本文選題：哮喘 + 氣道平滑肌細胞　； 參考：《暨南大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:氣道平滑肌表型轉(zhuǎn)換是哮喘氣道重塑的重要特征,而前期體外研究發(fā)現(xiàn)NF-k B信號通路對其表型轉(zhuǎn)化起到關(guān)鍵性作用。在此基礎(chǔ)上,本研究通過在體檢測哮喘氣道平滑肌細胞表型標(biāo)志物的改變特征及相關(guān)功能改變,探討NF-kB信號通路對其影響,同時明確干預(yù)NF-k B信號通路對哮喘氣道重塑、氣道高反應(yīng)性及慢性炎癥的作用,為尋找新的哮喘治療方法提供理論及實驗依據(jù)。方法:采用腹腔注射和重復(fù)霧化吸入卵清白蛋白的方法建立急性及慢性哮喘小鼠模型,NF-kB特異性抑制劑PDTC腹腔注射對哮喘小鼠進行干預(yù);采用BUXCO無創(chuàng)肺功能儀測定各組小鼠氣道高反應(yīng)性;HE染色觀察組織大體改變及炎癥浸潤度;Masson trichrome染色檢測膠原沉積情況;免疫組織化學(xué)檢測氣道平滑肌層厚度;通過形態(tài)學(xué)定量分析對比各組膠原面積及氣道平滑肌層厚度;α-SMA和PCNA免疫熒光檢測增殖細胞數(shù)量;RT-PCR檢測肺支氣管表型標(biāo)志物以及COL1A1mRNA表達量;Western-Blot檢測磷酸化P65和α-SMA蛋白表達量;RayBiotech蛋白芯片檢測血清中炎癥因子表達水平。結(jié)果:(1)急性及慢性哮喘小鼠氣道高反應(yīng)性指標(biāo)Penh值較對照組均顯著增高,而干預(yù)組較哮喘組顯著降低;(2)慢性哮喘小鼠平滑肌層面積較對照組顯著增高,干預(yù)組則有顯著緩解;急性哮喘小鼠平滑肌層增厚不顯著;(3)氣道膠原面積定量急性哮喘各組定量比較亦無顯著差別,慢性哮喘模型中,形態(tài)定量學(xué)分析發(fā)現(xiàn)哮喘組膠原面積顯著高于其對照組,而PDTC干預(yù)后較哮喘組膠原面積顯著減少;(4)免疫熒光染色未檢出氣道平滑肌與PCNA共表達,可見急性哮喘肺內(nèi)PCNA+的細胞數(shù)量較正常組明顯增多,主要位于氣道以及血管周圍,慢性哮喘小鼠未檢出增殖細胞;(5)通過qPCR發(fā)現(xiàn)慢性哮喘模型中,哮喘組α-SMA、calponin和SM-MHC較對照組顯著下降。急性哮喘小鼠模型中,只有calponin在哮喘組中顯著下調(diào),PDTC干預(yù)組在慢性和急性哮喘模型中均有緩解表型轉(zhuǎn)化的作用,然而calponin在慢性哮喘模型中的下降不能被PDTC干預(yù)逆轉(zhuǎn)。Western blot顯示PDTC干預(yù)后哮喘小鼠phospho-P65表達量顯著降低,同時α-SMA蛋白升高。(6)急性哮喘模型中,哮喘組血清G-CSF、IL-6、和IL-17相比正常對照組顯著增高,PDTC干預(yù)顯著降低了G-CSF和IL-6水平,但不影響IL-17。慢性哮喘模型中,哮喘組中只有IL-17和TNF-α顯著增高,TNF-α在干預(yù)組中顯著降低。結(jié)論:(1)哮喘模型小鼠氣道平滑肌表型轉(zhuǎn)化過程具有時序性,在急性哮喘期,收縮型物質(zhì)即開始減少,同時伴隨細胞功能的早期變化;慢性哮喘則減少更為顯著。(2)干預(yù)NF-kB通路一定程度上逆轉(zhuǎn)了哮喘氣道平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化;(3)干預(yù)NF-kB信號通路能一定程度緩解哮喘模型小鼠氣道重塑、氣道高反應(yīng)性及慢性炎癥等哮喘病理生理特征,可望成為哮喘治療的新靶點。
[Abstract]:Objective: phenotypic transformation of airway smooth muscle is an important feature of airway remodeling in asthma. In vitro studies have found that NF-k B signaling pathway plays a key role in phenotypic transformation. On this basis, the changes of phenotypic markers and related functional changes of airway smooth muscle cells of asthma were detected in vivo to investigate the effects of NF-kB signaling pathway on airway remodeling of asthma. At the same time, the effects of NF-k B signaling pathway on airway remodeling of asthma were investigated. The effects of airway hyperresponsiveness and chronic inflammation provide theoretical and experimental basis for finding new treatment methods for asthma. Methods: acute and chronic asthma models were established by intraperitoneal injection and repeated atomization inhalation of ovalbumin (ovalbumin). PDTC, a specific inhibitor of NF-kB, was injected intraperitoneally to treat asthmatic mice. BUXCO noninvasive pulmonary function instrument was used to detect airway hyperreactivity and HE staining in each group to observe the gross changes of the tissue and the degree of inflammatory infiltration. The collagen deposition was detected by Masson trichrome staining, and the thickness of airway smooth muscle layer was detected by immunohistochemistry. The area of collagen and thickness of airway smooth muscle in each group were compared by morphological quantitative analysis, the number of proliferating cells was detected by 偽 -SMA and PCNA immunofluorescence, the phenotype markers of lung bronchi were detected by RT-PCR and the expression of COL1A1mRNA was detected by Western-Blot phosphorylated p65 and 偽 -SMA protein were detected by Western-Blot. The expression of inflammatory factors in serum was detected by RayBiotech protein chip. Results (1) the airway hyperresponsiveness (Penh) of acute and chronic asthma mice was significantly higher than that of control group, while the area of smooth muscle layer in intervention group was significantly lower than that in asthma group) the area of smooth muscle layer in chronic asthmatic mice was significantly higher than that in control group, while that in intervention group was significantly alleviated. There was no significant difference in airway collagen area in acute asthma mice. In chronic asthma model, morphological quantitative analysis showed that the collagen area in asthma group was significantly higher than that in control group. However, compared with the control group, the area of collagen in PDTC group decreased significantly (P < 0.05). No co-expression of airway smooth muscle and PCNA was detected by immunofluorescence staining. It was found that the number of PCNA cells in the lung of acute asthma was significantly higher than that in the normal group, mainly located around the airway and blood vessels. In chronic asthma model, 偽 -SMAcalponin and SM-MHC in asthma group were significantly lower than those in control group. In acute asthma mice, only calponin significantly decreased phenotypic transformation in both chronic and acute asthma models. However, the decrease of calponin in chronic asthma model could not be reversed by PDTC intervention. Western blot showed that the expression of phospho-P65 in asthmatic mice after PDTC intervention was significantly decreased, while 偽 -SMA protein increased. Compared with the normal control group, the serum levels of G-CSF and IL-6 in asthma group were significantly increased. PDTC intervention significantly decreased the levels of G-CSF and IL-6, but did not affect IL-17. In chronic asthma model, only IL-17 and TNF- 偽 increased significantly in asthma group. Conclusion the phenotypic transformation of airway smooth muscle in asthmatic model mice has a time series. During the acute asthma period, the contractile substances begin to decrease and the cell function changes at the same time. On the other hand, the decrease of chronic asthma was more significant. (2) intervention of NF-kB pathway reversed the phenotypic transformation of airway smooth muscle cells in asthmatic mice to a certain extent. Intervention of NF-kB signaling pathway could alleviate airway remodeling in asthmatic mice to a certain extent. Airway hyperresponsiveness, chronic inflammation and other pathophysiological features of asthma are expected to be a new target for asthma treatment.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R562.25

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本文編號：1823450