本文關(guān)鍵詞：活性羰基化合物損傷β細(xì)胞及其機(jī)理研究　出處：《湖南師范大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景與目的:隨著社會(huì)的發(fā)展及人民生活水平的提高,肥胖及糖尿病的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)迅速攀升。2014年,世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),全球每年約有280萬(wàn)人死于肥胖和超重,是人類健康與生命的一大殺手。肥胖還是引起糖尿病的重要風(fēng)險(xiǎn)因子。迄今為止,糖尿病仍無(wú)根治的辦法,也已成為人群中常見疾病。2011年全球約有3660萬(wàn)二型糖尿病患者,估計(jì)到2030年還會(huì)增加到5520萬(wàn),而約有48%的患者集中在印度與中國(guó)。二型糖尿病不但給患者帶來(lái)極大的痛苦,還給其家庭和社會(huì)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),危害很大。大量研究表明,羰基應(yīng)激在糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。胰島β細(xì)胞受損是糖尿病的主要特征之一,而高血糖和高血脂引起的活性羰基化合物在糖尿病β細(xì)胞損傷的具體機(jī)制尚不十分明確。因此,本項(xiàng)目在INS-1E細(xì)胞水平上,用活性羰基化合物(RCS)4-羥基壬烯醛(4-HNE)處理INS-1E細(xì)胞,模擬脂毒性損傷胰島β細(xì)胞,研究活性羰基化合物4-HNE損傷β細(xì)胞及相關(guān)信號(hào)通路的影響。方法:以INS-1E細(xì)胞為基礎(chǔ),用4-HNE藥物處理,在細(xì)胞水平上,構(gòu)建胰島β細(xì)胞的羰基毒化損傷模型。以MTT法及BrdU染色法檢驗(yàn)4-HNE對(duì)INS-1E細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖的影響。TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生的情況。用熒光定量PCR和Western Blot分別檢測(cè)4-HNE處理INS-1E細(xì)胞后,相關(guān)基因mRNA和蛋白表達(dá)的改變。結(jié)果:(1)以不同濃度活性羰基化合物4-HNE處理INS-1E細(xì)胞12h后發(fā)現(xiàn),在3-6h內(nèi)50μM及其以上濃度組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化;(2)MTT檢測(cè)0-75μM不同濃度4-HNE處理INS-1E細(xì)胞24h,濃度高于25μM的組的細(xì)胞活力顯著下降;(3)BrdU法檢測(cè)細(xì)胞增殖發(fā)現(xiàn)50μM 4-HNE組細(xì)胞增殖占比顯著小于對(duì)照無(wú)水乙醇組,顯示高濃度4-HNE抑制INS-1E細(xì)胞增殖,而TUNEL法檢測(cè)50μM4-HNE組細(xì)胞凋亡顯著高于對(duì)照無(wú)水乙醇組,表明高濃度4-HNE誘導(dǎo)INS-1E細(xì)胞凋亡;(4)定量PCR發(fā)現(xiàn),50μM 4-HNE處理INS-1E細(xì)胞24h,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因ATF4、Chop與GADD34 mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著增高,而Bip m RNA則無(wú)顯著變化;(5)蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)顯示,0-50μM不同濃度4-HNE處理INS-1E細(xì)胞24h,Cleaved-caspase 3蛋白水平明顯上升。50μM 4-HNE處理INS-1E細(xì)胞0-24h內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白p-e IF2α、ATF4和p-PERK蛋白水平顯著增加,而Bip蛋白并無(wú)顯著變化。結(jié)論:本項(xiàng)目在大鼠胰島β細(xì)胞INS-1E水平上,研究活性羰基化合物4-HNE損傷胰島β細(xì)胞及其可能的損傷機(jī)理,從而揭示羰基毒化在糖尿病發(fā)生發(fā)展中的重要作用。我們發(fā)現(xiàn)(1)50μM 4-HNE能抑制INS-1E細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;(2)4-HNE提高了INS-1E細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的ATF4、Chop和GADD34基因轉(zhuǎn)錄水平,以及p-eIF2α、ATF4,p-PERK蛋白水平。另外,總之,4-HNE至少部分通過(guò)激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的PERK/eIF2α/ATF4/Chop通路,誘導(dǎo)β細(xì)胞凋亡,促進(jìn)糖尿病發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 王海鵬;我國(guó)診斷糖尿病疾病經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)趨勢(shì)預(yù)測(cè)研究[D];山東大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1350255