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自身免疫性甲狀腺病外周血Treg細(xì)胞microRNA表達(dá)譜及尿酸的相關(guān)分析

發(fā)布時(shí)間:2016-11-15 16:26

  本文關(guān)鍵詞:自身免疫性甲狀腺病外周血Treg細(xì)胞microRNA表達(dá)譜及尿酸的相關(guān)分析,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


《山東大學(xué)》 2013年

自身免疫性甲狀腺病外周血Treg細(xì)胞microRNA表達(dá)譜及尿酸的相關(guān)分析

張榮榮  

【摘要】:背景:隨著人們工作生活節(jié)奏加快,和壓力的增加,近年來自身免疫性甲狀腺疾病(Autoimmune Thyroid Disease, AITD)的發(fā)病率正呈逐年上升趨勢(shì),Graves病和橋本氏甲狀腺炎是兩種最常見的自身免疫性甲狀腺疾病,其發(fā)病機(jī)制的研究成為目前關(guān)注的焦點(diǎn)。諸多研究報(bào)道,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(CD4+CD25+T regulatory cells, Tregs)在Graves病(Graves Disease, GD)的發(fā)病中起重要作用,在活動(dòng)期GD病人中存在treg細(xì)胞缺陷。MicroRNAs (miRNAs)在treg細(xì)胞中廣泛表達(dá),并且與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)。我們通過對(duì)比GD病人和正常人來確定GD病人外周血treg細(xì)胞中miRNA的表達(dá)譜是否發(fā)生改變,希望能夠?yàn)镚D自身免疫異常的發(fā)生機(jī)制,特別是treg細(xì)胞功能異常的機(jī)制提供線索,并揭示miRNA在自身免疫調(diào)控中的作用和意義。此外,自身免疫調(diào)控異常往往會(huì)引起一系列細(xì)胞功能的異常進(jìn)而導(dǎo)致糖、脂和核酸等物質(zhì)代謝紊亂,而這些代謝異常可能會(huì)進(jìn)一步加重自身免疫異常,從而形成惡性循環(huán)。AITD中的橋本氏甲狀腺炎可出現(xiàn)一過性甲亢,晚期出現(xiàn)甲減,且其導(dǎo)致的自身免疫性甲減在所有導(dǎo)致甲減的病因中占有相當(dāng)大的比例。另有研究顯示甲狀腺功能異常與嘌呤核苷酸代謝有明顯的相關(guān)性,甲亢及甲減患者均存在高尿酸血癥,但甲減患者中高尿酸血癥及痛風(fēng)的發(fā)病率增加更明顯。這些都表明AITD可能在嘌呤核苷酸代謝紊亂的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。為此我們又進(jìn)一步觀察了甲減患者臨床血尿酸水平并對(duì)相關(guān)因素進(jìn)行分析,初步探討了甲減與嘌呤核苷酸代謝之間的關(guān)系。 方法:研究一:選擇15例未經(jīng)治療的GD初發(fā)患者(GD組)和10例正常對(duì)照(NC組),詳細(xì)記錄一般情況、病史以及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果。GD組隨機(jī)分為3個(gè)亞組(GD1、GD2、GD3),每組5人,女:男=4:1;NC組也隨機(jī)分為3個(gè)亞組(NC1、NC2、NC3),其中NC2組4人,其余兩組3人,NC1、NC2組各一個(gè)男性,NC3組無男性。從各組中抽取外周靜脈血,應(yīng)用Ficoll密度梯度離心法分離出單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCS)再應(yīng)用免疫磁珠法分選treg細(xì)胞,流式細(xì)胞儀驗(yàn)證分選細(xì)胞的純度。提取每個(gè)亞組患者treg細(xì)胞的RNA。為了平衡個(gè)體差異因素對(duì)結(jié)果的影響,降低結(jié)果誤差,將同一亞組內(nèi)提取的RNA混合作為一個(gè)樣品池,進(jìn)行低密度TaqMan miRNA芯片表達(dá)譜分析。GD或NC組中的三個(gè)亞組分別作為三個(gè)生物學(xué)重復(fù),便于應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析芯片結(jié)果。六個(gè)亞組,六個(gè)樣品池,共有六張芯片,之后再應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析六個(gè)亞組芯片結(jié)果,對(duì)比GD組和正常對(duì)照組芯片結(jié)果,找出差異表達(dá)的miRNA,并探討其與自身免疫及GD的關(guān)系。 研究二:測(cè)定36例原發(fā)性甲減患者的甲狀腺功能(FT3、FT4和TSH)、甲狀腺自身抗體(Anti-TG、Anti-TPO和TRAb)、血尿酸(UA)、血脂(TG、TC、LDL-C、HDL-C)同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素(Cys)、β2微球蛋白(P2-MG)以及24小時(shí)尿尿酸定量(24hUA),與20例健康對(duì)照組進(jìn)行比較,且對(duì)相關(guān)因素進(jìn)行單因素分析。甲減患者根據(jù)Anti-TG、Anti-TPO和TRAb存在與否分為自身免疫性甲減(27例)和非自身免疫性甲減(9例)兩個(gè)亞組,并行亞組間比較。 結(jié)果:研究一:1.各組年齡無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;2.GD組FT3、FT4、TRAb明顯高于,TSH明顯低于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩組TGAb(?)(?)TPOAb差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以上指標(biāo)在GD1、GD2、GD3三組內(nèi)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,在NC1、NC2、NC3三組內(nèi)也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,各組內(nèi)生物學(xué)重復(fù)性好;3.流式細(xì)胞儀驗(yàn)證細(xì)胞純度為88.96%;4.低密度TaqMan miRNA芯片結(jié)果分析:與正常對(duì)照組相比,GD組存在多個(gè)表達(dá)差異顯著的miRNA,其中表達(dá)水平明顯上調(diào)2倍以上者為:has-miR-106b、has-miR-155(?)(?)has-miR-181a,明顯下調(diào)2倍以上者為:has-miR-16和has-miR-146a。很多研究已經(jīng)表明這些niRNA均與treg細(xì)胞功能、自身免疫調(diào)控異常以及GD等自身免疫疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切; 研究二:與健康對(duì)照組比較,甲減組TSH、TC、TG、LDL-C、UA、Hcy、Cys和β2-MG明顯高于對(duì)照組,而FT3、FT4、HDL-C和24hUA顯著低于對(duì)照組,P均0.05;單因素相關(guān)分析顯示,甲減患者UA水平與TSH、TC、TG及Hcy呈顯著正相關(guān),與FT3、FT4、HDL呈顯著負(fù)相關(guān);兩亞組之間甲狀腺功能及抗體、TC、LDL-C、UA(?)(?)24hUA也有顯著性差異。 結(jié)論:1.本研究首次發(fā)現(xiàn)GD患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞內(nèi)microRNAs表達(dá)譜存在差異表達(dá),推測(cè)這些差異表達(dá)的rnicroRNAs,通過影響treg細(xì)胞正常發(fā)揮其免疫調(diào)控功能,從而導(dǎo)致GD的發(fā)生。 2.本研究運(yùn)用低密度TaqMan miRNA芯片技術(shù)對(duì)GD患者外周血treg細(xì)胞相關(guān)miRNA進(jìn)行了初步篩查,這在國(guó)內(nèi)外尚屬首次,為將來進(jìn)一步深入研究GD發(fā)生發(fā)展的機(jī)制奠定了重要基礎(chǔ),并提供了有價(jià)值的線索。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)has-miR-106b、has-miR-155、has-miR-181a、has-miR-16和has-miR-146a在GD患者外周血treg細(xì)胞中存在差異表達(dá),查看既往文獻(xiàn),has-miR-155、has-miR-146a(?)(?)has-miR-106b都已被證實(shí)與treg細(xì)胞功能調(diào)控有關(guān),并在多種自身免疫性疾病中發(fā)生差異表達(dá)。而has-miR-181a和has-miR-16是新發(fā)現(xiàn)的與treg細(xì)胞相關(guān)的miRNA,這為后續(xù)研究提供了重要思路。 3.甲減患者更容易出現(xiàn)高尿酸血癥,單因素相關(guān)分析顯示甲減患者UA水平與TSH、TC、TG及Hcy呈顯著正相關(guān),與FT3、FT4、HDL呈顯著負(fù)相關(guān),證明甲減患者出現(xiàn)血尿酸增高與甲狀腺激素減少、脂代謝紊亂、高同型半胱氨酸有關(guān)。自身免疫性甲減比非自身免疫性甲減血尿酸水平更高提示自身免疫異常也在高尿酸血癥的發(fā)生中也發(fā)揮著重要作用。

【關(guān)鍵詞】:
【學(xué)位授予單位】:山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號(hào)】:R581.9
【目錄】:

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9 廣東省人民醫(yī)院內(nèi)分泌科 陳重;[N];健康時(shí)報(bào);2010年

10 特邀專家 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院內(nèi)分泌科主任 徐梓輝 副教授 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院內(nèi)分泌科 馮曉麗 博士 記者 江林 曾理;[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 田易;組蛋白的甲基化修飾在人Treg細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)節(jié)中作用機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 劉英姿;Treg細(xì)胞和IL-18在腦膠質(zhì)瘤中的作用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

3 黃慧;結(jié)節(jié)病患者Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的表達(dá)水平及糖皮質(zhì)激素治療干預(yù)的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 王婷;眼內(nèi)Foxp3~+Treg細(xì)胞的上游信號(hào)調(diào)控機(jī)制及其與眼免疫赦免的關(guān)系[D];青島大學(xué);2011年

5 秦琨;腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞對(duì)Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞作用機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

6 于璟;甲狀腺功能與抑郁障礙關(guān)系的研究[D];大連理工大學(xué);2013年

7 張燕;腫瘤免疫治療中CTL細(xì)胞、Treg細(xì)胞及其相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

8 王華英;Th17和Treg細(xì)胞在急性肝損傷模型及腸道菌群失調(diào)中的作用研究[D];浙江大學(xué);2011年

9 劉卉;褪黑素對(duì)小鼠胃癌抑制作用及其與CD4~+CD25~+Treg細(xì)胞和TGF-β信號(hào)通路的關(guān)系[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

10 劉芳芳;腫瘤浸潤(rùn)Treg細(xì)胞的化療敏感性及其與乳腺癌預(yù)后關(guān)系的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張榮榮;自身免疫性甲狀腺病外周血Treg細(xì)胞microRNA表達(dá)譜及尿酸的相關(guān)分析[D];山東大學(xué);2013年

2 褚雨霆;復(fù)方浙貝顆粒對(duì)難治性急性白血病外周血Treg細(xì)胞及骨髓細(xì)胞影響的臨床觀察[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

3 山秀杰;甲減患者妊娠期間甲狀腺激素治療劑量變化的觀察研究[D];吉林大學(xué);2011年

4 都靜;于世家教授治療原發(fā)性甲狀腺功能減退癥經(jīng)驗(yàn)總結(jié)[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2011年

5 楊希;原發(fā)性甲狀腺功能減退癥血清Aβ40及炎性介質(zhì)與腦功能障礙的關(guān)系[D];青島大學(xué);2011年

6 張靖;補(bǔ)中益氣湯對(duì)甲減腎損害大鼠腎功能形態(tài)及內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2012年

7 亓傳旺;慢性丙型肝炎抗病毒治療對(duì)甲狀腺功能的影響[D];吉林大學(xué);2013年

8 秦丹丹;原發(fā)性甲狀腺功能減退癥與肌酶的相關(guān)性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

9 吳紅玉;~(131)I治療甲亢后早發(fā)甲減患者血脂水平的變化與干預(yù)方法的研究[D];青島大學(xué);2010年

10 陸翔;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及細(xì)胞因子的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年


  本文關(guān)鍵詞:自身免疫性甲狀腺病外周血Treg細(xì)胞microRNA表達(dá)譜及尿酸的相關(guān)分析,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



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