本文選題：B10細(xì)胞　切入點：1型糖尿病　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：第一部分NOD小鼠糖尿病發(fā)生發(fā)展過程中B10細(xì)胞數(shù)量水平的研究目的:觀察NOD小鼠T1D自然病程中B10細(xì)胞及Th1、Th17、Treg細(xì)胞的數(shù)量變化,探討B(tài)10細(xì)胞數(shù)量與NOD小鼠T1D發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法:分離4周、8周及糖尿病NOD小鼠胰腺組織固定并作病理切片HE染色評估胰島炎;流式細(xì)胞術(shù)檢測4周(A組)、8周(B組)、糖尿病(C組)NOD小鼠及同齡WT C57BL/6小鼠(對照組)脾臟、腸系膜淋巴結(jié)、外周淋巴結(jié)、胰腺淋巴結(jié)中B10、Th1、Th17及Treg細(xì)胞的比例。結(jié)果:(1)不同年齡段NOD小鼠胰島炎比較:4周NOD小鼠無胰島炎;8周NOD小鼠發(fā)生胰島炎;糖尿病NOD小鼠發(fā)生明顯胰島炎且無完整胰島;(2)不同病程階段NOD小鼠B10細(xì)胞比較:B及C組B10細(xì)胞較A組增高,而C組B10細(xì)胞則較B組顯著下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);A組B10細(xì)胞各組織間無明顯差異(P0.05),B組B10細(xì)胞以胰腺淋巴結(jié)最高,C組B10細(xì)胞以外周淋巴結(jié)最高且胰腺淋巴結(jié)B10細(xì)胞較B組顯著下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);(3)不同病程階段NOD小鼠Th1及Th17細(xì)胞比較:C組Th1及Th17細(xì)胞較A、B組顯著增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);(4)不同病程階段NOD小鼠Treg細(xì)胞比較:C組Treg細(xì)胞較A、B組無明顯變化,且NOD小鼠Treg細(xì)胞較同齡WT C57BL/6小鼠亦無明顯變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:隨NOD小鼠年齡增長及自身免疫性胰島炎進(jìn)展,B10細(xì)胞存在數(shù)量變化及組織分布的差異;糖尿病NOD小鼠B10細(xì)胞與致病性Th1、Th17細(xì)胞之間存在明顯的免疫失衡,B10細(xì)胞數(shù)量減少可能參與了NOD小鼠T1D的發(fā)生發(fā)展。第二部分NOD小鼠糖尿病發(fā)生發(fā)展過程中B10細(xì)胞功能的研究目的:觀察NOD小鼠T1D自然病程中B10細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能的變化,探究B10細(xì)胞參與NOD小鼠T1D發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制。方法:流式細(xì)胞術(shù)分選4周、8周、糖尿病NOD小鼠、8-12周野生型(陽性對照組)和IL-10-/-小鼠(陰性對照組)脾臟B10及CD19+CD5-CD1dlow B細(xì)胞;磁活性標(biāo)記細(xì)胞分選術(shù)分選4周、8周、糖尿病NOD小鼠、8-12周WT C57BL/6小鼠(陽性對照組)及IL-10-/-小鼠(陰性對照組)脾臟和淋巴結(jié)CD4+CD25-T細(xì)胞,利用體外淋巴細(xì)胞反應(yīng)觀察B10細(xì)胞對CFSE標(biāo)記的CD4+CD25-T細(xì)胞增殖的抑制情況,對CD4+CD25-T細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-4、IL-17等細(xì)胞因子及Foxp3表達(dá)的影響。結(jié)果:(1)與CD19+CD5-CD1dlow B細(xì)胞相比,野生型小鼠B10細(xì)胞能明顯抑制CD4+CD25-T細(xì)胞3-4代子細(xì)胞增殖(P0.01),而4周、8周、糖尿病NOD小鼠及IL-10-/-小鼠B10細(xì)胞均不能抑制CD4+CD25-T細(xì)胞增殖(P0.05);與對照組相比,野生型小鼠、IL-10-/-小鼠及4周、8周、糖尿病NOD小鼠B10和CD19+CD5-CD1dlow B細(xì)胞均明顯促進(jìn)CD4+CD25-T細(xì)胞增殖(P0.01);(2)野生型小鼠B10細(xì)胞明顯抑制IFN-γ分泌、促進(jìn)IL-4分泌、增加Foxp3表達(dá)(P0.05),IL-10-/-小鼠B10細(xì)胞仍可促進(jìn)IL-4分泌(P0.05),但對IFN-γ分泌及Foxp3表達(dá)水平無明顯影響(P0.05),而4周、8周、糖尿病NOD小鼠B10細(xì)胞對IFN-γ、IL-4分泌及Foxp3的表達(dá)水平均無明顯影響(P0.05);野生型、IL-10-/-小鼠及4周、8周、糖尿病NOD小鼠B10細(xì)胞均不能抑制IL-17分泌(P0.05);(3)Transwell分隔B-T細(xì)胞接觸后,野生型小鼠B10細(xì)胞能完全抑制CD4+CD25-T細(xì)胞增殖(P0.01),而4周、8周、糖尿病NOD小鼠B10細(xì)胞則不能抑制CD4+CD25-T細(xì)胞增殖(P0.05);(4)體外混合淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后,NOD小鼠B10細(xì)胞分泌IL-10較野生型小鼠明顯減少(P0.01);(5)體外混合淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后,野生型小鼠及NOD小鼠B10和CD19+CD5-CD1dlow B細(xì)胞均可活化表達(dá)高水平協(xié)同刺激分子CD80、CD86,且NOD小鼠B10細(xì)胞CD80、CD86表達(dá)水平較野生型小鼠無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:(1)NOD小鼠B10細(xì)胞存在免疫抑制功能缺陷,B10細(xì)胞抑制功能缺陷可能參與了NOD小鼠自身免疫性胰島炎及T1D的發(fā)生與進(jìn)展;(2)NOD小鼠B10細(xì)胞對IFN-γ、IL-4分泌及Foxp3表達(dá)水平的調(diào)節(jié)功能存在缺陷;(3)NOD小鼠B10細(xì)胞免疫抑制功能缺陷主要由IL-10分泌減少所致;(4)野生型及NOD小鼠B10細(xì)胞均可活化表達(dá)協(xié)同刺激分子CD80、CD86,但NOD小鼠B10細(xì)胞功能缺陷與CD80、CD86表達(dá)水平無相關(guān)性。
[Abstract]:Objective to study the first part NOD diabetes in mice B10 cells during the development of the number of levels: Observation of B10 cells and Th1, NOD mice in the natural history of T1D Th17, Treg cells, and explore the relationship between the number of NOD and T1D in mice B10 cell development. Methods: 4 weeks, 8 weeks and pancreatic tissue of diabetic NOD mice fixed and pathological HE staining to evaluate insulitis; flow cytometry 4 weeks (A group), 8 weeks (group B), diabetes mellitus (C group) NOD mice and age-matched WT C57BL/6 mice (control group) of spleen, mesenteric lymph node, peripheral lymph nodes, pancreatic lymph nodes in B10, Th1 Th17, and the proportion of Treg cells. Results: (1) comparison of different age of insulitis in NOD mice: NOD mice 4 weeks without insulitis; occurrence of insulitis 8 weeks NOD mice; diabetic NOD mice have obvious insulitis and no intact islets; (2) comparison of different stages of mouse B10 cells: B and NOD C group B10 The cells were higher than the A group, C group and B10 cells were significantly decreased compared with B group, the difference was statistically significant (P0.01); no significant difference between B10 cell A group (P0.05), B10 cells in B group pancreatic lymph node is highest, B10 cell group C peripheral lymph node and pancreatic lymph node B10 the cell was lower than that in B group, the difference was statistically significant (P0.01); (3) comparison of different stages of NOD mouse Th1 and Th17 cells: Th1 and Th17 cells in C group than in A group, B increased significantly, the difference was statistically significant (P0.01); (4) comparison of different stages of NOD mouse Treg cells: Treg C cells compared with group A, group B had no obvious change, and the Treg cells of NOD mice compared with age-matched WT C57BL/6 mice also had no obvious change, the difference was not statistically significant (P0.05). Conclusion: with the development of age NOD mice and autoimmune insulitis, there is quantity variation and tissue distribution of B10 cells; B10 cells in diabetic rats NOD mice Th1 and pathogenicity, obvious immune imbalance between Th17 cells and B10 cells may be involved in the occurrence and development of the decrease in the number of NOD mice T1D. The research purpose of the second part of diabetes in NOD mice B10 cell function in the process of development: To observe the changes of B10 cells in NOD mice were immunized with T1D in the natural history of the regulatory function of B10 cells may be involved in the inquiry. The mechanism of the occurrence and development of T1D in NOD mice. Methods: flow cytometry sorting for 4 weeks, 8 weeks, diabetic NOD mice, 8-12 weeks of wild type (positive control group) and IL-10-/- mice (negative control group) and CD19+ CD5-CD1dlow B B10 spleen cells; magnetic activated cell sorting sorting marker for 4 weeks, 8 weeks, diabetes NOD mice, 8-12 weeks of WT C57BL/6 mice (positive control group) and IL-10-/- mice (negative control group) the spleen and lymph nodes of CD4+CD25-T cells, B10 cells were observed on CFSE labeled CD4+CD25-T cells by in vitro lymphocyte reaction The inhibition of proliferation, IFN- gamma, on the secretion of CD4+CD25-T IL-4 cells, expression of cytokines such as IL-17 and Foxp3. Results: (1) compared with CD19+CD5-CD1dlow B cells, wild-type mice B10 cells could inhibit the proliferation of CD4+CD25-T cells of 3-4 generation cells (P0.01), and 4 weeks, 8 weeks, mice and IL-10-/- mouse B10 cells of diabetic NOD could not inhibit the proliferation of CD4+CD25-T cells (P0.05); compared with the control group, IL-10-/- mice and wild type mice, 4 weeks, 8 weeks, diabetic NOD mice and CD19+CD5-CD1dlow B10 B cells were significantly promoted CD4+CD25-T cell proliferation (P0.01); (2) wild type mice B10 cells inhibit IFN- gamma secretion, promote the secretion of IL-4, increase the expression of Foxp3 (P0.05), IL-10-/- cells can promote IL-4 secretion of mouse B10 (P0.05), but had no significant effect on IFN- secretion and Foxp3 expression level (P0.05), and 4 weeks, 8 weeks, the IFN- gamma B10 cells in diabetic NOD mice, IL- There were no significant effects of the expression level of 4 secretion and Foxp3 (P0.05); wild type IL-10-/- mice and 4 week, 8 weeks, B10 cells in diabetic NOD mice can inhibit the secretion of IL-17 (P0.05); (3) Transwell separated B-T cells after contact with wild type mice B10 cells can inhibit the proliferation of CD4+CD25-T cells (P0.01), 4 weeks, 8 weeks, B10 cells in diabetic NOD mice can inhibit the proliferation of CD4+CD25-T cells (P0.05); (4) mixed lymphocyte co culture in vitro, B10 cells secrete IL-10 NOD mice than wild type mice significantly reduced (P0.01); (5) mixed lymphocyte co culture in vitro after activation of wild-type mice B10 and CD19+CD5-CD1dlow and NOD mice B cells can express high levels of costimulatory molecules CD80, CD86, CD80 and B10 cells in NOD mice, CD86 expression level was higher than that of wild type mice showed no significant difference (P0.05). Conclusion: (1) NOD mice B10 cells suppress immunity function defect, B10 Inhibition of dysfunctional cells may be involved in the occurrence and development of autoimmune insulitis in NOD mice and T1D; (2) the IFN- gamma NOD mouse B10 cells, regulating function level defects of secretion and expression of IL-4 Foxp3; (3) NOD mice B10 cells function defects mainly secreted by IL-10 decreased; (4 the activation of B10 cells) are wild type NOD mice and expression of costimulatory molecules CD80, CD86, but NOD B10 cells of mice with CD80 deficiency, there is no correlation between the expression level of CD86.

【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1

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本文編號：1658098