本文關(guān)鍵詞： 卵巢早衰 TBP2基因 突變 多態(tài)性 卵巢早衰 體外受精-胚胎移植 生育結(jié)局　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：早發(fā)性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)是一種多病因引起的女性在40歲前卵巢功能減退,臨床表現(xiàn)為停經(jīng)或月經(jīng)稀發(fā)4-6個(gè)月,間隔4 周連續(xù)兩次卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)25 IU/L。近年來(lái),業(yè)界普遍認(rèn)為過(guò)去常用的卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)不能體現(xiàn)該疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程,因而診斷標(biāo)準(zhǔn)中將FSH數(shù)值由40IU/L降至25IU/L。診斷閾值的下調(diào)意味著將有更多女性進(jìn)入POI的管理范疇,以便盡早引起婦產(chǎn)科醫(yī)生的關(guān)注,讓POI患者得到及時(shí)的診斷與治療。據(jù)報(bào)道,POF的發(fā)病率約為1%,中國(guó)女性中的發(fā)病率約為2.8%,該病對(duì)女性的健康及生育力會(huì)造成嚴(yán)重影響,導(dǎo)致不孕、骨質(zhì)疏松、泌尿生殖器官萎縮、心血管疾病、認(rèn)知功能減退及抑郁等,應(yīng)在臨床上得到早期的診斷和干預(yù),以提高患者的生活質(zhì)量,目前該病已成為婦科生殖內(nèi)分泌領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。由于本課題中進(jìn)行基礎(chǔ)研究的病例樣本所屬者和臨床研究中跟蹤隨訪的患者均為近4-5年間就診者,且均是以FSH40IU/L作為診斷標(biāo)準(zhǔn)確診的卵巢早衰患者。因此,本文中相關(guān)疾病的描述仍以"卵巢早衰(POF)"為主。卵巢早衰的病因復(fù)雜多樣,包括遺傳學(xué)因素、免疫性因素、醫(yī)源性因素、代謝性因素以及病毒感染等。其中遺傳學(xué)因素被認(rèn)為是首先需要關(guān)注的重要因素,包括染色體數(shù)目與結(jié)構(gòu)異常,基因變異等。本課題以遺傳學(xué)因素作為卵巢早衰病因研究的切入點(diǎn),在對(duì)已發(fā)表的與卵巢早衰發(fā)生相關(guān)的基因變異(包括基因多態(tài)性、基因突變等)相關(guān)性文獻(xiàn)進(jìn)行大量閱讀分析的基礎(chǔ)上,篩選出TATA結(jié)合蛋白2(TATA-binding protein 2,TBP2)這一基因。通過(guò)對(duì)近4年來(lái)已收集的中國(guó)漢族女性特發(fā)性卵巢早衰病例樣本的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究,探討TBP2基因是否參與卵巢早衰的發(fā)病。此外,在臨床研究方面,卵巢早衰所導(dǎo)致的不孕癥是育齡期女性面臨的嚴(yán)峻問(wèn)題,本課題通過(guò)對(duì)確診為卵巢早衰性不孕癥但因有生育要求而采取輔助生殖技術(shù)(自然周期或微刺激周期的體外受精-胚胎移植)助孕的患者進(jìn)行3-4年的跟蹤隨訪,經(jīng)過(guò)不同助孕方式及對(duì)應(yīng)生育結(jié)局的比較,初步探討臨床上卵巢早衰患者不同助孕方式的效果及其與妊娠結(jié)局的相關(guān)性。通過(guò)上述的基礎(chǔ)研究,一方面,進(jìn)一步探索基因變異與卵巢早衰發(fā)病的相關(guān)性,為深入明確卵巢早衰的遺傳學(xué)病因提供一定的依據(jù),從而為卵巢早衰的病因分析及早期診斷提供理論依據(jù)。另一方面,上述的初步臨床研究也為卵巢早衰性不孕癥患者通過(guò)選擇不同的方式助孕從而獲得較好的生殖結(jié)局提供了一些有價(jià)值的參考,進(jìn)而為臨床應(yīng)用中卵巢早衰的生育相關(guān)性診療提供指導(dǎo)依據(jù)。第一部分卵巢早衰患者TBP2基因的相關(guān)研究目的:前期研究報(bào)道提示,TBP2基因特異性表達(dá)在小鼠卵巢,且該基因敲除的雌性小鼠是不孕的。本研究擬通過(guò)檢測(cè)中國(guó)漢族卵巢早衰女性中TBP2基因的7個(gè)外顯子,探討該基因與卵巢早衰發(fā)病的關(guān)系。方法:研究對(duì)象為南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院門診就診并被確診的中國(guó)漢族特發(fā)性卵巢早衰患者60例及年齡匹配、月經(jīng)正常、性激素檢查在正常范圍的對(duì)照女性60名,收集其外周血樣本納入研究。采用血基因組DNA提取試劑盒提取外周血白細(xì)胞中的DNA,并用UCSC ExonPrimer online software設(shè)計(jì)針對(duì)TBP2基因的引物,應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)特異性擴(kuò)增TBP2基因所有7個(gè)外顯子的編碼區(qū)及其側(cè)翼序列,并對(duì)POF試驗(yàn)組和對(duì)照組的TBP2基因擴(kuò)增序列進(jìn)行測(cè)序分析,所得序列利用核苷酸序列比對(duì)編輯工具以及哈代-溫伯格平衡定律(Hardy-Weinberg equilibrium,HWE)等進(jìn)行綜合分析。關(guān)于TBP2基因錯(cuò)義突變所致的潛在功能性或結(jié)構(gòu)性影響則由基于ClustalX和PolyPhen2的程序進(jìn)行預(yù)測(cè)。另外,應(yīng)用卡方檢驗(yàn)比較單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(single-nucleotide polymorphism,SNP)的基因型和等位基因頻率在卵巢早衰組及對(duì)照組間的分布情況。結(jié)果:測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn),在卵巢早衰組和對(duì)照組中均發(fā)現(xiàn)一個(gè)常見的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(c.92GC),兩組中該位點(diǎn)的基因型分布和等位基因頻率的比較也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),且沒(méi)有結(jié)果表明出現(xiàn)合理的致病性突變。結(jié)論:我們的研究顯示,中國(guó)漢族女性中TBP2基因的SNP位點(diǎn)(c.92GC)可能與特發(fā)性卵巢早衰的發(fā)生無(wú)關(guān)。第二部分 卵集早衰性不孕患者助孕方式的臨床初探目的:卵巢早衰(POF)是一種復(fù)雜的生殖內(nèi)分泌疾病,育齡期的POF女性較難自發(fā)獲得妊娠。本研究擬通過(guò)分析50例應(yīng)用自然周期IVF-ET(in vitro fertilization-embryo transplantation)方案或微刺激周期 IVF-ET 方案的 POF 性不孕癥女性的生育結(jié)局,評(píng)估這兩種輔助生殖方案的療效,進(jìn)而探討臨床上該類病人不同助孕方式的效果。方法:近4年來(lái)在南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖中心收集到POF性不孕癥的女性172例(包括應(yīng)用自然周期方案的74例和應(yīng)用微刺激周期方案的98例),其中有50例患者在應(yīng)用不同方案IVF-ET的助孕方式后成功妊娠。將此50例患者根據(jù)所采用的IVF治療方案分為A,B兩組,A組17人,為應(yīng)用自然周期方案獲得妊娠,B組33人,為應(yīng)用微刺激周期方案獲得妊娠。所有納入的患者均具有正常的染色體核型(46,XX),已排除盆腔因素或其它系統(tǒng)性疾病所致的不孕,其伴侶均具有良好的生育能力�；仡櫺苑治鏊醒芯繉�(duì)象的年齡、初潮年齡、身體質(zhì)量指數(shù)(body mass index,BMI)、不孕年限、卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E2)、睪酮(testosterone,T),泌乳素(prolactin,PRL)等性激素水平,雙側(cè)卵巢竇卵泡數(shù)(antral follicle count,AFC)、甲狀腺功能以及她們的生育結(jié)局,從而評(píng)估不同助孕方式的療效。結(jié)果:對(duì)于A、B兩組不孕癥患者,在進(jìn)行輔助生殖技術(shù)(assisted reproductive technology,ART)治療前,血FSH水平均高于40IU/L(符合POF的診斷標(biāo)準(zhǔn))�；厩闆r方面,兩組患者在年齡、初潮年齡、BMI、不孕年限,妊娠次數(shù)及基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)等方面均無(wú)明顯差異(P0.05)。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),應(yīng)用雌孕激素聯(lián)合序貫治療(combination estrogen and progesterone hormone replacement therapy,HRT)三個(gè)月以上,檢測(cè)兩組患者的性激素水平,結(jié)果顯示,A,B兩組患者的血FSH、LH 及 E2 水平分別為[A 組:FSH(10.39±5.83)IU/L,LH(3.75±2.07)IU/L,E2(44.53±63.00)pg/ml。B 組:FSH(12.18±6.06)IU/L,LH(4.19±1.80)IU/L,E2(43.40±61.35)pg/ml],比較無(wú)顯著差異(P0.05)。此外,A組中含有1例甲狀腺功能異常的患者而B組中有7例,A、B兩組中各包含一例高泌乳素血癥的病患者。生育結(jié)局方面,有14例患者應(yīng)用自然周期方案后獲得臨床妊娠且均為活產(chǎn),自然周期組的臨床妊娠率為18.9%(14/74)。有29例患者應(yīng)用微刺激周期方案后獲得臨床妊娠,其中活產(chǎn)為25例,因而微刺激周期組的臨床妊娠率為29.6%(29/98)。比較發(fā)現(xiàn),自然周期組和微刺激周期組在臨床妊娠率方面無(wú)明顯差異(P0.05)。除此之外,A組中患者中沒(méi)有流產(chǎn)或?qū)m外孕發(fā)生,B組患者中包括了 4例流產(chǎn)及1例宮外孕。結(jié)論:POF不孕癥女性很難自然妊娠,多數(shù)需要通過(guò)贈(zèng)卵IVF獲得妊娠。本研究結(jié)果提示自然周期或微刺激周期的IVF-ET方案可能為POF/POI患者生育治療的一種有效方法。
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【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R711.75

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號(hào)：1499825