本文關(guān)鍵詞：活性維生素D3對糖尿病大鼠足細胞nephrin、podocin、WT1表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學》 2013年

活性維生素D3對糖尿病大鼠足細胞nephrin、podocin、WT1表達的影響

曹樹翼  

【摘要】：目的：本課題通過建立腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)誘導的糖尿病Sprague Dawley(SD)大鼠模型，應用活性維生素D3干預糖尿病大鼠，采用免疫組織化學、反轉(zhuǎn)錄PCR、光鏡等方法檢測SD大鼠腎組織，觀察活性維生素D3對其足細胞nephrin、podocin及WT1表達的影響，探討活性維生素D3是否可以改善糖尿病大鼠足細胞的濾過功能，從而減少蛋白尿、延緩腎臟病的進展，為糖尿病腎病的早期防治，提供實驗性理論依據(jù)。 Nephrin是足細胞上第一個被發(fā)現(xiàn)的跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員，特異表達在足細胞上，nephrin可誘導Akt途徑使數(shù)種靶蛋白磷酸化，保護及減少足細胞凋亡。Podocin通過CD-2AP連接于Nephrin形成復合體，呈發(fā)夾樣結(jié)構(gòu)插入細胞膜內(nèi)，其對Nephrin信號傳導有增強作用。他們表達異�？捎绊懩I小球濾過屏障通透性，導致蛋白尿的產(chǎn)生。故兩者對維持腎小球濾過屏障及足細胞功能和結(jié)構(gòu)完整性發(fā)揮著極其重要的作用。腎母細胞瘤抑制基因(WT1)對多種基因表達具有調(diào)節(jié)作用，是足細胞的特異標志之一，對維持足細胞的正常結(jié)構(gòu)及功能有重要作用。 方法：選擇清潔級SD(雄性)大鼠36只，體重200±20g，適應性喂養(yǎng)3天,隨機選取24只大鼠給予鏈脲佐菌素腹腔注射制備糖尿病模型，其余12只做正常對照組（NC組）。將造模成功的大鼠按隨機區(qū)組原則分為:糖尿病對照組（DN組）、活性維生素D3治療組（DT組）,每組各12只。DT組在糖尿病模型建立之后予骨化三醇0.03ug/(kg·d)灌胃；NC及DN組以等量的花生油灌胃。分別于模型成功后8、12周測定各組大鼠血鈣、血磷、血肌酐、血尿素氮以及24小時蛋白尿，并收集腎組織標本。用蘇木素伊紅（HE）在光鏡下觀察大鼠腎組織病理變化；采用免疫組織化學方法及RT-PCR檢測腎臟nephrin、podocin及WT1的表達。所得實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±S)表示，各組間比較采用單因素方差分析（滿足正態(tài)性和方差齊性），兩組間的比較采用兩獨立樣本t檢驗（不滿足正態(tài)性和方差齊性的數(shù)據(jù)資料采用非參數(shù)檢驗），實驗數(shù)據(jù)應用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件處理，以P0.05認為有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果：1一般情況DN組、DT組大鼠注射STZ后2～4天即出現(xiàn)多飲、多食、多尿，逐漸消瘦，活動減少，而NC組則無上述情況出現(xiàn)。 2生化檢測結(jié)果各組大鼠24小時尿蛋白定量、血鈣、血磷、血肌酐及尿素氮的比較。8及12周末DN組大鼠尿蛋白定量、血肌酐與NC組比較，DN組升高明顯（P＜0.05），，DT組比DN組低（P＜0.05）。血鈣8周時DN較NC組降低，12周時降低更明顯；DT組在8周時與DN組比較差別不大，12周時血鈣水平較DN組高，但低于NC組。血磷水平同期各組間比較無差別（P0.05）。 3組織化學變化蘇木精--伊紅染色（HE）結(jié)果光鏡HE染色顯示,整個實驗過程中NC組大鼠的腎臟組織均未見明顯病理學改變。與同期的NC組相比,12周末,DN組腎小球體積增大，腎小球系膜區(qū)增寬,系膜細胞增多。腎間質(zhì)、腎小管無明顯病理形態(tài)學改變。同期DT組腎小球病變不明顯。 4免疫組織化學結(jié)果8周和12周末DN組、DT組與NC組比較大鼠腎組織中nephrin、podocin及WT1的表達減少，其中12周末降低更為顯著（P＜0.05）；8周和12周末DT組較DN組各因子表達升高，但低于同期NC組(P 0.05)。 5Reverse Transcription-PCR (RT-PCR)結(jié)果與NC組大鼠相比，糖尿病大鼠腎組織中nephrin、podocin及WT1表達降低，12周末變化更顯著（P＜0.05）；8周和12周末DT組較DN組各因子表達升高，但低于同期NC組(P 0.05)。 結(jié)論:1糖尿病大鼠腎組織nephrin、podocin及WT1表達下降，與蛋白尿水平呈負相關(guān)，提示nephrin、podocin及WT1在糖尿病腎損傷的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮一定作用。 2活性維生素D3能夠明顯減輕糖尿病大鼠蛋白尿的產(chǎn)生及腎臟病理形態(tài)學改變，其機制可能與上調(diào)nephrin、podocin及WT1蛋白的表達。早期應用活性維生素D3可改善糖尿病腎病大鼠腎小球濾過屏障功能，對延緩糖尿病腎病的發(fā)生與發(fā)展，具有一定的保護作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R587.2
【目錄】：

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本文編號：160389