本文選題：聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶- + 氫醌　； 參考：《中國職業(yè)醫(yī)學(xué)》2017年01期

【摘要】：目的探討沉默聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)對氫醌所致大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSCs)凋亡的影響。方法①PARP-1基因RNA干擾表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMMSCs后,經(jīng)新霉素篩選獲得PARP-1沉默BMMSCs,以免疫印跡法鑒定所構(gòu)建的細(xì)胞。②以空載體BMMSCs為對照組,以PARP-1沉默BMMSCs為實(shí)驗(yàn)組。分別以質(zhì)量濃度為0.0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0和320.0μmol/L的氫醌(溶于磷酸鹽緩沖液)作用于2組細(xì)胞24 h,以噻唑藍(lán)法檢測細(xì)胞活力,根據(jù)細(xì)胞活力檢測結(jié)果選擇后續(xù)實(shí)驗(yàn)氫醌染毒劑量。③以濃度為0.0~20.0μmol/L的氫醌作用于2組細(xì)胞24 h后,以流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況,以實(shí)時熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)檢測PARP-1 mRNA表達(dá)情況。結(jié)果①用質(zhì)量濃度為400 mg/L的新霉素成功篩選出PARP-1沉默BMMSCs和空載體BMMSCs,PARP-1沉默BMMSCs中PARP-1蛋白表達(dá)量較BMMSCs下降85.00%,成功建立PARP-1沉默細(xì)胞。②根據(jù)細(xì)胞活力檢測結(jié)果,后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇氫醌染毒劑量為0.0~20.0μmol/L。3與氫醌染毒劑量為0.0μmol/L時比較,對照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞早期凋亡率分別在氫醌染毒劑量為10.0和5.0μmol/L時即出現(xiàn)有統(tǒng)計學(xué)意義的升高(P0.05);且在濃度為0.0~10.0μmol/L時,隨著氫醌染毒劑量的增加,2組細(xì)胞早期凋亡率均增加(P0.01),均呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。③與氫醌染毒劑量為0.0μmol/L比較,對照組和實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的PARP-1 mRNA相對表達(dá)水平均在氫醌染毒劑量為5.0μmol/L時即出現(xiàn)有統(tǒng)計學(xué)意義的升高(P0.05),且在每個氫醌染毒劑量下實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞PARP-1 mRNA相對表達(dá)水平均低于對照組(P0.05);在濃度為0.0~20.0μmol/L時,隨著氫醌染毒劑量的增加,2組細(xì)胞PARP-1 mRNA相對表達(dá)水平均增加(P0.01),均呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論 PARP-1沉默BMMSCs在氫醌作用下更易發(fā)生凋亡,PARP-1可能參與了氫醌誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of silencing polyadenosine diphosphate (PARP-1) on apoptosis of rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) induced by hydroquinone. Methods after transfection of RNA interference expression plasmid of 1PARP-1 gene into BMMSCs, PARP-1 silencing BMMSCs was obtained by neomycin screening. The constructed cells were identified by Western blot as control group with empty vector BMMSCs as control group and PARP-1 silencing BMMSCs as experimental group. The cells in the two groups were treated with hydroquinone (dissolved in phosphate buffer solution) at a concentration of 0.02.55.00.0.0.0.0.0.0.0160.0 and 320.0 渭 mol/L for 24 h, respectively. The cell viability was detected by thiazolyl blue assay, and the cell viability was determined by thiazolyl blue assay. According to the results of cell viability test, the cell apoptosis was detected by flow cytometry after hydroquinone was treated with 0.020 渭 mol/L hydroquinone for 24 h. The expression of PARP-1 mRNA was detected by real-time fluorescence quantitative-polymerase chain reaction. Results 1 the expression of PARP-1 protein in PARP-1 silencing BMMSCs and empty vector BMMSCsPPARP-1 silencing BMMSCs was 85.00% lower than that of BMMSCs successfully. PARP-1 silencing cells were successfully established according to the results of cell viability test. In the following experiment, when the dose of hydroquinone was 20. 0 渭 mol/L.3 and the dose of hydroquinone was 0. 0 渭 mol/L, the early apoptosis rate of the control group and the experimental group were increased significantly at the dose of 10. 0 and 5. 0 渭 mol/L, respectively, and at the concentration of 0. 010 渭 mol/L. With the increase of the dose of hydroquinone, the early apoptotic rates of the two groups were increased with the dose-effect relationship of 0. 0 渭 mol/L and 0. 0 渭 mol/L, respectively. The relative expression level of PARP-1 mRNA in the control group and the experimental group was significantly increased when the dose of hydroquinone was 5.0 渭 mol/L, and the relative expression level of PARP-1 mRNA in the experimental group was lower than that in the control group under each dose of hydroquinone exposure. When the concentration was 0.00 渭 mol/L, the concentration of P0. 05 渭 mol/L was 0. 05 渭 mol/L. With the increase of the dose of hydroquinone, the relative expression of PARP-1 mRNA was increased in both groups, both in a dose-effect relationship. Conclusion PARP-1 silencing BMMSCs is more likely to induce apoptosis under the action of hydroquinone. PARP-1 may be involved in the apoptosis induced by hydroquinone.
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 東莞市環(huán)境醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;廣東醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院東 莞市環(huán)境醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81273116) 廣東省自然科學(xué)基金(2015A030310532) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(A2016246,A2014468) 廣東醫(yī)科大學(xué)科研基金(2XB13012)
【分類號】：R135.1

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本文編號：1941327