發(fā)布時間：2018-04-27 18:35

  本文選題：類風濕關節(jié)炎 + 紅細胞　； 參考：《第三軍醫(yī)大學》2015年碩士論文

【摘要】：研究背景RFC-1與ABCB1是MTX出入細胞的關鍵轉運蛋白,很多研究者發(fā)現(xiàn)RFC-1G-80-A和ABCB-1 C 3435 T的基因多態(tài)性與MTX的療效和不良反應相關,MTX-PGs是MTX發(fā)揮藥效的主要活性成分。但是RFC-1 G-80-A和ABCB1 C 3435 T基因的多態(tài)性和MTX-PGs濃度關系未見報道,我們推測RFC-1 G-80-A和ABCB-1 C 3435 T可能通過影響MTX-PGs從而影響MTX的療效的不良反應。因此我們采用實時熒光定量PCR檢測重慶地區(qū)服用MTX治療的類風濕關節(jié)炎患者RFC-1 G-80-A及ABCB1 C3435 T多態(tài)性,研究其與RA患者紅細胞MTX-PGs濃度相關性,來探討RFC-1 G-80-A和ABCB-1 C 3435 T基因多態(tài)性影響甲氨蝶呤治療類風濕關節(jié)炎的療效和不良反應發(fā)生的機制。目的:建立酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測紅細胞中MTX-PGs濃度的方法,并研究RFC-1 G-80-A和ABCB-1 C 3435 T基因多態(tài)性與紅細胞內MTX-PGs濃度的相關性。來探討RFC-1 G-80-A和ABCB-1 C 3435 T基因多態(tài)性影響甲氨蝶呤治療類風濕關節(jié)炎的療效和不良反應發(fā)生的機制,為類風濕關節(jié)炎個體化治療提供理論依據(jù)。方法:1、收集2012年10月~2014年10月第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院風濕免疫科門診及住院中服用甲氨蝶呤的類風濕關節(jié)炎患者,按入選、排除標準篩選后入組,登記他們的人口學資料及MTX服用劑量,并采集患者患者服用甲氨蝶呤72小時后的靜脈血4ml。共收集患者95例,其中男18例,女77例。2、采用酶聯(lián)免疫吸附法測定測定類風濕關節(jié)炎患者的紅細胞中MTX-PGs濃度,用苯酚氯仿法提取RA患者全血基因DNA,選用FQ-PCR方法對RA患者RFC-1 G-80-A和ABCB-1 C 3435 T 2個SNP位點進行基因分型。3、采用多元線性回歸分析體重、劑量、體重指數(shù)、體表面積、單位體重口服劑量、單位體表面積口服劑量及年齡對紅細胞中MTX-PGs濃度的影響,采用單因素方差檢驗分析基因SNPs與藥物濃度的相關性。結果:1.建立了測定紅細胞內MTX-PGs濃度的酶聯(lián)免疫吸附檢測方法。MTX-PGs不受血漿中葉酸的干擾,在0.1ng/ml~10ng/ml之間有良好的線性關系(R2=0.9962),雙對數(shù)回歸方程為y=-0.4772X-0.1472(R2=0.9902),檢測靈敏度及,檢測下限分別為0.087ng/mL、0.2ng/mL。在這個實驗中,回收率為94.2%~112.8%,平均回收率:103%。RSD范圍為:7.2%~17.7%,平均RSD:RSD 13.5%。精密度實驗:批內RSD為:3.3%~8.7%,平均批內RSD為:6.5%。批間RSD為:7.6%~9.9%,平均批間RSD為:8.3%。2、95例RA患者的紅細胞內MTX-PGs濃度范圍為:59.9~149ng/ml,平均濃度為88.09±19.29ng/ml。年齡、性別、體重、體重指數(shù)和體表面積對MTX-PGs濃度無顯著影響,單位體重劑量和劑量與MTX-PGs濃度呈正相關(P=0.000,P=0.049)3、95例服用甲氨蝶呤的類風濕關節(jié)炎患者,RFC-1 G-80-A的基因型分布:(GG/AG/AA)為(32.5%/47.4%/20.0%),ABCB-1 C 3435 T基因型(TT/CT/CC)分布頻率:(18.9%/46.3%/34.7%),基因型分布均符合H-W平衡(χ2=1.309,P=0.595;χ2=0.654,P=0.721),樣本均具有群體代表性。4、RFC-1 G-80-A和ABCB1 C 3435 T不同基因型之間的MTX-PGs濃度無統(tǒng)計學差異,所有P值均大于0.05,說明在本研究中這RFC-1 G-80-A和ABCB1 C 3435 T這兩個位點的基因多態(tài)性不影響紅細胞內MTX-PGs濃度。結論:1、本研究建立的ELSIA測定MTX-PGs方法簡單、準確、應用性強,滿足臨床血藥濃度監(jiān)測的需要。2、重慶地區(qū)RA患者RFC-1 G-80-A基因的分布特點(GG/AG/AA):(32.5%/47.4%/20.0%),與漢族人群分布無統(tǒng)計學差異3、重慶地區(qū)RA患者ABCB1 C 3435 T基因的分布特點(TT/CT/CC):(18.9%/46.3%/34.7%)與漢族人群分布無統(tǒng)計學差異。4、RA患者紅細胞內MTX-PGs濃度范圍為59.9~149ng/ml,平均濃度為88.09±19.29ng/ml5、RA患者紅細胞內MTX-PGs濃度與年齡、性別、身高、體重指數(shù)不相關。6、RA患者紅細胞內MTX-PGs濃度與MTX使用劑量、單位體重劑量呈正相關。7、重慶地區(qū)RA患者RFC-1 G-80-A基因和ABCB1 C 3435 T基因多態(tài)性與紅細胞內MTX-PGs濃度不相關
[Abstract]:The association of RFC - 1 G - 80 - A and ABCB - 1 C 3435 T gene polymorphisms with MTX - PGs in patients with rheumatoid arthritis was studied . The average recovery rate of MTX - PGs in patients with RA was : The concentration of MTX - PGs in erythrocytes of RA patients was 59.9 锝，

本文編號：1811841