發(fā)布時(shí)間：2018-03-29 11:41

  本文選題：PHB　切入點(diǎn)：心肌細(xì)胞　出處：《中國(guó)免疫學(xué)雜志》2017年12期

【摘要】：目的:探討抗增殖蛋白(PHB)對(duì)高糖誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞凋亡的影響以及機(jī)制研究。方法:選取p CDNA3-PHB、p CDNA3-NC重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和高糖干預(yù)心肌細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為4組:正常對(duì)照組(Control組)、高糖刺激組(HG組)、高糖+空載體組(HG+p CDNA3-NC組)、高糖加p CDNA3-PHB重組質(zhì)粒組(HG+p CDNA3-PHB);Western blot檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中PHB蛋白、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2相關(guān)X蛋白(Bax)/B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、剪切的半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(c-caspase3)、蛋白激酶B(AKt)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKt)蛋白的表達(dá)量,二氫乙啶(DHE)染色法檢測(cè)高糖環(huán)境下心肌細(xì)胞內(nèi)的活性氧(ROS)水平,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞中TNF-αmRNA和IL-6 mRNA含量的測(cè)定,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率。結(jié)果:p CDNA3-PHB重組質(zhì)�？墒筆HB表達(dá)量增加;與Control組相比,HG組、HG+p CDNA3-NC組、HG+p CDNA3-PHB組細(xì)胞凋亡率顯著增高(P0.05);與HG組相比,HG+p CDNA3-NC組細(xì)胞凋亡率變化不顯著(P0.05);HG+p CDNA3-PHB組細(xì)胞凋亡率明顯降低(P0.05)。與Control組相比,HG組、HG+p CDNA3-NC組、HG+p CDNA3-PHB組細(xì)胞內(nèi)ROS的水平、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、Bax/Bcl-2的相對(duì)表達(dá)量、c-caspase3(P0.05)蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著增高;與HG組相比,HG+p CDNA3-NC組細(xì)胞內(nèi)ROS的水平(P0.05)、TNF-αmRNA(P0.05)、IL-6 mRNA(P0.05)、Bax/Bcl-2的相對(duì)表達(dá)量(P0.05)、c-caspase3蛋白相對(duì)表達(dá)量(P0.05)無(wú)明顯差異;但p CDNA3-PHB組細(xì)胞中ROS的水平(P0.05)、TNF-αmRNA(P0.05)、IL-6 mRNA(P0.05)、Bax/Bcl-2的相對(duì)表達(dá)量(P0.05)、c-caspase3(P0.05)蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯降低。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析顯示,各組細(xì)胞中AKt蛋白的相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著差異(P0.05)。經(jīng)比較后,HG組、HG+p CDNA3-NC組、HG+p CDNA3-PHB組心肌細(xì)胞中p-AKt蛋白的相對(duì)表達(dá)量顯著低于Control組(P0.05);HG+p CDNA3-NC組心肌細(xì)胞中p-AKt蛋白的相對(duì)表達(dá)量與HG組間無(wú)顯著差異(P0.05);但HG+p CDNA3-PHB組心肌細(xì)胞中p-AKt蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯高于HG組(P0.05)。結(jié)論:PHB過(guò)表達(dá)可抑制高糖環(huán)境下H9C2心肌細(xì)胞的凋亡和炎癥反應(yīng),主要是通過(guò)調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路、ROS、Bax/Bcl-2、c-caspase3蛋白的水平,為糖尿病心肌病的治療提供新的思路與方法。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect and mechanism of anti-proliferating protein (CDNA3-NC) on apoptosis of H9C2 cardiomyocytes induced by high glucose. Methods: pCDNA3-PHBP CDNA3-NC recombinant plasmid was used to transfect cardiomyocytes. The experiment was divided into four groups: control group of normal control group, HG group of high glucose stimulation group, HP CDNA3-NC group of high sugar empty vector group, and high sugar plus p CDNA3-PHB recombinant plasmid group. The PHB protein of B cell lymphoma was detected by Western blot after transfection. / Leukemia 2 associated X protein B cell lymphoma / Leukemia 2 Bcl-2N, cut cysteine aspartic protein hydrolase -3caspase3, protein kinase BKB, phosphorylated protein kinase (PPRK) BPK-AKT, The levels of reactive oxygen species (Ros) in cardiac myocytes were detected by dihydroethidime diethidime (DHEH) staining, and the contents of TNF- 偽 mRNA and IL-6 mRNA in cardiac myocytes were detected by real-time fluorescence quantitation of PCR- 偽 mRNA and IL-6 mRNA. The apoptotic rate of the cells was detected by flow cytometry. Results the PHB expression was increased by the recombinant plasmid of 1: P CDNA3-PHB. Compared with Control group, the apoptosis rate in HG p CDNA3-NC group was significantly higher than that in HG p CDNA3-PHB group, and the apoptosis rate in HG p CDNA3-NC group was not significantly different from that in HG group. The apoptosis rate in HG p CDNA3-PHB group was significantly lower than that in HG p CDNA3-PHB group. Compared with Control group, HG p CDNA3-PHB group was significantly lower than that in Control group. In p CDNA3-PHB group, the relative expression of TNF- 偽 mRNA-IL-6 mRNA-IL-6 mRNA-Bax / Bcl-2 was significantly higher than that of c-caspase3 (P0.05) protein. Compared with HG group, there was no significant difference in the level of ROS in HGP CDNA3-NC group (P0.05TNF- 偽 mRNA-P0.05TNF- 偽 mRNA-P0.05TNF- 偽 mRNA-P0.05 Bax-Bax / Bcl-2 relative expression level and P0.05- caspase3 protein relative expression level (P0.05). However, the relative expression of ROS in the cells of p CDNA3-PHB group was significantly lower than that in the control group. Statistical analysis showed that the relative expression level of ROS was significantly lower than that of P0.05- 偽 mRNA-TNF- 偽 mRNA-TNF- 偽 mRNA-TNF- 偽 mRNA-TNF- 偽 mRNA-TNF- 偽 -mRNA-TNF- 偽 mRNA. There was no significant difference in the relative expression of AKt protein among the three groups. The relative expression of p-AKt protein in the cardiomyocytes of HG p CDNA3-NC group was significantly lower than that of Control group (P 0.05 HG p CDNA3-NC group), and the relative surface of p-AKt protein in HG p CDNA3-NC group was significantly lower than that in Control group (P 0.05 HG p CDNA3-NC group). There was no significant difference between HG group and HG group (P 0.05), but the relative expression of p-AKt protein in HG p CDNA3-PHB group was significantly higher than that in HG group (P 0 05). Conclusion the overexpression of p-AKt B can inhibit the apoptosis and inflammatory response of H9C2 cardiomyocytes in high glucose environment. It is mainly by regulating the PI3K/Akt signaling pathway that the Bax-bcl-2ccaspase3 protein level is regulated, which provides a new idea and method for the treatment of diabetic cardiomyopathy.
【作者單位】： 西安外事學(xué)院醫(yī)學(xué)院;
【基金】：陜西省科技廳社會(huì)發(fā)展公關(guān)項(xiàng)目(2016SF-220)資助
【分類號(hào)】：R587.2

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本文編號(hào)：1680980