本文選題：艾滋病 + THP-1��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：艾滋病是獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)的簡稱,是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染機(jī)體引發(fā)的一種以免疫細(xì)胞功能缺陷、反復(fù)機(jī)會(huì)性感染及惡性腫瘤為主要特點(diǎn)的綜合癥。在HIV感染機(jī)體過程中,天然免疫的潛在作用逐漸受到人們的重視,固有免疫細(xì)胞作為機(jī)體免疫系統(tǒng)中一個(gè)重要的組成部分,可對(duì)入侵的病原體產(chǎn)生快速應(yīng)答,也可對(duì)體內(nèi)損傷、衰老或畸變的細(xì)胞進(jìn)行清除,在發(fā)揮非特異性免疫應(yīng)答的同時(shí)還會(huì)參與激活適應(yīng)性免疫應(yīng)答。其中巨噬細(xì)胞(Macrophage,Mφ)和樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DCs)是固有免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用最為顯著的兩種固有免疫細(xì)胞,在天然免疫和獲得性免疫間起橋梁作用,本文圍繞這兩種細(xì)胞進(jìn)行了以下研究:第一部分:漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞在SHIV病毒感染猴不同組織內(nèi)的分布變化。漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cells,pDCs)來源于骨髓,約占外周血單個(gè)核細(xì)胞的0.2%-0.8%,在免疫應(yīng)答和免疫耐受中發(fā)揮重要作用。SIV感染猴的外周血、骨髓、脾臟和肝臟等多個(gè)組織中pDCs的數(shù)量均會(huì)出現(xiàn)顯著的降低,而腸道及相關(guān)淋巴結(jié)內(nèi)pDCs的數(shù)量卻出現(xiàn)了不同程度的增高。導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)量發(fā)生變化的原因可能有以下兩個(gè)方面:一方面是病毒感染細(xì)胞后誘導(dǎo)其凋亡;另一方面是pDCs表面誘導(dǎo)細(xì)胞向腸道歸巢的α4β7表達(dá)增高,使得pDCs向腸道轉(zhuǎn)移。當(dāng)病毒通過粘膜系統(tǒng)感染機(jī)體時(shí),腸道會(huì)成為病毒復(fù)制的主要場所,此時(shí)所釋放的細(xì)胞因子或炎性趨化因子誘導(dǎo)外周淋巴器官內(nèi)的pDCs向腸道轉(zhuǎn)移并被激活,激活的pDCs如果可以攜帶大量病毒通過輸入淋巴管進(jìn)入淋巴結(jié),那將會(huì)給病毒對(duì)靶細(xì)胞CD4+T細(xì)胞的感染帶來很大的便利,促進(jìn)病毒對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的破壞。但是目前僅有研究表明pDCs可通過高內(nèi)皮靜脈(High endothelial venule,HEV)進(jìn)入LN,那pDCs能否通過輸入淋巴管進(jìn)入LN呢?本文使用SHIVSF162P3病毒感染的恒河猴做為動(dòng)物模型,定期檢測血漿病毒載量和CD4+/CD8+T細(xì)胞的比值。動(dòng)物模型構(gòu)建成功后,對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物執(zhí)行安樂死,獲取所需組織及外周血,通過流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)染色兩種方法檢測不同組織中pDCs的變化。流式實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SHIVSF162P3病毒感染后,恒河猴的外周血和脾臟內(nèi)pDCs的數(shù)量變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而腋窩LN和腹股溝LN內(nèi)pDCs的數(shù)量出現(xiàn)了顯著增加。而且在免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果中,感染恒河猴腋窩LN和腹股溝LN內(nèi)pDCs的數(shù)量同樣出現(xiàn)了明顯的增加;結(jié)腸淋巴結(jié)中單位面積內(nèi)pDCs的數(shù)量有所降低,頜下淋巴結(jié)、腎門淋巴結(jié)、脾門淋巴結(jié)、腸旁淋巴結(jié)等組織中pDCs的數(shù)量變化并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。利用外周淋巴結(jié)的連續(xù)切片進(jìn)行T細(xì)胞、pDCs和HEV的免疫組化染色,結(jié)果顯示正常恒河猴淋巴結(jié)內(nèi)的pDCs散在分布于皮質(zhì)區(qū)內(nèi),而SHIVSF162P3感染猴外周淋巴結(jié)內(nèi)的大部分pDCs集中分布于靠近被膜的區(qū)域,但其周圍也有HEV存在。本論文通過流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)等方法,比較了正常恒河猴與SHIV感染恒河猴的外周血單個(gè)核細(xì)胞、脾臟和淋巴結(jié)內(nèi)pDCs數(shù)量的變化及其分布情況,揭示了 pDCs細(xì)胞與SHIV病毒感染間的關(guān)系,解析了 SHIV病毒感染后淋巴結(jié)內(nèi)pDCs的分布和轉(zhuǎn)移途徑,有助于我們對(duì)艾滋病病毒感染機(jī)體過程中pDCs細(xì)胞的組織分布、生物學(xué)特性和功能的深入了解。第二部分:THP-1單核細(xì)胞系向巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞分化的相關(guān)研究。由于原代巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞在體內(nèi)存在的數(shù)量較少,而且分離過程較繁瑣,因此目前多利用單核細(xì)胞系THP-1誘導(dǎo)分化出的Mφ和DCs代替原代細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)功能實(shí)驗(yàn)的研究。但是在細(xì)胞分化過程中仍有很多問題有待明確,如單獨(dú)使用PMA刺激THP-1細(xì)胞所分化而來的Mφ細(xì)胞的分化特征,以及不同方法刺激THP-1細(xì)胞定向分化為M1、M2型巨噬細(xì)胞和DCs細(xì)胞的差異等。本文主要針對(duì)以上兩個(gè)科學(xué)問題進(jìn)行了深入研究,首先將一部分細(xì)胞用PMA刺激THP-1細(xì)胞分化為THP-1-Mφ,再分別使用不同細(xì)胞因子將細(xì)胞繼續(xù)誘導(dǎo)成THP-1-M1、THP-1-M2和THP-1-DC;另一部分細(xì)胞用GM-CSF/M-CSF代替PMA進(jìn)行刺激,其余細(xì)胞因子的使用不變。在顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變,并用流式細(xì)胞術(shù)檢測各細(xì)胞主要CD分子表達(dá)的差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),PMA誘導(dǎo)分化成的THP-1-Mφ細(xì)胞變?yōu)橘N壁生長,細(xì)胞形態(tài)呈較規(guī)則的圓形或橢圓形;當(dāng)繼續(xù)分化為M1和M2后細(xì)胞仍貼壁生長,但細(xì)胞表面出現(xiàn)較明顯的突起。而且THP-1-Mφ表面與抗原提呈功能相關(guān)的CD分子的表達(dá)均較低,大部分呈陰性;而THP-1-M1和THP-1-M2細(xì)胞表面這些CD分子的表達(dá)均較高。因此可以認(rèn)為單獨(dú)使用PMA刺激THP-1細(xì)胞所分化而來的巨噬細(xì)胞抗原提呈能力較弱,基本處于靜息狀態(tài)。PMA和GM-CSF/M-CSF兩種方法誘導(dǎo)分化成的細(xì)胞形態(tài)差異較大,PMA方法誘導(dǎo)成的THP-1-M1、THP-1-M2和THP-1-DC細(xì)胞均貼壁生長;而GM-CSF/M-CSF方法刺激出的細(xì)胞中只有THP-1-DC細(xì)胞部分貼壁,M1和M2細(xì)胞仍呈懸浮生長。而且兩種方法誘導(dǎo)成的同種細(xì)胞對(duì)特異性CD分子的表達(dá)情況基本相同。THP-1-M1細(xì)胞表面CD80和CD86表達(dá)量顯著增加;THP-1-M2細(xì)胞高表達(dá)CD163和CD209;THP-1-DC細(xì)胞CD14表達(dá)量顯著降低,高表達(dá)CD80、CD86和CD11c。因此認(rèn)為兩種方法均能成功地誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞向不同細(xì)胞亞型分化,但是誘導(dǎo)出來的細(xì)胞在形態(tài)上存在一定差異,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇刺激方法。
[Abstract]:Human immunodeficiency syndrome ( AIDS ) is the abbreviation of acquired immunodeficiency syndrome ( AIDS ) , which is caused by human immunodeficiency virus ( HIV ) infection . The changes of pDCs in peripheral blood and lymph nodes of rhesus monkeys were investigated by flow cytometry and immunohistochemistry . The results showed that the number of pDCs in peripheral blood and lymph nodes of rhesus monkeys increased significantly . The expression of CD80 and CD209 in THP - 1 - M1 cells was significantly lower than that in THP - 1 - M1 cells .
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R512.91

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本文編號(hào)：1902225