本文關(guān)鍵詞：蛋白酶體抑制劑MG132對大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎的干預(yù)作用探討

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【摘要】：目的:探討20S蛋白酶體在人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)中的變化情況以及蛋白酶體抑制劑MG132對大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritis,CIA)的干預(yù)效果及作用機(jī)制。方法:1、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測53例RA患者和35例健康對照者血清20S蛋白酶體含量。2.將64只健康清潔級雌性SD大鼠隨機(jī)分為空白對照組、CIA模型組、MG132干預(yù)模型組、單純MG132對照組共4組,每組16只。CIA模型組和MG132干預(yù)模型組注射牛Ⅱ型膠原建立CIA模型大鼠,在初次免疫后第21天,干預(yù)組大鼠以1mg/kg的劑量皮下注射MG132,每天一次,連續(xù)兩周(14天)。單純MG132對照組大鼠注射相同劑量的MG132。從建模開始每周觀察大鼠關(guān)節(jié)腫脹程度,計(jì)算關(guān)節(jié)炎指數(shù)(arthritis index,AI),在注射MG132干預(yù)完成后一周即初次免疫第42天稱重并處死大鼠,取肝臟稱重測量肝臟指數(shù),檢測血清尿素氮、肌酐、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)的含量;ELISA檢測血清TNF-α、IL-6、IL-10的含量;HE染色觀察關(guān)節(jié)滑膜組織的病理改變;熒光底物測定法檢測滑膜組織20S蛋白酶體的活性;蛋白質(zhì)印跡法(western blot)檢測大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織NF-κB/p65、IκBα蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1、RA患者血清20S蛋白酶體含量比健康對照組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.與CIA模型組比較,MG132干預(yù)模型組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)在注射完MG132后一周明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),且關(guān)節(jié)滑膜組織未見明顯增生,只伴有少量炎性細(xì)胞浸潤。3.與空白對照組大鼠比較,CIA模型組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織20S蛋白酶體活性增高,皮下注射MG132干預(yù)后關(guān)節(jié)滑膜組織20S蛋白酶體活性降低,與CIA模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.CIA模型組大鼠血清TNF-α、IL-6水平高于空白對照組(p0.05),IL-10的水平低于空白對照組(p0.05),注射蛋白酶體抑制劑MG132干預(yù)后,其血清TNF-α、IL-6水平顯著降低(p0.01),而IL-10的水平顯著升高(p0.01)。5.CIA模型組大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織高表達(dá)NF-κB/p65蛋白,以胞核NF-κB/p65表達(dá)增高更為明顯,與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),注射蛋白酶體抑制劑MG132干預(yù)后,其滑膜組織胞漿及胞核NF-κB/p65蛋白表達(dá)均顯著減少(p0.01)。6.與空白對照組比較,CIA模型組大鼠關(guān)節(jié)滑膜低表達(dá)IκBα蛋白(p0.01),注射MG132干預(yù)后關(guān)節(jié)滑膜IκBα蛋白表達(dá)顯著增多(p0.01)。7.正常大鼠皮下注射相同干預(yù)劑量的蛋白酶體抑制劑MG132后大鼠肝臟指數(shù)及血清尿素氮、肌酐、ALT、AST的含量與空白對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:RA患者血清中20S蛋白酶體呈高表達(dá)。大鼠CIA體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示,皮下注射蛋白酶體抑制劑MG132可明顯改善大鼠關(guān)節(jié)炎癥狀,其作用機(jī)制可能與MG132降低大鼠CIA關(guān)節(jié)滑膜組織20S蛋白酶體活性,減少其底物蛋白IκBα的表達(dá),從而抑制NF-κB活性有關(guān)。3.一定干預(yù)劑量的MG132對正常SD大鼠肝腎功能無明顯影響。
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R593.22

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本文編號：1256875