本文選題：組織工程　切入點：干細胞　出處：《中國組織工程研究》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：背景:趨化因子具有促進干細胞旁分泌血管活性因子,加速血管新生的重要作用。目的:觀察高糖環(huán)境下,趨化因子8(CXCL-8)刺激的人骨髓間充質(zhì)干細胞上清液對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞歸巢的影響,并分析Sonic Hedgehog信號通路在CXCL-8刺激骨髓間充質(zhì)干細胞的機制。方法:(1)細胞體外實驗:在細胞高糖環(huán)境模型下,將質(zhì)量濃度100μg/L趨化因子8刺激的間充質(zhì)干細胞設(shè)為高糖CXCL-8組,預先以5μmol/L的shh抑制劑辛基馬來酰亞胺處理45 min,再用質(zhì)量濃度100μg/L CXCL-8刺激間充質(zhì)干細胞者為高糖Shh抑制劑組,高糖環(huán)境下培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞為高糖對照組。提取各組細胞上清液為條件培養(yǎng)基培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞,其分組按條件培養(yǎng)基而定。使用CCK8細胞增殖實驗、細胞劃痕實驗或Transwell細胞小室實驗分別觀察各條件培養(yǎng)基(CM)對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞增殖、凋亡、趨化等能力的影響;(2)動物體內(nèi)實驗:建立C57BL/6J小鼠糖尿病皮膚潰瘍模型,分別以各組間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基進行處理,驗證CXCL-8刺激的間充質(zhì)干細胞的條件培養(yǎng)基對人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞歸巢和潰瘍愈合的影響。結(jié)果與結(jié)論:(1)體外實驗結(jié)果:與高糖對照條件培養(yǎng)基相比,高糖CXCL-8組條件培養(yǎng)基能夠促進人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞增殖、降低人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞凋亡率,并且細胞劃痕面積閉合率、細胞遷移率均明顯提高(P0.01),高糖CXCL-8組條件培養(yǎng)基中血管內(nèi)皮細胞生長因子、表皮生長因子水平明顯提高(P0.01);與高糖CXCL-8組相比,高糖Shh抑制劑組上述結(jié)果指標呈反向變化(P0.01);(2)體內(nèi)實驗結(jié)果:與Shh抑制劑-CM組和間充質(zhì)干細胞-CM組相比,CXCL-8-CM組糖尿病皮膚潰瘍的愈合效果和綠色熒光蛋白標記的人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞數(shù)均顯著升高(P0.01);(3)結(jié)果提示,在高糖環(huán)境下,CXCL-8能夠通過Shh通路,刺激間充質(zhì)干細胞旁分泌血管內(nèi)皮細胞生長因子、表皮生長因子,提高了對臍靜脈血管內(nèi)皮細胞招募的能力。
[Abstract]:Background: chemokines play an important role in promoting the paracrine vasoactive factors of stem cells and accelerating angiogenesis. The effect of supernatant of human bone marrow mesenchymal stem cells stimulated by chemokine CXCL-8 on homing of human umbilical vein endothelial cells. The mechanism of Sonic Hedgehog signaling pathway in stimulating bone marrow mesenchymal stem cells by CXCL-8 was analyzed. Methods: under the model of high glucose environment, mesenchymal stem cells stimulated by 100 渭 g / L chemokine 8 were divided into high glucose CXCL-8 group. 5 渭 mol/L shh inhibitor octyl maleimide was pretreated for 45 min, then stimulated mesenchymal stem cells (MSCs) with 100 渭 g / L CXCL-8 for 45 min. The cells were treated with high glucose Shh inhibitor group. Mesenchymal stem cells cultured in high glucose environment were treated with high glucose control group. Human umbilical vein endothelial cells were cultured on conditioned medium with supernatant of each group of cells. The cells were divided into two groups according to conditioned medium. CCK8 cell proliferation test was used. Cell scratch test or Transwell cell chamber test were used to observe the effects of different conditioned media on the proliferation, apoptosis and chemotaxis of human umbilical vein endothelial cells. In vivo experiments, C57BL / 6J mice model of diabetic skin ulcer was established, and the effect of C57BL / 6J on the proliferation, apoptosis and chemotaxis of human umbilical vein endothelial cells was observed. The mesenchymal stem cells in each group were treated on conditioned medium. To verify the effect of conditioned medium of mesenchymal stem cells stimulated by CXCL-8 on homing and ulcer healing of human umbilical vein endothelial cells. The conditioned medium of high glucose CXCL-8 group could promote the proliferation of human umbilical vein endothelial cells, reduce the apoptosis rate of human umbilical vein endothelial cells, and close the area of cell scratches. The cell mobility was significantly increased in both groups, and the levels of vascular endothelial cell growth factor and epidermal growth factor in the conditioned medium of high glucose CXCL-8 group were significantly higher than those in high glucose CXCL-8 group, while those in high glucose CXCL-8 group were significantly higher than those in high glucose CXCL-8 group. In vivo experimental results: compared with Shh inhibitor -CM group and mesenchymal stem cell -CM group, the healing effect of diabetic skin ulcer and the human umbilical cord labeled by green fluorescent protein in CXCL-8-CM group were compared with those of Shh inhibitor -CM group and mesenchymal stem cell -CM group. The number of venous endothelial cells increased significantly (P 0.01). CXCL-8 can stimulate the paracrine secretion of vascular endothelial growth factor (VEGF) and epidermal growth factor (EGF) from mesenchymal stem cells (MSCs) through Shh pathway in high glucose environment.
【作者單位】： 齊齊哈爾醫(yī)學院解剖教研室;齊齊哈爾醫(yī)學院組織胚胎學教研室;
【基金】：國家自然科學基金項目(81541137)~~
【分類號】：R587.2

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本文編號：1584899