本文關(guān)鍵詞：活性維生素D3對(duì)糖尿病大鼠足細(xì)胞nephrin、podocin、WT1表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學(xué)》 2013年

活性維生素D3對(duì)糖尿病大鼠足細(xì)胞nephrin、podocin、WT1表達(dá)的影響

曹樹翼  

【摘要】：目的：本課題通過(guò)建立腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)誘導(dǎo)的糖尿病Sprague Dawley(SD)大鼠模型，應(yīng)用活性維生素D3干預(yù)糖尿病大鼠，采用免疫組織化學(xué)、反轉(zhuǎn)錄PCR、光鏡等方法檢測(cè)SD大鼠腎組織，觀察活性維生素D3對(duì)其足細(xì)胞nephrin、podocin及WT1表達(dá)的影響，探討活性維生素D3是否可以改善糖尿病大鼠足細(xì)胞的濾過(guò)功能，從而減少蛋白尿、延緩腎臟病的進(jìn)展，為糖尿病腎病的早期防治，提供實(shí)驗(yàn)性理論依據(jù)。 Nephrin是足細(xì)胞上第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員，特異表達(dá)在足細(xì)胞上，nephrin可誘導(dǎo)Akt途徑使數(shù)種靶蛋白磷酸化，保護(hù)及減少足細(xì)胞凋亡。Podocin通過(guò)CD-2AP連接于Nephrin形成復(fù)合體，呈發(fā)夾樣結(jié)構(gòu)插入細(xì)胞膜內(nèi)，其對(duì)Nephrin信號(hào)傳導(dǎo)有增強(qiáng)作用。他們表達(dá)異�？捎绊懩I小球?yàn)V過(guò)屏障通透性，導(dǎo)致蛋白尿的產(chǎn)生。故兩者對(duì)維持腎小球?yàn)V過(guò)屏障及足細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)完整性發(fā)揮著極其重要的作用。腎母細(xì)胞瘤抑制基因(WT1)對(duì)多種基因表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用，是足細(xì)胞的特異標(biāo)志之一，對(duì)維持足細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)及功能有重要作用。 方法：選擇清潔級(jí)SD(雄性)大鼠36只，體重200±20g，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天,隨機(jī)選取24只大鼠給予鏈脲佐菌素腹腔注射制備糖尿病模型，其余12只做正常對(duì)照組（NC組）。將造模成功的大鼠按隨機(jī)區(qū)組原則分為:糖尿病對(duì)照組（DN組）、活性維生素D3治療組（DT組）,每組各12只。DT組在糖尿病模型建立之后予骨化三醇0.03ug/(kg·d)灌胃；NC及DN組以等量的花生油灌胃。分別于模型成功后8、12周測(cè)定各組大鼠血鈣、血磷、血肌酐、血尿素氮以及24小時(shí)蛋白尿，并收集腎組織標(biāo)本。用蘇木素伊紅（HE）在光鏡下觀察大鼠腎組織病理變化；采用免疫組織化學(xué)方法及RT-PCR檢測(cè)腎臟nephrin、podocin及WT1的表達(dá)。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示，各組間比較采用單因素方差分析（滿足正態(tài)性和方差齊性），兩組間的比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)（不滿足正態(tài)性和方差齊性的數(shù)據(jù)資料采用非參數(shù)檢驗(yàn)），實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理，以P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1一般情況DN組、DT組大鼠注射STZ后2～4天即出現(xiàn)多飲、多食、多尿，逐漸消瘦，活動(dòng)減少，而NC組則無(wú)上述情況出現(xiàn)。 2生化檢測(cè)結(jié)果各組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量、血鈣、血磷、血肌酐及尿素氮的比較。8及12周末DN組大鼠尿蛋白定量、血肌酐與NC組比較，DN組升高明顯（P＜0.05），，DT組比DN組低（P＜0.05）。血鈣8周時(shí)DN較NC組降低，12周時(shí)降低更明顯；DT組在8周時(shí)與DN組比較差別不大，12周時(shí)血鈣水平較DN組高，但低于NC組。血磷水平同期各組間比較無(wú)差別（P0.05）。 3組織化學(xué)變化蘇木精--伊紅染色（HE）結(jié)果光鏡HE染色顯示,整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中NC組大鼠的腎臟組織均未見明顯病理學(xué)改變。與同期的NC組相比,12周末,DN組腎小球體積增大，腎小球系膜區(qū)增寬,系膜細(xì)胞增多。腎間質(zhì)、腎小管無(wú)明顯病理形態(tài)學(xué)改變。同期DT組腎小球病變不明顯。 4免疫組織化學(xué)結(jié)果8周和12周末DN組、DT組與NC組比較大鼠腎組織中nephrin、podocin及WT1的表達(dá)減少，其中12周末降低更為顯著（P＜0.05）；8周和12周末DT組較DN組各因子表達(dá)升高，但低于同期NC組(P 0.05)。 5Reverse Transcription-PCR (RT-PCR)結(jié)果與NC組大鼠相比，糖尿病大鼠腎組織中nephrin、podocin及WT1表達(dá)降低，12周末變化更顯著（P＜0.05）；8周和12周末DT組較DN組各因子表達(dá)升高，但低于同期NC組(P 0.05)。 結(jié)論:1糖尿病大鼠腎組織nephrin、podocin及WT1表達(dá)下降，與蛋白尿水平呈負(fù)相關(guān)，提示nephrin、podocin及WT1在糖尿病腎損傷的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮一定作用。 2活性維生素D3能夠明顯減輕糖尿病大鼠蛋白尿的產(chǎn)生及腎臟病理形態(tài)學(xué)改變，其機(jī)制可能與上調(diào)nephrin、podocin及WT1蛋白的表達(dá)。早期應(yīng)用活性維生素D3可改善糖尿病腎病大鼠腎小球?yàn)V過(guò)屏障功能，對(duì)延緩糖尿病腎病的發(fā)生與發(fā)展，具有一定的保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R587.2
【目錄】：

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