本文選題：衰老　切入點(diǎn)：胰島功能障礙　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分高脂飼養(yǎng)促進(jìn)衰老導(dǎo)致的胰島功能障礙及TXNIP表達(dá)目的:探討衰老在胰腺功能障礙中的作用及衰老與TXNIP表達(dá)的關(guān)系。方法:收集不同年齡段(青年、中年、老年)正常人體胰腺組織標(biāo)本,用免疫組化方法檢測TXNIP蛋白表達(dá)水平。48只4周齡C57BL/6J小鼠隨機(jī)均分為普食組和高脂組,兩組再按照4個時間段(3個月、6個月、9個月、12個月)飼養(yǎng)至所需月齡。觀察小鼠一般生長情況,檢測各年齡段各組小鼠GTT、ITT及基礎(chǔ)代謝指標(biāo),檢測TXNIP、TRX及衰老相關(guān)蛋白p16的表達(dá)水平。結(jié)果:隨著年齡的增長,正常人體胰島中TXNIP表達(dá)水平增加(p0.01)。隨著年齡的增長,小鼠空腹血糖逐漸增高(p0.05),小鼠胰島素分泌水平逐漸下降(p0.05),胰島素抵抗逐漸增加(p0.05);與同月齡普食組小鼠相比,6、9、12月齡高脂組小鼠空腹血糖較高(p0.01);各月齡普食組小鼠胰島素分泌功能均較好,胰島素抵抗均較輕。隨著年齡增加,高脂組小鼠血中TC、TG、LDL含量逐漸增加(p0.01)。隨著年齡增加,胰腺組織中TXNIP、P16蛋白表達(dá)逐漸增加,TRX蛋白表達(dá)逐漸降低(均p0.05)。同年齡段小鼠胰腺組織,與普食組相比,9、12月齡高脂組的TXNIP表達(dá)水平明顯升高(p0.05);3、6、12月齡高脂組的p16表達(dá)水平明顯升高(p0.05),而TRX表達(dá)水平較低(p0.05)。結(jié)論:高脂飼養(yǎng)促進(jìn)衰老導(dǎo)致的小鼠胰島素分泌功能降低和胰島素抵抗增加,促進(jìn)小鼠代謝紊亂,同時促進(jìn)衰老導(dǎo)致的胰腺組織TXNIP表達(dá)增加。第二部分TXNIP促進(jìn)衰老導(dǎo)致的胰島功能障礙目的:探討TXNIP在衰老導(dǎo)致的胰島功能障礙中的作用和機(jī)制方法:24只4周齡C57BL/6J小鼠(WT)和TXNIP基因敲出鼠(TXNIP-/-),按照4個時間段(3個月、6個月、9個月、12個月)普食飼養(yǎng)至所需月齡。觀察小鼠一般生長情況,檢測各年齡段各組小鼠GTT、ITT及基礎(chǔ)代謝指標(biāo),檢測TXNIP、TRX及衰老相關(guān)蛋白p16的表達(dá)水平。結(jié)果:與同年齡段WT小鼠相比,TXNIP-/-組小鼠空腹血糖較低(p0.05),小鼠胰島素分泌功能較好(p0.05),胰島素抵抗較弱(p0.05)。與同年齡段WT小鼠相比,各月齡TXNIP-/-組的體重均較低((p0.05);6、9、12月齡TXNIP-/-組的TG較低(p0.05);9、12月齡LDL較低(p0.05)。同年齡段小鼠胰腺組織,與WT小鼠相比較,9、12月齡TXNIP-/-組的TRX表達(dá)水平明顯較高(p0.01);6、9、12月齡TXNIP-/-組的P16表達(dá)水平明顯較低(p0.05)。結(jié)論:TXNIP促進(jìn)衰老導(dǎo)致的胰島素分泌功能減弱和胰島素抵抗,促進(jìn)衰老導(dǎo)致的小鼠代謝紊亂和衰老相關(guān)蛋白p16的表達(dá)。第三部分TXNIP促進(jìn)胰島β細(xì)胞衰老的作用及相關(guān)機(jī)制目的:研究TXNIP和EZH2對MIN6細(xì)胞衰老的影響及其相關(guān)機(jī)制及其相互作用關(guān)系。方法:將處于對數(shù)生長期的MIN6細(xì)胞,進(jìn)行EZH2、TXNIP過表達(dá)及TXNIP沉默慢病毒轉(zhuǎn)染,用熒光顯微鏡和Westen-blot方法檢測轉(zhuǎn)染效能。將MIN6細(xì)胞分為空載組(LV-GFP)組、TXNIP過表達(dá)(LV-TXNIP)組和TXNIP沉默組(LV-TXNIPsi RNA)組。利用流式測定細(xì)胞周期;利用CCK-8評估細(xì)胞增值活力;采用Annexin V/PI雙染色法檢測細(xì)胞凋亡;用DHE法測定ROS表達(dá);用Westen-blot法檢測TXNIP、TRX、p16、活化的Caspase蛋白的表達(dá)水平及p38 MAPK通路激活水平。結(jié)果:感染慢病毒72小時后,病毒轉(zhuǎn)染成功。與LV-GFP組相比較,LV-GFP-TXNIP組的增殖出現(xiàn)G1-S期阻滯,細(xì)胞生存率明顯降低,而其凋亡率和ROS水平明顯增加,p16、活化的Caspase3蛋白表達(dá)及p38 MAPK磷酸化水平明顯增高(均P0.01)。LV-GFP-TXNIPsi RNA組和LV-EZH2組的細(xì)胞生存率明顯升高,而其凋亡率和ROS水平明顯降低(均P0.01),P16、活化的Caspase3蛋白表達(dá)及p38 MAPK磷酸化水平明顯降低(均P0.05)。LV-EZH2組的p16、TXNIP蛋白表達(dá)明顯增高(均P0.01),且TRX蛋白表達(dá)明顯降低(P0.01)。其次,p38MAPK特異性抑制劑作用后,LV-GFP-TXNIP組的p16及活化的Caspase3蛋白表達(dá)均顯著減少(均P0.01)。結(jié)論:TXNIP表達(dá)上調(diào)能夠抑制MIN6細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞的衰老和凋亡,且p38 MAPK信號通路可能參與其中,同時,過表達(dá)EZH2能增加細(xì)胞生存率,減少細(xì)胞的凋亡和過氧化物的產(chǎn)生,其可能機(jī)制為EZH2可通過抑制TXNIP的表達(dá),從而抑制p16的表達(dá),延緩細(xì)胞衰老。
[Abstract]:The first part of high fat feeding promoting islet dysfunction and aging caused by TXNIP expression objective: To explore the relationship between expression of senescence in pancreatic dysfunction and its role in aging and TXNIP. Methods: We collected in different age groups (young, middle-aged, elderly) of normal human pancreatic tissue specimens by immunohistochemical method to detect the TXNIP protein expression level of.48 is only 4 week old C57BL/6J mice were randomly divided into normal diet group and high-fat group, the two groups in 4 time periods (3 months, 6 months, 9 months, 12 months) raised to the required month old mice were observed. The general growth situation, the detection of all ages of mice GTT, detection of TXNIP ITT and the basic metabolism, the expression level of TRX and senescence associated protein p16. Results: with the increase of age, increase the level of TXNIP expression in normal human pancreatic islets (P0.01). With the increase of age, fasting blood glucose of mice increased gradually (P0.05), insulin secretion in mice Decreased (P0.05), insulin resistance (P0.05) gradually increased; compared with the same age normal diet group, high fat group were higher fasting blood glucose levels 6,9,12 months (P0.01 months); the normal diet group were insulin secretion and insulin resistance are good, are lighter. With the increase of age, high fat mice serum TC, TG, LDL content increased gradually (P0.01). With the increase of age, TXNIP in pancreatic tissues, P16 protein expression increased, TRX protein expression decreased gradually (P0.05). With the age of pancreatic tissue of mice, compared with normal diet group, high fat group 9,12 the expression level of TXNIP months increased significantly (P0.05); 3,6,12 high fat group p16 months old expression level increased significantly (P0.05), and the expression level of TRX is lower (P0.05). Conclusion: high fat diet to promote insulin secretion in mice Aging leads to decreased and increased insulin resistance, promote mouse metabolism, and promote decline The old in pancreatic tissue increased expression of TXNIP. The second part of the TXNIP to promote aging caused by islet dysfunction Objective: To explore the effect and mechanism of TXNIP in aging caused by islet dysfunction in 24 C57BL/6J mice aged 4 weeks (WT) and TXNIP gene knockout mice (TXNIP-/-), according to the 4 time periods (3 months. 6 months, 9 months, 12 months) of general feeding to the required months. Observe the growth of mice, the detection of all ages of mice GTT, detection of TXNIP ITT and basic metabolism, and the expression level of TRX and senescence associated protein p16. Results: compared with the same age WT mice. TXNIP-/- group were lower fasting blood glucose (P0.05), mouse insulin secretion function better (P0.05), insulin resistance is weak (P0.05). Compared with the same age WT mice at different ages, the weight of group TXNIP-/- was lower ((P0.05); 6,9,12 month old TXNIP-/- group TG was lower (P0.05); 9,12 months of age Low LDL (P0.05). With pancreatic tissue age mice compared with WT mice, 9,12 month old TXNIP-/- group TRX expression levels were significantly higher (P0.01); the expression level of 6,9,12 month old TXNIP-/- group P16 was significantly lower (P0.05). Conclusion: TXNIP promotes senescence induced insulin secretion and decreased insulin resistance, promote the expression of senescence caused by metabolic disorders and senescence associated protein p16. The third part of TXNIP to promote the aging of islet beta cell function and related mechanisms: To study the effect of TXNIP and EZH2 on MIN6 cell senescence and its mechanism and their interaction relationship. Methods: MIN6 cells in the exponential growth phase, EZH2 over expression of TXNIP and TXNIP, silent lentivirus transfection, fluorescence microscope and Westen-blot method to detect the transfection efficiency. MIN6 cells were divided into no-load group (LV-GFP) group, over expression of TXNIP (LV-TXNIP) group and TXNIP group (LV- silencing TXNIPsi RNA) group. The cell cycle was determined by flow cytometry; using CCK-8 to assess cell proliferation activity; using Annexin V/PI double staining method to detect cell apoptosis; the expression of ROS was determined by DHE method; Westen-blot method was used to detect TXNIP, TRX, p16, activated the expression level of Caspase protein and p38 MAPK activation level. Results: slow infection virus 72 hours after transfection. Compared with LV-GFP group, LV-GFP-TXNIP group, the proliferation of G1-S phase arrest, cell survival rate decreased significantly, and the apoptosis rate and ROS level increased significantly, the level of p16, Caspase3 protein expression and p38 MAPK phosphorylation increased significantly (P0.01) and.LV-GFP-TXNIPsi RNA group group LV-EZH2 the cell survival rate was significantly increased, and the apoptosis rate and ROS levels were significantly lower (P0.01), P16, Caspase3 protein expression and p38 phosphorylation level of MAPK activation was significantly lower in group.LV-EZH2 (P0.05) p16, TXNIP Protein expression increased significantly (P0.01), and the expression of TRX protein was significantly decreased (P0.01). Secondly, a specific inhibitor of p38MAPK function, the p16 group the expression of LV-GFP-TXNIP and activation of Caspase3 protein were significantly decreased (P0.01). Conclusion: the upregulation of TXNIP expression could inhibit the proliferation of MIN6 cells, promote cell senescence and apoptosis. P38 and MAPK signaling pathway may be involved, at the same time, over expression of EZH2 could increase the cell survival rate, apoptosis and cell superoxide production, the possible mechanism is that EZH2 can inhibit the expression of TXNIP, and inhibited p16 protein expression, cell senescence.

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R587.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張建功,程樺;胰島β細(xì)胞功能測定方法及在不同人群中的應(yīng)用[J];遼寧實(shí)用糖尿病雜志;2000年03期

2 肖常青,鄧宏明,龐翠軍,李世生,夏寧,于志清;不同方法評價胰島β細(xì)胞功能的結(jié)果分析[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;2001年01期

3 郭妮;胰島β細(xì)胞功能檢測方法及評估[J];廣西醫(yī)學(xué);2001年02期

4 楊素蘭,馬洪波;初診2型糖尿病患者胰島β細(xì)胞功能觀察[J];醫(yī)師進(jìn)修雜志;2003年21期

5 項(xiàng)坤三;胰島β細(xì)胞功能研究:中國的信息——國際胰島素分泌研究組織中國組第一次學(xué)術(shù)會議簡報(bào)[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;2003年04期

6 董凌燕;胰島β細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)分泌學(xué)分冊);2003年S1期

7 李強(qiáng),張巾超;臨床實(shí)用胰島β細(xì)胞功能評估方法的應(yīng)用及再認(rèn)識[J];遼寧實(shí)用糖尿病雜志;2003年04期

8 馬曉靜,吳松華;精氨酸與胰島β細(xì)胞功能[J];中國糖尿病雜志;2003年06期

9 賈偉平,項(xiàng)坤三;胰島β細(xì)胞功能評估——從基礎(chǔ)到臨床[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;2005年03期

10 賈偉平,項(xiàng)坤三,包玉倩,朱敏,于浩泳,吳松華,馬曉靜;從基礎(chǔ)到臨床對胰島β細(xì)胞功能的評估[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;2005年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 徐敏;劉宇;王天歌;李勉;徐佰慧;黃飛;楊枝;張婕;陳宇紅;畢宇芳;寧光;;飲酒在吸煙與胰島β細(xì)胞功能下降關(guān)系中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 李妍妍;田慧;;老年人群胰島β細(xì)胞功能的評估[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會糖尿病分會第十次全國糖尿病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

3 劉瑜;谷昭艷;李春霖;苗新宇;李劍;;自噬功能在衰老相關(guān)的胰島β細(xì)胞功能下降中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十一次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

4 朱立群;魏華;劉英華;余曉琳;;中西藥結(jié)合改善成人緩慢進(jìn)展型自身免疫性糖尿病胰島β細(xì)胞功能的研究[A];第七次全國中醫(yī)糖尿病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2003年

5 張四青;李芳萍;嚴(yán)勵;李炎;王斐;黃銀瓊;;新診斷2型糖尿病伴非酒精性脂肪肝病患者胰島β細(xì)胞功能的臨床研究[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

6 谷昭艷;李春霖;杜英臻;劉瑜;馬麗超;龔燕平;田慧;;衰老對胰島β細(xì)胞功能的影響及分子機(jī)制研究[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

7 肖正大;郭晶晶;周錦慧;薛霞;;2型糖尿病患者25羥維生素D3與胰島β細(xì)胞功能的關(guān)系探討[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

8 方芳;葉山東;;糖化血紅蛋白A1C與初診2型糖尿病患者胰島β細(xì)胞功能關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會第十一次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

9 劉娟;李延兵;邵虹;李月霞;袁永紅;肖亦斌;翁建平;;不同糖耐量個體胰島β細(xì)胞功能觀察及評價[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會糖尿病分會第十次全國糖尿病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

10 李新萍;曾正陪;宋愛羚;盧琳;童安莉;陳適;張妲;王永慧;付春莉;李明;;特發(fā)性醛固酮增多癥患者服用螺內(nèi)酯后胰島β細(xì)胞功能的變化[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前9條

1 李光偉;胰島β細(xì)胞功能評估九法[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2004年

2 朱立群；劉英華；黃曼;中西醫(yī)結(jié)合治療LADA療效切實(shí)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

3 南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院內(nèi)分泌科 高方;土方治病差點(diǎn)要了命[N];健康時報(bào);2008年

4 廣東省人民醫(yī)院內(nèi)分泌科主任 楊華章;血糖控制：早期治療受益更大[N];健康時報(bào);2008年

5 本報(bào)記者李玉成;傳統(tǒng)與現(xiàn)代嫁接的結(jié)晶[N];科技日報(bào);2002年

6 王振嶺　李宗海;中西醫(yī)結(jié)合治療糖尿病有新法[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

7 本報(bào)記者 李天舒;“糖孩兒”急劇增加 社會猝不及防[N];健康報(bào);2012年

8 金鸝;諾華 “攪局”中國糖尿病市場[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2003年

9 王娟;糖尿病兩種類型的鑒別[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李新;阻斷腎素血管緊張素系統(tǒng)對胰島β細(xì)胞功能的效應(yīng)及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

2 楊琳;成人隱匿性自身免疫糖尿病的診斷和胰島β細(xì)胞功能的研究[D];中南大學(xué);2003年

3 李曉瑾;LRP16基因?qū)σ葝uβ細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制的研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2012年

4 張霞;肝病時胰島β細(xì)胞功能的基礎(chǔ)與臨床分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

5 龔莉琳;2型糖尿病家系胰島素抵抗和胰島β細(xì)胞功能及其候選基因研究—FOXO1A和IRS2基因的交互作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

6 汪志紅;TCF7L2及SLC30A8基因多態(tài)性與2型糖尿病的關(guān)聯(lián)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

7 葉秀蘭;抗氧化劑Probucol保護(hù)STZ導(dǎo)致的糖尿病小鼠胰島β細(xì)胞功能的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

8 劉率男;PPARα激動劑對2型糖尿病不同發(fā)展階段實(shí)驗(yàn)動物模型胰島β細(xì)胞功能的影響及其機(jī)理研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

9 魯辛;血管緊張素Ⅱ經(jīng)氧化應(yīng)激途徑損傷胰島β細(xì)胞功能的實(shí)驗(yàn)研究及機(jī)制探討[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

10 沈?qū)?小檗堿對胰島β細(xì)胞功能的影響及其衍生物抗糖尿病活性的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃帥;新診斷2型糖尿病患者胰島β細(xì)胞功能相關(guān)因素分析[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

2 楊梅麗;血清Irisin水平與肥胖和2型糖尿病關(guān)系的臨床研究[D];蘇州大學(xué);2015年

3 林海洋;2型糖尿病患者胰島β細(xì)胞功能狀態(tài)與心功能的相關(guān)性探討[D];浙江大學(xué);2015年

4 袁欣欣;FK506對大鼠胰島β細(xì)胞功能的影響[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

5 劉芳;2型糖尿病血清分泌型卷曲相關(guān)蛋白4水平及其與胰島β細(xì)胞功能的關(guān)系探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

6 付思思;家族史對MHO人群的胰島素敏感性及胰島β細(xì)胞功能影響的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李翠柳;糖化血紅蛋白、空腹血糖及餐后2h血糖與胰島β細(xì)胞功能關(guān)系的研究[D];南京大學(xué);2014年

8 周娟;青海地區(qū)藏、漢族初發(fā)T2DM患者鐵代謝與胰島β細(xì)胞功能的相關(guān)研究[D];青海大學(xué);2016年

9 孫遜;2型糖尿病胰島β細(xì)胞功能及胰島素抵抗與微量白蛋白尿的相關(guān)性研究[D];青島大學(xué);2015年

10 包惠文;探討2型糖尿病酮癥和非酮癥患者胰島β細(xì)胞功能的差異[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2017年

，

本文編號：1587351