本文關(guān)鍵詞： 強(qiáng)直性脊柱炎 成骨細(xì)胞 CNTFR　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis,AS)是一種由多病因引起的復(fù)雜的疾病,可能與基因和環(huán)境等多種因素有關(guān)。強(qiáng)直性脊柱炎的患者大多數(shù)為年輕男性,其疾病特征為炎癥和關(guān)節(jié)僵直,部位主要累及脊柱及外周關(guān)節(jié)。HLA-B27作為與強(qiáng)直性脊柱炎(AS)相關(guān)性最強(qiáng)的基因已經(jīng)被研究了很多年,在過去的研究中雖取得了一定進(jìn)步,但在尋找疾病易感基因方面的研究進(jìn)展非常緩慢。和其他復(fù)雜性疾病如炎癥性腸病相比,AS可被識(shí)別的易感基因非常少。ERAP1和IL23R的發(fā)現(xiàn)說明這些基因可能與關(guān)節(jié)僵直的發(fā)病有關(guān)。在全基因組學(xué)的相關(guān)研究中,辨別并證明相關(guān)基因及其變體是否與AS發(fā)病有關(guān)是一項(xiàng)非常難的挑戰(zhàn)。成骨細(xì)胞在骨的形成以及骨的鈣化中起著重要作用,并且調(diào)節(jié)著破骨細(xì)胞的分化。骨髓干細(xì)胞中Runx2轉(zhuǎn)錄因子的高表達(dá),促使其分化為成骨細(xì)胞。成骨細(xì)胞調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的分化還通過巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF),細(xì)胞核因子Kappa-B受體活化因子配體(RANKL)和骨保護(hù)素(OPG)。巨噬細(xì)胞集落刺激因子使破骨細(xì)胞的前體細(xì)胞池?cái)U(kuò)大,并增加它們的存活率。細(xì)胞核因子Kappa-B受體活化因子配體是破骨細(xì)胞形成的必備分子,與破骨細(xì)胞前體細(xì)胞的RANK受體相互作用,從而促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化。骨保護(hù)素與細(xì)胞核因子Kappa-B受體活化因子配體相互作用,抑制破骨細(xì)胞的形成。其他影響成骨細(xì)胞-破骨細(xì)胞平衡關(guān)系的因子,還包括甲狀旁腺激素(parathyroid hormone PTH)和前列腺素E2(prostaglandin E2 PGE2)。成骨細(xì)胞在骨形成過程中要經(jīng)歷成骨細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)成熟和細(xì)胞外基質(zhì)礦化過程,成骨細(xì)胞成熟及細(xì)胞外基質(zhì)成熟的重要標(biāo)志之一是堿性磷酸酶的活性,可采用ALP試劑盒對(duì)細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶活性進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)阻斷CNTF時(shí),可以導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的丟失和運(yùn)動(dòng)綜合征,但是與VEGF丟失相比,它的損傷就相對(duì)較輕。在強(qiáng)直性脊柱炎的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的區(qū)域,CNTF的表達(dá)相對(duì)性降低。另外在強(qiáng)直性脊柱炎病人的血清中,CNTF的水平逐漸升高,尤其是當(dāng)腰椎受到侵犯時(shí)。在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷的小鼠模型中,皮下注射CNTF可以對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元起到保護(hù)作用。CNTFR在骨骼肌和神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在,在外周組織中,骨骼肌、皮膚、肺、腸、腎、肝、脾和胸腺中都表達(dá)CNTFR,其中以骨骼肌中表達(dá)含量最高。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,CNTFR表達(dá)在小腦,后腦、中腦、丘腦、下丘腦、紋狀體、海馬、皮質(zhì)等部位,其中以小腦的表達(dá)最高。CNTFR由CNTFRa、糖蛋白(gpl30)和LIFRβ三種成分構(gòu)成,其中CNTFRa是它的核心結(jié)構(gòu),分子量大約在52kD左右。糖蛋白(gpl30)在IL-6家族中起著信號(hào)傳導(dǎo)的作用。LIFRβ是LIF的結(jié)合蛋白,LIFRβ的胞漿部分沒有蛋白激酶活性和GTP結(jié)合位點(diǎn),但并行排列的信-2-號(hào)傳遞體gpl30和lifrβ與jak-tyk激活有關(guān),故gpl30、lifrβ與信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)。我們通過基因芯片檢測(cè)強(qiáng)直性脊柱炎病人與正常病人的基因表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)c7、c3、entpd3、hba2、fam70a、dsg2、angpt1、acvr1c、cntfr、fmo2、rergl、slpi、il7r、hp基因在強(qiáng)直性脊柱炎病人的髖關(guān)節(jié)韌帶中表達(dá)較正常病人表達(dá)增加。pamr1、kcna1、fgfbp2、ppp4r4、crtac1、mamdc2、gpr64、galnt13、f5、nov、piezo2、lpar4、cdh13、itga11、q6zuq1、piezo2、arntl2、tnxb、nrk、gpsm2和htr2a基因在強(qiáng)直性脊柱炎病人的髖關(guān)節(jié)韌帶中表達(dá)較正常病人表達(dá)降低。其中cntfr在骨骼肌和神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在,且在強(qiáng)直性脊柱炎病人中表達(dá)也升高,另外,當(dāng)阻斷cntf時(shí),可以導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的丟失和運(yùn)動(dòng)綜合征,強(qiáng)直性脊柱炎病人的血清中,cntf的水平逐漸升高,尤其是當(dāng)腰椎受到侵犯時(shí)。在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷的小鼠模型中,皮下注射cntf可以對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元起到保護(hù)作用。因此我們推測(cè)cntfr可能與強(qiáng)直性脊柱炎相關(guān)。成骨細(xì)胞在骨的形成以及骨的鈣化中起著重要作用,并且調(diào)節(jié)著破骨細(xì)胞的分化,在強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。成骨細(xì)胞成熟及細(xì)胞外基質(zhì)成熟的重要標(biāo)志之一是堿性磷酸酶的活性。因此用cntf處理激活cntfr,并用成骨細(xì)胞的堿性磷酸酶活性檢測(cè)來觀察cntfr是否與強(qiáng)直性脊柱炎相關(guān),理論上是可行的。第一部分強(qiáng)直性脊柱炎病人髖關(guān)節(jié)韌帶基因芯片的檢測(cè)目的探索與強(qiáng)直性脊柱炎相關(guān)的基因方法我們對(duì)選取3例強(qiáng)直性脊柱炎病人和3例正常病人,取他們的髖關(guān)節(jié)韌帶,將組織送予公司檢測(cè)基因芯片,明確強(qiáng)直性脊柱炎病人與正常病人基因表達(dá)的差異。結(jié)果symbolgenebankfoldchangepamr1nm_001001991.20.29kcna1nm_000217.20.31fgfbp2nm_031950.30.31ppp4r4nm_020958.20.33crtac1nm_001206528.20.33mamdc2nm_153267.40.35gpr64nm_001079847.20.37galnt13nm_001301627.10.37f5nm_000130.40.39novnm_002514.30.4piezo2nm_022068.30.41lpar4nm_001278000.10.42cdh13nm_001220488.10.46itga11nm_001004439.10.46q6zuq1nm_001010917.20.46piezo2nm_022068.30.47arntl2nm_001248002.10.48tnxbnm_019105.60.49nrknm_198465.30.49gpsm2nm_013296.40.5htr2anm_000621.40.5c7nm_000587.22c3nm_000064.32.1entpd3nm_001248.32.12hba2nm_000517.42.12fam70anm_001104544.12.21dsg2nm_001943.32.23angpt1nm_001146.32.23acvr1cnm_001111031.12.26cntfrnm_001207011.12.37fmo2nm_001301347.12.49rerglnm_001286201.12.52slpinm_003064.32.88il7rnm_002185.32.95hpnm_001126102.14.65結(jié)論c7、c3、entpd3、hba2、fam70a、dsg2、angpt1、acvr1c、cntfr、fmo2、rergl、slpi、il7r、hp基因在強(qiáng)直性脊柱炎病人的髖關(guān)節(jié)韌帶中表達(dá)較正常病人表達(dá)增加。pamr1、kcna1、fgfbp2、ppp4r4、crtac1、mamdc2、gpr64、galnt13、f5、nov、piezo2、lpar4、cdh13、itga11、q6zuq1、piezo2、arntl2、tnxb、nrk、gpsm2和htr2a基因在強(qiáng)直性脊柱炎病人的髖關(guān)節(jié)韌帶中表達(dá)較正常病人表達(dá)降低。-4-第二部分驗(yàn)證強(qiáng)直性脊柱炎病人CNTFR基因的表達(dá)目的明確強(qiáng)直性脊柱炎病人CNTFR基因的表達(dá)方法分別取2例強(qiáng)直性脊柱炎病人的髖關(guān)節(jié)韌帶作為實(shí)驗(yàn)組,和2例正常人的髖關(guān)節(jié)韌帶作為對(duì)照組,用western-blot法檢測(cè)CNTFR基因的蛋白質(zhì)水平表達(dá),比較兩組的差異。結(jié)果western-blot法檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),強(qiáng)直性脊柱炎病人髖關(guān)節(jié)韌帶中CNTFR蛋白的條帶顏色明顯比正常人的髖關(guān)節(jié)韌帶的深。結(jié)論強(qiáng)直性脊柱炎病人CNTFR基因的蛋白質(zhì)水平表達(dá)明顯升高第三部分CNTF處理對(duì)成骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響目的明確CNTF處理對(duì)成骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響方法在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)成骨細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到50%-70%時(shí),進(jìn)行鋪板。將實(shí)驗(yàn)分為兩組,一組為CNTF處理組,另一組為對(duì)照組,每組例數(shù)為6。在CNTF處理后24h根據(jù)堿性磷酸酶活性檢測(cè)試劑盒上的說明書進(jìn)行操作,檢測(cè)堿性磷酸酶的活性。結(jié)果CNTF處理24h后,根據(jù)試劑說明書對(duì)成骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)CNTF處理組的堿性磷酸酶活性明顯比對(duì)照組低(P0.01)結(jié)論CNTF可以降低成骨細(xì)胞堿性磷酸酶的活性,從而參與到了強(qiáng)直性脊柱炎的病程中。
[Abstract]:Ankyanite ( AS ) is a complex disease caused by multiple etiologies , which may be related to many factors , such as gene and environment . Most of the patients with ankylosing spondylitis have been studied for many years . CNTFR is the binding protein of LIF . In addition , CNTF has the highest expression in the central nervous system . In addition , CNTF is the binding protein of LIF . In addition , CNTFR is the binding protein of LIF . The expression of CNTF is about 52kD . The expression of cntfr in the joint ligaments of patients with ankylosing spondylitis has been increased . The expression of CNTFR gene in patients with ankylosing spondylitis was detected by western - blot .

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R593.23

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1506289