本文選題：Apelin-36　切入點(diǎn)：胰島素　出處：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的：1.探討Apelin是否通過(guò)參與葡萄糖毒性作用機(jī)制引起胰島素釋放減少。2.研究Apelin與PDX-1蛋白合成的關(guān)系。方法：復(fù)蘇并培養(yǎng)好的胰島β細(xì)胞株小鼠NIT-1細(xì)胞接種于25ml培養(yǎng)瓶(1×107cells/瓶),在各不同濃度葡萄糖的含血清RPMI 1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)3天。隨機(jī)分組如下：(1)正常對(duì)照組1：葡萄糖的濃度為5.6 mmol/L。(2)正常對(duì)照組2：葡萄糖的濃度為5.6 mmol/L+Apelin-36(1μmol/L)。(3)高糖組1：葡萄糖的濃度為16.7mmol/L。(4)高糖組2：葡萄糖的濃度為16.7mmol/L+Apel in-36(1μmol/L)。(5)極高糖組1：葡萄糖的濃度為33.3mmol/L。(6)極高糖組2：葡萄糖的濃度為33.3mmol/L+Apelin-36(1μmol/L)。然后進(jìn)行：1.基礎(chǔ)Ins釋放試驗(yàn)：將各組胰島β細(xì)胞移到1 ml離心管(1×106cells/管)中,預(yù)孕育在HBSS液(37℃孕育60分鐘)中,用PBS洗滌2次后,在含葡萄糖濃度為5.6 mmol/L的HBSS緩沖液中37℃預(yù)孕育60min,棄掉緩沖液,然后將細(xì)胞置于1 ml含葡萄糖濃度為5.6 mmol/L(基礎(chǔ))和葡萄糖濃度為16.7mmol/L(葡萄糖刺激)的HBSS緩沖液中37℃育1 h,收集反應(yīng)液,然后用ELISA法測(cè)定Ins含量。2.細(xì)胞內(nèi)Ins含量測(cè)定：取各組培養(yǎng)好的小鼠NIT-1細(xì)胞到1ml離心管(1×106cells/管),進(jìn)行反復(fù)的冷凍溶解破碎然后以酸化乙醇溶液進(jìn)行抽提,4℃孵育16～24 h,用ELISA法測(cè)定Ins含量。3.PDX-1蛋白的表達(dá)：收集各組NIT-1細(xì)胞進(jìn)行涂片,用4%的多聚甲醛溶液固定20 min, PBS沖洗3次每次3min,按照S/P免疫組化試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。在顯微鏡下計(jì)算各組細(xì)胞的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。4.PDX-1mRNA的表達(dá)：取各組新鮮的小鼠NIT細(xì)胞涂片,用4%多聚甲醛/0.1%DEPC/0.1mmol/LPBS (pH 7.2～7.6)固定20-30min,按照PDX-1原位雜交試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,在顯微鏡下計(jì)算各組細(xì)胞的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。結(jié)果：①與正常組1比較,高糖組1和極高糖組1的基礎(chǔ)和刺激后胰島素分泌、細(xì)胞內(nèi)胰島素均明顯減少(P0.05)：②加Apelin的正常組2的基礎(chǔ)和刺激后胰島素分泌、細(xì)胞內(nèi)胰島素與正常組1相比,無(wú)明顯差異(P0.05)；③加Apelin的高糖組2和極高糖組2的細(xì)胞內(nèi)胰島素、基礎(chǔ)和刺激后胰島素分泌分別較高糖組1和極高糖組1明顯下降(P0.05)；④與正常組1比較,高糖組1和極高糖1的PDX-1蛋白表達(dá)下降(P0.05)；⑤加Apelin的正常組2的PDX-1蛋白表達(dá)與正常組1相比,無(wú)明顯差異(P0.05)；⑥加Apelin的高糖組2和極高糖組2的PDX-1蛋白表達(dá)分別較高糖組1和極高糖組1明顯下降(P0.05)；⑦各濃胰島素水平與PDX-1蛋白表達(dá)呈正相關(guān),與PDX-1mRNA表達(dá)無(wú)關(guān)；⑧各組間PDX-1mRNA表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：Apelin可能通過(guò)降低PDX-1蛋白表達(dá),參與葡萄糖毒性作用,引起胰島素分泌減少,從而在糖尿病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用。
[Abstract]:Purpose 1.To investigate whether Apelin can induce insulin release decrease by taking part in glucose toxicity mechanism. 2. 2.To study the relationship between Apelin and PDX-1 protein synthesis.Methods: the NIT-1 cells of mouse islet 尾 cell line were inoculated into 25ml culture flask (1 脳 107cells/) and cultured in serum RPMI 1640 culture medium with different concentrations of glucose for 3 days.The concentration of glucose was 33.3 mmol / L 路L ~ (-6). The concentration of glucose was 33.3mmol/L Apelin-36(1 渭 mol / L ~ (-1).Then proceed to 1: 1.Basal Ins release test: the islet 尾 cells in each group were transferred to 1 ml centrifuge tube (1 脳 106cells/ tube), preinoculated in HBSS solution at 37 鈩，

本文編號(hào)：1730201