本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-199a在小鼠肥胖發(fā)生中的作用研究

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【摘要】：目的研究miR-199a對肥胖小鼠整體糖脂代謝狀況的影響；探討miR-199a與脂肪分化、脂肪生成相關(guān)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子過氧化物酶增殖物激活受體(Peroxisome Proliferator Activated Receptor gamma, PPARγ)、CCAAT增強(qiáng)結(jié)合蛋白(CCAAT/enhancer binding proteins alpha, C/EBPa)、脂肪細(xì)胞脂肪酸結(jié)合蛋白(adipocyte fatty acid-binding protein, aP2)以及固醇調(diào)控元件結(jié)合蛋白1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP1)等基因的關(guān)系,進(jìn)一步明確miR-199a基因與肥胖發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián)性,為深入理解脂肪分化障礙相關(guān)的肥胖機(jī)制及治療提供理論依據(jù)。方法取40只雄性C57/BL6J小鼠(18-22g)：20只普通C57/BL6J小鼠,20只敲除瘦素小鼠(ob/ob小鼠),適應(yīng)性喂養(yǎng)一周,按照2*2析因分析設(shè)計分成4組：對照組(C1)、高脂組(C2)、敲瘦素組(01)、敲瘦素高脂組(02)。其中,高脂組和敲瘦素高脂組飼喂高脂飼料,其余兩組飼喂正常飼料,連續(xù)喂養(yǎng)12周。每周稱量體重,測量體長,記錄飲水量、攝食量等一般情況。實驗?zāi)┢?利用雙能X射線掃描儀進(jìn)行活體全身體脂肪(不包括頭部)的測定；使用安穩(wěn)血糖儀進(jìn)行血糖水平的測量；采用多功能酶標(biāo)儀測量甘油三酯(triglycerides, TG)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)以及低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)的吸光度OD值；采用Folch法從白色脂肪組織中提取脂質(zhì),采用酶聯(lián)免疫分析法進(jìn)行游離脂肪酸(free fatty acid, FFA)和TG的測定；采用蘇木精-伊紅(HE)染色方法對白色脂肪組織進(jìn)行石蠟切片染色,采用油紅O染色方法對白色脂肪組織進(jìn)行冰凍切片染色;采用實時熒光定量PCR方法中的SYBR Green法檢測miR-199a、PPARγ2.C/EBPα、aP2、SREBP-1c在各組小鼠脂肪組織中的的表達(dá)水平,同時采用Taqman探針法復(fù)檢測miR-199a在各組小鼠脂肪組織中的表達(dá)水平。結(jié)果1.各組小鼠進(jìn)食量、周體重、Lee's指數(shù)、全身脂肪含量各組小鼠在喂養(yǎng)期間進(jìn)食量、體重穩(wěn)定增加。敲瘦素高脂組(02)體重、Lee's指數(shù)、全身脂肪含量最高,對照組(C1)相應(yīng)檢測指標(biāo)最低。進(jìn)行析因分析后,其中兩處理因素(瘦素基因與高脂喂養(yǎng))在體重、全身脂肪含量指標(biāo)中存在交互作用(P0.05)；2.各組小鼠相關(guān)糖脂代謝指標(biāo)水平各組小鼠血糖水平雖有差異,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；血清TG、TC、HDL-C、LDL-C、HDL-C/LDL-C水平及脂質(zhì)中FFA、TG含量在瘦素基因水平(有或無)上均出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),敲瘦素基因的小鼠(O1組、02組)各糖脂代謝指標(biāo)水平均高于非敲除組(C1組、C2組)；在飲食水平上,血清中TG、TC,脂質(zhì)中FFA、TG水平出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異,水平均高于正常飼料組小鼠；3.各組小鼠脂肪細(xì)胞體積及脂滴大小HE染色結(jié)果顯示,肥胖組小鼠(O1組、02組)單位面積內(nèi)細(xì)胞計數(shù)較非肥胖組小鼠(C1組、C2組)數(shù)目減少,兩處理因素(瘦素基因和飲食水平)都出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；油紅O染色可見,肥胖組脂滴較非肥胖組大；4.miR-199a、PPARγ2、C/EBPα、aP2、SREBP-1c的相對表達(dá)水平SYBR Green法檢測肥胖組小鼠miR-199a、PPARγ2.C/EBPα、aP2.SREBP-1c的相對表達(dá)量較非肥胖組高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；Taqman探針法檢測miR-199a肥胖組表達(dá)水平較高,與SYBR Green法檢測具有一致性,相關(guān)系數(shù)r為0.72,為正相關(guān)關(guān)系,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；5.miR-199a表達(dá)水平與Lee's指數(shù)、全身脂肪含量及脂質(zhì)中FFA、TG的相關(guān)性miR-199a表達(dá)水平與上述指標(biāo)存在相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)r分別為0.60、0.64、0.53、0.85,都具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01),表現(xiàn)為正相關(guān)關(guān)系。結(jié)論1.高能量飼喂和敲瘦素基因都可促進(jìn)肥胖的發(fā)生,具體表現(xiàn)為體重增加、Lee's指數(shù)變大、體脂肪含量積聚、糖脂代謝紊亂、游離脂肪酸和甘油三酯增加、脂肪細(xì)胞體積和脂滴變大；2.高能量飼喂和敲瘦素基因可同時促進(jìn)肥胖的發(fā)生,二者具有相關(guān)性,或存在交互作用(表現(xiàn)為協(xié)同作用)；3.肥胖小鼠miR-199a、PPARy2、C/EBPα、aP2、SREBP-1c基因在脂肪組織中的表達(dá)上調(diào),miR-199a與PPARγ2、C/EBPα等脂肪分化因子在脂肪組織中表達(dá)一致,提示miR-199a基因可能通過參與脂肪細(xì)胞的分化以調(diào)控肥胖相關(guān)基因的代謝；4. miR-199a表達(dá)水平與Lee's指數(shù)、體脂肪含量、游離脂肪酸和甘油三酯等呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系,提示miR-199a與肥胖的中間代謝有關(guān),參與脂質(zhì)積聚的過程,與肥胖的發(fā)生發(fā)展有直接的相關(guān)關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R589.2

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1 呂子全;郭非凡;;氨基酸感應(yīng)與糖脂代謝調(diào)控的研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2013年02期

2 陳雯;唐煒立;周智廣;;成纖維細(xì)胞生長因子21的糖脂代謝調(diào)節(jié)功能研究進(jìn)展[J];中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志;2013年02期

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本文編號：1287558