本文選題：3T3-L1前脂肪細胞　切入點：成熟脂肪細胞　出處：《北京協和醫(yī)學院》2017年博士論文

【摘要】：目的觀察誘導劑作用時間對3T3-L1前脂肪細胞系分化的影響。方法參照傳統(tǒng)“雞尾酒”法,分別在作用時間為2(傳統(tǒng)法)、3、4天(后兩者稱改良法)條件下誘導分化。倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài),油紅0染色及甘油三酯檢測脂肪含量。結果傳統(tǒng)法脂肪細胞轉化率大于80%者占65%,而改良法轉化率大于80%者為100%(P0.05)。4天組細胞脂肪含量高于2、3天組(1402.5±9.4vs.1078.5±15.2或1083.4±9,6 ng/mL,P0.05),而 2 與 3 天組間無明顯區(qū)別(1078.5±15.2 vs.1083.4±9.6ng/mL,P0.05)。結論改良法3T3-L1前脂肪細胞誘導法可提高脂肪細胞轉化率,可作為高效制作脂肪細胞模型的方法之一。優(yōu)選地,推薦作用時間為3天的改良法誘導方案。目的高糖可導致血管內皮細胞功能紊亂,脂肪細胞具有強大的內分泌功能,參與多種病理生理過程,該研究的主要目的是觀察脂肪細胞對高糖刺激下人臍靜脈內皮細胞功能的影響。方法該實驗以人臍靜脈內皮細胞為研究對象,實驗共分為3組:正常對照組(A)、高糖刺激組(B)、高糖刺激+3T3-L1脂肪細胞共培養(yǎng)組[C)。以Tubilin作為內參,采用Western blot和rt-PCR方法檢測人臍靜脈內皮細胞中ICAM-1、OPN、eNOS表達。結果B組人臍靜脈內皮細胞eNOS表達顯著低于A組和C組(P0.05),C組eNOS表達低于A組(P0.05)。相反,B組人臍靜脈內皮細胞ICAM-1、OPN表達明顯高于A組和C組(P0.05),而A組和C組間ICAM-1、OPN表達無顯著差異(P0.05)。結論高糖刺激可導致人臍靜脈內皮細胞功能紊亂,脂肪細胞可通過上調eNOS表達、下調ICAM-1、OPN表達從而減低高糖對人臍靜脈內皮細胞的損害。目的探索血管周圍脂肪組織在糖尿病大鼠血管內皮損傷修復中的作用。方法SD雄性大鼠為研究對象,實驗共分為3組:空白對照組(A組)、糖尿病+頸動脈球囊損傷組(B組)、糖尿病+頸動脈球囊損傷+血管周圍脂肪組織移植組(C組),采用Western Blot、rt-PCR及免疫組化技術檢測大鼠頸動脈組織中ICAM-1、OPN、eNOS表達情況,同時行HE染色觀察頸動脈內膜增生情況。結果HE染色結果顯示B組頸動脈內-中膜厚度明顯高于A組(p0.05),而C組與A組間無顯著差異(p0.05)。Western blot、rt-PCR及免疫組化結果均顯示,B組大鼠頸動脈eNOS表達顯著低于A、C兩組(p0.05),而ICAM-1、OPN表達則顯著高于A、C兩組(p0.05)。結論血管周圍脂肪組可促進糖尿病大鼠血管內皮修復,ICAM-1及OPN有望成為糖尿病所引起血管疾病的潛在治療靶點。
[Abstract]:Objective to observe the effect of induction time on the differentiation of 3T3-L1 preadipoid cell line. The cells were induced to differentiate under the condition of 2 (3 ~ 4 days) of the traditional method respectively. The morphology of the cells was observed by inverted microscope. Oil red 0 staining and triglyceride were used to detect the fat content. Results in the conventional method, the adipocyte conversion rate was more than 80%, while in the modified method, the fat content in the 100%(P0.05).4 day group was higher than that in the 2g / 3 day group (1402.5 鹵9.4vs.1078.5 鹵15.2 or 1083.4 鹵9ngmL / L ~ (-1) P 0.05), while in the modified method > 80%, the fat content was higher than that in the 2ngL / L group. There was no significant difference between the 3 day groups (1078.5 鹵15.2 vs.1083.4 鹵9.6 ng 路mL ~ (-1) P 0.05). Conclusion the improved 3T3-L1 preadipocyte induction method can increase the adipocyte transformation rate. It can be used as one of the effective methods to make adipocyte model. An improved induction method with 3 days' action is recommended. Objective High glucose may lead to dysfunction of vascular endothelial cells, and adipocytes have strong endocrine function. The main purpose of this study was to observe the effect of adipocytes on the function of human umbilical vein endothelial cells stimulated by high glucose. The experiment was divided into three groups: normal control group, high glucose stimulation group, high glucose stimulation group, 3T3-L1 adipocyte co-culture group. Tubilin was used as internal control. Western blot and rt-PCR were used to detect the expression of eNOS in human umbilical vein endothelial cells. Results the expression of eNOS in human umbilical vein endothelial cells in group B was significantly lower than that in group A and group C (P 0.05). On the contrary, the expression of eNOS in group B was lower than that in group A (P 0.05). In contrast, the expression of ICAM-1OPN in human umbilical vein endothelial cells in group B was significantly lower than that in group C (P 0.05). The expression of ICAM-1OPN was significantly higher in group A and C than that in group A and C, but there was no significant difference in the expression of ICAM-1OPN between group A and group C. conclusion High glucose stimulation may lead to dysfunction of endothelial cells in human umbilical vein. Adipocytes can up-regulate the expression of eNOS. Objective to explore the role of perivascular adipose tissue in the repair of vascular endothelial injury in diabetic rats. The experiment was divided into three groups: blank control group (group A), diabetic carotid artery balloon injury group (group B), diabetic carotid artery balloon injury group (group C) and adipose tissue transplantation group (group C). Western blottt- PCR and immunohistochemical technique were used to detect the results. The expression of ICAM-1OPNnnnnongnos in carotid artery of rats, Results the intima hyperplasia of carotid artery in group B was significantly higher than that in group A (P 0.05), but there was no significant difference between group C and group A. Western blottir rt-PCR and immunohistochemistry showed that the thickness of carotid intima in group B was significantly higher than that in group A. The expression of eNOS in carotid artery in group A was significantly lower than that in group A and C, while the expression of eNOS in group ICAM 1 was significantly higher than that in group A and C. Conclusion the expression of ICAM-1 and OPN in perivascular fat group can promote vascular endothelial repair in diabetic rats. A potential therapeutic target.
【學位授予單位】：北京協和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R587.2

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本文編號：1680178