本文選題：PCOS模型 + 脫氫表雄酮(DHEA)�。� 參考：《南京農(nóng)業(yè)大學》2015年碩士論文

【摘要】：多囊卵巢綜合征(PCOS)是一種育齡婦女常見的內(nèi)分泌紊亂綜合征,臨床表現(xiàn)高度異質(zhì)性,是由多基因遺傳參與和環(huán)境因素共同作用的結果,其發(fā)病機制和病因還不明確。近年來,對PCOS發(fā)病機制的研究中心逐漸轉移到分子生物學層面,發(fā)現(xiàn)包括抗苗勒氏管激素(AMH)、胰島素樣生長因子、腫瘤壞死因子、脂聯(lián)素、瘦素和內(nèi)脂素等許多細胞因子在內(nèi),都參與了 PCOS的發(fā)病過程,尤其AMH,除了參與性別分化,同時參與了卵子的發(fā)育、成熟、排卵、受精等過程。研究表明,血清中AMH不僅可以預測卵巢儲備功能(能力),還是體外受精-胚胎移植結局的獨立預測因子,AMH同時還是卵巢顆粒細胞腫瘤的重要標志物,作為診斷多囊卵巢綜合征的有利工具。本試驗通過構建大鼠PCOS模型,探討大鼠卵巢囊腫形成過程中,大鼠性腺等器官增重、性激素水平以及卵巢組織AMH及其受體mRNA變化關系,以增加對PCOS發(fā)病機制的了解。一、大鼠AMHR2基因可變剪接體鑒定及分析利用RT-PCR和基因克隆測序技術在大鼠卵巢組織中檢測到一種新的AMHR2 剪接體,命名為AMHR2 variant 1(AMHR2-SV1)。DNAMAN 序列比對發(fā)現(xiàn),AMHR2-SV1缺失137個堿基(第十外顯子)。利用NCBI ORFFinder和 ExPASy-ProtParam,預測AMHR2-SV1編碼429個氨基酸殘基,其編碼的蛋白質(zhì)分子量為45.9907 kDa。Conserved domains在線軟件分析表明:AMHR2-SV1蛋白序列比完整AMHR2蛋白序列缺少128個氨基酸,絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶結構域不完整。組織表達譜分析,在大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、子宮和卵巢中均檢測到AMHR2和AMHR2-SV1兩個轉錄本,AMHR2基因的參考轉錄本在大鼠的卵巢中高表達,在肝、脾和肺中表達較低,而AMHR2-SV1在卵巢中表達量最高,脾臟中表達量最低。因此推測,AMHR2表達受可變剪切機制的調(diào)控。AMHR2是AMH信號轉導的專一受體,在AMH信號轉導過程中發(fā)揮重要作用,而絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶結構域是將信號由細胞表面轉導至胞內(nèi)的重要結構域,提示AMHR2-SV1可能對AMH信號轉導發(fā)揮生物效應。二、大鼠PCOS模型構建及相關指標檢測采用頸部皮下注射脫氫表雄酮(DHEA)構建大鼠PCOS模型,探索大鼠卵巢囊腫形成過程中,大鼠性腺等器官、性激素水平的變化規(guī)律。選取性未成熟的雌性SD大鼠80只(21 d),隨機分為兩組:試驗組和對照組各40只。試驗組大鼠頸部皮下注射0.2 mL/d芝麻油(每100 g體重注射6 mg DHEA);對照組注射等量注射用油,預飼期2 d,正式期20 d。分別在試驗開始第5、10、15和20天稱取大鼠的體重、卵巢、子宮、肝臟、腎臟和脾臟的重量計算臟器指數(shù),采集血液備用。結果顯示,第15和20 d試驗組大鼠的體質(zhì)量高于對照組(P0.01);去除體質(zhì)量的影響后,試驗組大鼠子宮的質(zhì)量顯著高于對照組(P0.01),第5和10d卵巢質(zhì)量顯著高于對照組(P0.01)。試驗組血清AMH和雄激素(T)顯著高于對照組(P0.01或P0.05),第15和20 d血清P以及第20d血清LH和E2試驗組均顯著高于對照組(P0.01或P0.05)。試驗組卵巢AMH mRNA表達量高于對照組,第5和10d表達量差異顯著(P0.05)。不同日齡大鼠臟器指數(shù)動態(tài)變化提示,試驗組大鼠卵巢、子宮等器官在性發(fā)育早期得到優(yōu)先發(fā)育;血清AMH含量變化對外源性激素敏感,變化時間早于其他血清激素,可以作為檢測PCOS疾病發(fā)生的輔助指標。三PCOS大鼠AMH及其受體基因mRNA表達分析采用RT-PCR和實時熒光定量PCR技術對大鼠卵巢PCOS形成過程中AMH、AMHR2和AMHR-SV1mRNA在卵巢組織中的表達水平進行分析,結果如下:1.試驗組與對照組變化趨勢相同,在第10d短暫升高,隨后下降。試驗組與對照組比較,試驗組卵巢AMH mRNA表達量在第5和10天顯著高于對照組(P0.01)。2.試驗組AMHR2基因兩種轉錄本表達趨勢相同。與對照組比較,除第20天,表達量均低于對照組,AMHR2-SV1 mRNA表達量組間比較均差異顯著(P0.05 or P0.01);AMH2-SV1表達量,從第5天開始下降直至第15天(P0.05),第20天上升(P0.05);不同時間段AMHR2-complatemRNA表達量始終高于AMHR2-SV1(P0.05),但組內(nèi)差異不顯著(P0.05)。結論:在一定時間內(nèi),外源性DHEA可能會促進AMH mRNA表達,造成血液AMH升高;對AMHR2 mRNA同時有抑制和促進作用,尤其對AMHR2-SV1影響顯著,推斷可能與PCOS發(fā)生相關。
[Abstract]:In recent years , AMH R2 - SV1 has been identified and analyzed by means of RT - PCR and gene cloning and sequencing . AMH R2 - SV1 is an important marker for the diagnosis of polycystic ovary syndrome . The results showed that AMH 2 - SV1 was significantly higher than that of control group ( P0.01 ) . The results showed that AMH 2 - SV1 could exert biological effect on AMH signal transduction . AMH mRNA expression in AMH 2 - SV1 was higher than AMHR2 - SV1 ( P0.05 ) . AMH mRNA expression in AMH R2 - SV1 was significantly higher than that in AMHR2 - SV1 ( P0.05 ) . Conclusion : During a certain period of time , the expression of AMH mRNA in AMH R2 - SV1 was significantly higher than that of AMHR2 - SV1 ( P0.05 ) . Conclusion : At the same time , the influence of AMHR2 - SV1 on AMH R2 - SV1 may be associated with PCOS .

【學位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R711.75

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本文編號：1828402