本文選題：動(dòng)脈粥樣硬化 + 高磷血癥�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：第一部分高磷血癥通過(guò)誘導(dǎo)SCAP功能失調(diào)促進(jìn)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化目的:高磷血癥是慢性腎臟病患者動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病的重要危險(xiǎn)因素,其促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的分子機(jī)制不清楚。固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2(SREBP2)裂解激活蛋白(SCAP)是細(xì)胞內(nèi)的膽固醇敏感器,在反饋性調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)平衡中具關(guān)鍵作用。多項(xiàng)研究表明:病理狀態(tài)下SCAP功能失調(diào)可致多種外周細(xì)胞內(nèi)膽固醇異常聚集。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)建立ApoE-/-小鼠高磷血癥模型,探討高磷狀態(tài)下膽固醇敏感器SCAP功能狀態(tài)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的影響及其分子機(jī)制。方法:8周齡雄性ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為:正常飲食組(Chow組,含磷0.6%,n=8)、高磷飲食組(h P組,含磷1.6%,n=8)組、高磷飲食聯(lián)合司維拉姆組(h PS組,n=12)以及高磷血癥司維拉姆治療組(h PST組,n=8)。高磷飲食聯(lián)合司維拉姆組給予含有3%碳酸司維拉姆的高磷飲食,高磷血癥司維拉姆治療組則先給予高磷飲食喂養(yǎng)8周成功建立高磷血癥,再繼續(xù)給予含有3%碳酸司維拉姆的高磷飲食。SPF級(jí)喂養(yǎng)共16周時(shí)處死小鼠,檢測(cè)血鈣、磷、尿素氮、血脂等生化指標(biāo),制備主動(dòng)脈連續(xù)冰凍切片并行油紅O染色評(píng)價(jià)粥樣硬化斑塊負(fù)荷,行免疫組化染色以及Western blot檢測(cè)SCAP、SREBP2、羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGCo AR)和低密度脂蛋白受體(LDLr)水平。結(jié)果:高磷飲食喂養(yǎng)8周時(shí),ApoE-/-小鼠血磷水平顯著高于普通飲食組,表明小鼠已出現(xiàn)高磷血癥。喂養(yǎng)16周時(shí),高磷飲食組小鼠血磷仍顯著高于普通飲食組(P0.05),高磷飲食聯(lián)合司維拉姆組小鼠血磷較高磷飲食組明顯降低(P0.05),但高磷血癥司維拉姆治療組血磷仍顯著高于普通飲食組,且與高磷飲食組比較無(wú)差別。血尿素氮、血脂等指標(biāo)在四組小鼠間無(wú)顯著差異。主動(dòng)脈根部連續(xù)冰凍切片油紅O染色及斑塊定量分析顯示:高磷飲食組小鼠粥樣斑塊負(fù)荷(以斑塊面積/血管截面積表示)顯著大于正常飲食組和高磷飲食聯(lián)合司維拉姆組(P0.05),但與高磷血癥司維拉姆治療組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。免疫組織化學(xué)染色與Western blot檢測(cè)結(jié)果表明:高磷飲食組與高磷血癥司維拉姆治療組小鼠N-SREBP2、HMGCo AR、LDLr及SCAP蛋白水平明顯高于普通飲食組及高磷飲食聯(lián)合司維拉姆組。結(jié)論:高磷血癥通過(guò)上調(diào)血管組織細(xì)胞內(nèi)SCAP蛋白水平,使其異常運(yùn)載SREBP2從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)至高爾基體并經(jīng)酶解釋放其氨基端片段N-SREBP2,后者轉(zhuǎn)位入核并與其靶基因啟動(dòng)子上游的SRE結(jié)合,上調(diào)LDLr與HMGCo AR等靶基因的轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)血漿中LDL經(jīng)LDLr攝入細(xì)胞內(nèi),同時(shí)增加細(xì)胞內(nèi)源性膽固醇合成,最終促進(jìn)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展�？诜捉Y(jié)合劑碳酸司維拉姆可有效預(yù)防高磷飲食引起的高磷血癥并減輕動(dòng)脈粥樣硬化病變,但在已形成持續(xù)高磷血癥的小鼠,碳酸司維拉姆干預(yù)效果不理想,這可能與持續(xù)高磷血癥激活PTH、FGF-23等代償機(jī)制有關(guān)。第二部分高磷環(huán)境下膽固醇敏感器SCAP功能失調(diào)促進(jìn)巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇蓄積目的:觀察高磷環(huán)境對(duì)巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇積聚的影響與分子機(jī)制。方法:將PMA誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞分為對(duì)照組(磷1.0mmol/L)、高磷處理組(磷3.0 mmol/L)、磷甲酸鈉(PFA)處理組(PFA1.0 mmol/L)以及高磷聯(lián)合PFA處理組,無(wú)血清培養(yǎng)基中處理24小時(shí)后,油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)中性脂質(zhì)分布,酶法定量測(cè)定細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量,Real time-PCR法測(cè)細(xì)胞內(nèi)羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGCo AR)、低密度脂蛋白受體(LDLr)、固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)m RNA表達(dá),Western blot法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)SCAP、LDLr、HMGCo AR及核內(nèi)固醇調(diào)節(jié)原件結(jié)合蛋白2(N-SREBP2)蛋白水平。結(jié)果:與對(duì)照組相比,高磷處理組巨噬細(xì)胞內(nèi)中性脂質(zhì)明顯聚集,高磷處理可顯著增加細(xì)胞內(nèi)總膽固醇與膽固醇酯的含量(P0.05),這種作用可被細(xì)胞表面鈉磷轉(zhuǎn)運(yùn)體pit-1的特異性阻斷劑PFA所阻斷(高磷聯(lián)合PFA處理組)(P0.05)。高磷處理組巨噬細(xì)胞LDLr、HMGCo AR m RNA與蛋白表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組(P0.01),同時(shí)細(xì)胞核內(nèi)N-SREBP2水平也明顯增高,加入PFA(高磷聯(lián)合PFA處理組)可抑制上述效應(yīng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn):高磷處理組巨噬細(xì)胞內(nèi)控制SREBP2轉(zhuǎn)位激活的關(guān)鍵伴侶分子SCAP蛋白水平明顯增高(P0.05),但其m RNA表達(dá)在各組間無(wú)顯著差異(P0.05),上述變化可被PFA阻斷。結(jié)論:高磷環(huán)境下,鈉磷轉(zhuǎn)運(yùn)體Pit-1介導(dǎo)磷離子進(jìn)入巨噬細(xì)胞內(nèi),并通過(guò)基因轉(zhuǎn)錄后機(jī)制增加膽固醇敏感器SCAP蛋白水平,誘導(dǎo)其功能失調(diào),促使其從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)異常轉(zhuǎn)運(yùn)SREBP2至高爾基體進(jìn)行裂解激活,產(chǎn)生過(guò)多N-SREBP2,后者轉(zhuǎn)位入核促進(jìn)HMGCo AR和LDLr表達(dá),使細(xì)胞內(nèi)源性膽固醇合成和外源性LDL經(jīng)LDLr攝入增加,最終導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)膽固醇異常集聚。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of SCAP function on atherosclerosis in patients with chronic renal disease by inducing SCAP dysfunction : hyperphosphatemia is an important risk factor for atherosclerotic cardiovascular disease in chronic renal disease . Results : The levels of SCAP protein in high - phosphorus diet group were significantly higher than those in normal diet group and high - phosphorus diet group ( P0.05 ) . The results showed that the level of intracellular total cholesterol and cholesterol ester was significantly higher than that of the control group ( P0.05 ) . The results showed that the level of intracellular total cholesterol and cholesterol ester was significantly increased in high P treatment group ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5;R589

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本文編號(hào)：1761499