本文選題：肥胖 + NADPH�。� 參考：《江南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：肥胖是世界范圍內(nèi)的流行性疾病,能夠引發(fā)心血管疾病、2型糖尿病、血脂異常等一系列慢性疾病。NADPH是脂肪酸合成的還原力來源,主要由氧化磷酸戊糖途徑(PPP),異檸檬酸脫氫酶(IDH)、蘋果酸酶(ME)及亞甲基四氫葉酸脫氫酶(MTHFD)催化的反應(yīng)等提供。但是,哪一種還原力產(chǎn)生酶在脂肪形成中發(fā)揮重要的作用卻不明確。為探究脂肪形成所需NADPH的來源,本課題采用肥胖小鼠模型和脂肪細(xì)胞模型,利用熒光定量PCR(RT-qPCR)分析脂肪樣本中NADPH產(chǎn)生酶基因的轉(zhuǎn)錄水平變化,并對轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生顯著上調(diào)的關(guān)鍵基因在脂肪細(xì)胞中進(jìn)行基因沉默,確定產(chǎn)NADPH關(guān)鍵基因?qū)?xì)胞脂肪形成的影響,主要結(jié)論如下:(1)ob/ob(瘦素缺陷型)和db/db(瘦素受體缺陷型)肥胖小鼠脂肪組織的RTqPCR結(jié)果顯示,MTHFD2、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)、6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(PGD)及ME1基因轉(zhuǎn)錄水平均發(fā)生上調(diào);膳食誘導(dǎo)肥胖小鼠(DIO)中MTHFD2、IDH1、G6PD以及PGD基因轉(zhuǎn)錄水平都上調(diào)。結(jié)果表明,葉酸代謝途徑中MTHFD2、PPP途徑中G6PD、PGD以及ME1可能是小鼠肥胖形成中NADPH的主要來源。(2)小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(op9)誘導(dǎo)分化后的RT-qPCR結(jié)果顯示,乙醛脫氫酶家族成員4A1(ALDH4A1)、MTHFD2、ME1、ME3、G6PD、PGD基因轉(zhuǎn)錄水平均顯著上調(diào)。脂肪細(xì)胞和肥胖小鼠模型RT-qPCR結(jié)果共同表明,葉酸代謝途徑中MTHFD2、PPP途徑中PGD以及ME1可能是脂肪形成所需NADPH的重要來源。(3)對篩選到的關(guān)鍵基因進(jìn)行基因沉默,發(fā)現(xiàn)MTHFD2沉默組脂肪細(xì)胞脂滴積累明顯減少,總脂肪酸含量及NADPH含量顯著減少、脂肪生成相關(guān)因子轉(zhuǎn)錄水平下降。因此,MTHFD2可能是脂肪形成所需的NADPH來源,葉酸代謝途徑可能在脂質(zhì)合成中具有重要作用。進(jìn)一步采用抑制劑驗證葉酸代謝途徑對脂肪細(xì)胞分化的作用,結(jié)果顯示,葉酸合成抑制劑(DAHP)和葉酸代謝平衡抑制劑(TMP)均對脂肪細(xì)胞的增殖和分化具有重要作用。結(jié)果驗證了MTHFD2是脂肪形成所需的NADPH來源,并證實葉酸代謝途徑對細(xì)胞的脂肪形成具有重要影響。
[Abstract]:Obesity is a worldwide epidemic disease, which can cause cardiovascular disease type 2 diabetes, dyslipidemia and a series of chronic diseases. NADPH is the source of fatty acid synthesis.It is mainly provided by the oxidation of pentose phosphate pathway, isocitrate dehydrogenase (IDH), malate enzyme (MEE) and methylene tetrahydrofolate dehydrogenase (MTHFDs) catalyzed reactions.However, it is not clear which reductase plays an important role in fat formation.In order to explore the source of NADPH needed for fat formation, we used fat mouse model and adipocyte model to analyze the transcriptional level of NADPH producing enzyme gene in fat samples by fluorescence quantitative PCR RT-qPCR.Gene silencing of the key genes, which significantly up-regulated transcription level, was carried out in adipocytes to determine the effect of key genes producing NADPH on cell adipogenesis.The main conclusions were as follows: the RTqPCR results of adipose tissue of obese mice with 1 / 1 / 1 / 1 / 1 / 1 / 1 / 1 / 1 / 1 / 1 / 1 / 1 / 1 / 2 and / or / or / and / or / or / or db- / dbb of obese mice showed that the levels of MTHFD2, G6PDGD6 and ME1 gene transcription were up-regulated in adipose tissues of obese mice.The G6PD and PGD gene transcription levels were up-regulated in Dietary induced obese mice.The results showed that G6PD-PGD and ME1 in the MTHFD2PPP pathway of folic acid metabolism pathway may be the main source of NADPH in obese mice.The transcriptional level of MTHFD2ME1ME3ME3G6PDD gene was significantly up-regulated in ALDH4A1 family member of acetaldehyde dehydrogenase family.The RT-qPCR results of adipocytes and obese mice model showed that PGD and ME1 in the MTHFD2PPP pathway of folic acid metabolism pathway may be an important source of NADPH for adipogenesis.It was found that in MTHFD2 silencing group, lipid droplet accumulation, total fatty acid content and NADPH content were significantly decreased, and the transcription level of adipogenic related factors was decreased.Therefore, MTHFD2 may be the source of NADPH for fat formation, and folic acid metabolism may play an important role in lipid synthesis.The effect of folic acid metabolism pathway on adipocyte differentiation was further verified by inhibitors. The results showed that both folic acid synthesis inhibitor (DAHP) and folic acid metabolic balance inhibitor (TMP) played an important role in the proliferation and differentiation of adipocytes.The results demonstrated that MTHFD2 was the NADPH source for adipogenesis and that folic acid metabolism pathway had an important effect on the adipogenesis of cells.
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R589.2

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本文編號：1770589