型的標(biāo)志性蛋白:α肌動蛋白(smooth muscle alpha-actin,SM-α)在靜止收縮表型VSMC中大量表達(dá),然而在胰島素刺激VSMC發(fā)生異常遷移及增殖時,VSMC內(nèi)的SM-α量大量減少,進(jìn)而VSMC從分化的靜止表型向去分化的合成表*本課題受國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81170281)資助。型轉(zhuǎn)換,最終導(dǎo)致了vsmc增殖及遷移能力的增強(qiáng)。因此,胰島素誘導(dǎo)vsmc中的關(guān)鍵分子sm-α基因表達(dá)下調(diào),導(dǎo)致vsmc發(fā)生表型轉(zhuǎn)換,最終促使vsmc生物學(xué)功能異常,其在血管動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用。激活蛋白1(activatorprotein1,ap-1)作為細(xì)胞內(nèi)的一個轉(zhuǎn)錄因子能結(jié)合多個基因啟動子調(diào)節(jié)基因的表達(dá)來應(yīng)對多種刺激,控制了許多的細(xì)胞進(jìn)程,包括增殖、分化及凋亡等。ap-1也能結(jié)合sm-α基因上游的特異啟動子序列從而發(fā)揮一系列生物效應(yīng)。然而ap-1在胰島素誘導(dǎo)sm-α基因表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致vsmc表型轉(zhuǎn)換過程中的具體機(jī)制尚不是十分清楚。因此,明確胰島素對vsmc表型轉(zhuǎn)換及其增殖遷移效應(yīng)的影響機(jī)制對研究糖尿病患者血管并發(fā)癥等疾病發(fā)生發(fā)展具有重要的臨床意義。研究方法1、體外培養(yǎng)sd大鼠vsmc2、不同濃度的胰島素(0、25、50、100、125nmol/l)刺激sd大鼠vsmc培養(yǎng)24h后,用流式細(xì)胞儀測vsmc的細(xì)胞周期。3、設(shè)計并構(gòu)建ap-1表達(dá)質(zhì)粒后轉(zhuǎn)染到sd大鼠vsmc培養(yǎng)24h,同時分成4個組:空白對照組;單純胰島素刺激組;ap-1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組;胰島素刺激+ap-1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組。4、用rt-pcr檢測4個實(shí)驗(yàn)組中sd大鼠vsmc的sm-α、ap-1基因的mrna表達(dá)水平5、用westernblot檢測4個實(shí)驗(yàn)組中sd大鼠vsmc的sm-α、ap-1基因的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1、sd大鼠vsmc在靜止培養(yǎng)24小時后,加入不同濃度的胰島素刺激培養(yǎng)的vsmc24小時,流式細(xì)胞檢測vsmc周期。結(jié)果顯示隨著胰島素濃度的增高,vsmc在培養(yǎng)24h后,其s期的百分比逐漸升高到一定峰值后開始下降[(23.49±1.17)%、(28.08±0.68)%、(30.44±1.77)%、(47.47±0.88)%、(46.23±1.65)%,p0.05],vsmc在100nmol/l濃度胰島素刺激下s期百分比達(dá)到峰值(47.47±0.88)%。2、sd大鼠vsmc在靜止培養(yǎng)24小時后,加入100nm胰島素刺激培養(yǎng)的vsmc24小時,rt-pcr及westernblot檢測vsmc中ap-1及sm-α的mrna和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示,胰島素刺激組ap-1[(0.47±0.09)、(0.46±0.14)]及sm-α[(0.41±0.03)、(0.32±0.03)]的mrna及蛋白水平均低于對照組(未加胰島素刺激組)(p0.05)。3、將構(gòu)建的AP-1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至SD大鼠VSMC后,可上調(diào)SM-α基因(2.25±0.28)的mRNA表達(dá)(P0.05),同時在胰島素刺激下其AP-1基因的mRNA表達(dá)下調(diào)(0.99±0.20)且SM-α基因的mRNA表達(dá)(1.32±0.15)也同時受到抑制(P0.05)。4、將構(gòu)建的AP-1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至SD大鼠VSMC后,VSMC中的SM-α基因(1.61±0.23)的蛋白表達(dá)升高(P0.05)。此外,VSMC中的AP-1基因(0.97±0.06)及SM-α基因(1.02±0.80)在胰島素的刺激下,其蛋白表達(dá)同時降低(P0.05)。結(jié)論1、胰島素通過增加SD大鼠VSMC細(xì)胞周期S期的百分比,促使SD大鼠VSMC發(fā)生增殖。2、將AP-1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至SD大鼠VSMC后,轉(zhuǎn)錄因子AP-1可上調(diào)SD大鼠VSMC中SM-α基因的表達(dá)。3、胰島素可通過下調(diào)SD大鼠VSMC中AP-1的表達(dá),從而抑制其SM-α基因的表達(dá),最終導(dǎo)致SD大鼠VSMC表型轉(zhuǎn)換發(fā)生增殖。
[Abstract]:There are some 4085 million people with diabetes mellitus in our country . The number of patients with diabetes mellitus is the second in the world . As the living standards improve and improve , the incidence of insulin resistance increases . In the meantime , the insulin resistance can be seen as an important marker of insulin resistance . The expression level of sm - 偽 , ap - 1 in sd rats was determined by RT - PCR .
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1

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本文編號：1968267