本文選題：甲狀旁腺激素(PTH)　切入點(diǎn)：胰島素　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:通過葡萄糖刺激胰島素分泌(GSIS)實(shí)驗(yàn)觀察甲狀旁腺激素(PTH1-34)對(duì)原代C57小鼠胰島分泌功能的影響。并通過檢測(cè)胰島細(xì)胞內(nèi)cAMP含量以及鈣成像技術(shù)檢測(cè)胰島細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量探究其可能的作用機(jī)制。方法:膠原酶V消化原代C57小鼠胰腺,手工挑取胰島,本實(shí)驗(yàn)可分為甲狀旁腺激素組(PTH組)和溶劑對(duì)照組(Con組),觀察甲狀旁腺激素(PTH1-34)作用于C57小鼠胰島后在低糖(2.8m M)和高糖(16.7mM)下胰島素分泌量的變化。為探究其可能作用機(jī)制,行鈣成像技術(shù)探究與鈣的關(guān)系,并通過檢測(cè)胰島細(xì)胞內(nèi)cAMP含量研究胰島素分泌與cAMP之間的關(guān)系。結(jié)果:(1)本實(shí)驗(yàn)獲得的胰島為圓形、橢圓形的實(shí)心顆粒,邊界清楚,沒有毛刺。每只原代c57小鼠約可獲得90-140個(gè)胰島。(2)通過PTH1-34誘導(dǎo)的體外胰島素分泌實(shí)驗(yàn),測(cè)得孵育液中Ca濃度為1mM時(shí)胰島素總量后可得到:2.8mM葡萄糖情況下Con組與PTH組(PTH1-34濃度分別為0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰島素分泌量分別是:(5.28±0.57)uIU/ml、(1.81±0.16)uIU/ml、(2.28±0.27)uIU/ml、(2.83±0.54)uIU/ml;可見低糖時(shí)PTH組胰島素總量明顯低于Con組,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;16.7m M葡萄糖情況下Con組與PTH組(PTH濃度分別為0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰島素分泌量分別是(49.66±5.97)uIU/ml、(37.45±1.84)uIU/ml、(30.96±2.88)uIU/ml、(30.70±2.33)uIU/ml,PTH組胰島素總量顯著低于Con組,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;16.7m M葡萄糖的Con組胰島素總量顯著高于2.8mM葡萄糖的Con組,P0.001。也間接證明了本實(shí)驗(yàn)所獲胰島功能良好。而孵育液中Ca濃度為2.5mM時(shí)測(cè)得胰島素含量為:2.8mM葡萄糖情況下Con組與PTH組(PTH1-34濃度分別為0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰島素分泌量分別是:(2.72±0.75)uIU/ml、(2.31±0.56)uIU/ml、(2.91±0.74)uIU/ml、(3.74±0.43)uIU/ml;16.7mM葡萄糖情況下Con組與PTH組(PTH濃度分別為0.1ug/ml、1 ug/ml、10ug/ml)胰島素分泌量分別是(30.98±3.63)uIU/ml、(35.69±4.29)uIU/ml、(31.38±6.18)uIU/ml、(32.90±2.07)uIU/ml,可見增加鈣離子濃度到正常時(shí),PTH對(duì)胰島素分泌無明顯影響。16.7mM葡萄糖的Con組胰島素總量顯著高于2.8mM葡萄糖的Con組,P0.001。(3)通過鈣成像技術(shù)發(fā)現(xiàn):16.7m M組和16.7mM+PTH組的Ration of Fura2(340/380)分別為(0.52±0.01)、(0.80±0.03),16.7mM+PTH組Ration of Fura2(340/380)顯著高于16.7mM組,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)16.7mM組、16.7mM+PTH組以及16.7m M+Forskolin組胰島經(jīng)粉碎后細(xì)胞內(nèi)cAMP含量分別為(0.19±0.02)nmol/L、(0.22±0.03)nmol/L、(0.45±0.11)nmol/L,16.7mM+PTH組與16.7mM組相比,無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;16.7mM+Forskolin組cAMP含量顯著高于16.7mM組,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,間接證明了本實(shí)驗(yàn)胰島功能良好。結(jié)論:(1)采用膠原酶V消化胰腺以及手工挑取獲得的胰島純度高,活性以及功能良好。(2)與低糖相比,高糖條件下胰島素分泌顯著增多。(3)低糖和高糖條件下,PTH對(duì)胰島素分泌具有抑制作用。(4)甲狀旁腺激素(PTH1-34)對(duì)胰島素分泌的抑制作用與胰島細(xì)胞內(nèi)cAMP的含量無關(guān)。(5)鑒于本實(shí)驗(yàn)結(jié)果,推測(cè)PTH可促使細(xì)胞外鈣內(nèi)流入胰島細(xì)胞,大量PTH可造成胰島細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載而形成鈣毒性,進(jìn)一步抑制胰島素的分泌。
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本文編號(hào)：1663462