本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的SCL基因體外轉(zhuǎn)染ICC效果研究

  更多相關(guān)文章： ICC樣細(xì)胞 人SCL基因 重組慢病毒載體 轉(zhuǎn)染 PCR

【摘要】：目的:利用含有干細(xì)胞白血病(stem cell leukemia,SCL)的慢病毒介質(zhì)轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的ICC樣細(xì)胞,評(píng)估SCL基因慢病毒對(duì)膀胱ICC的體外轉(zhuǎn)染效果。方法:利用差速貼壁法體外分離、培養(yǎng)ICC樣細(xì)胞,并用ICC樣細(xì)胞特異性標(biāo)記物c-kit抗體進(jìn)行免疫標(biāo)記染色鑒定體外培養(yǎng)的ICC。用含SCL基因的重組慢病毒轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的ICC,參照慢病毒作用時(shí)間,分別于轉(zhuǎn)染后第2天、第3天、第5天運(yùn)用激光共聚焦顯微鏡通過觀察綠色熒光蛋白(GFP)的表達(dá)計(jì)算轉(zhuǎn)染效率,并提取細(xì)胞總RNA,利用RT-PCR方法檢測(cè)重組慢病毒載體介導(dǎo)的SCL基因在體外培養(yǎng)ICC的表達(dá)。結(jié)果:激光共聚焦顯微鏡下通過綠色熒光蛋白(GFP)的表達(dá)計(jì)算重組慢病毒對(duì)體外ICC樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,在MOI=10,轉(zhuǎn)染后第72小時(shí)轉(zhuǎn)染效率最高、生物活性最高、安全性最高,重組慢病毒能高效轉(zhuǎn)染ICC樣細(xì)胞,轉(zhuǎn)染效率達(dá)85%。分別在慢病毒轉(zhuǎn)染豚鼠膀胱ICC樣細(xì)胞后的第2天,3天、5天后通過RNA試劑盒提取細(xì)胞總RNA,通過RT-PCR法檢測(cè)慢病毒介導(dǎo)的SCL基因在ICC樣細(xì)胞中的表達(dá)。通過瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)?zāi)軌虬l(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)大小為1036bp特異性條帶,與SCL基因的大小一致,但是正常參照組和陽性參照組都沒有SCL基因表達(dá)。證實(shí)重組慢病毒載體可以有效地介導(dǎo)人SCL的表達(dá)。結(jié)論:成功體外培養(yǎng)并鑒定豚鼠膀胱ICC樣細(xì)胞,利用含人SCL基因的重組慢病毒載體能高效轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)ICC樣細(xì)胞,并成功介導(dǎo)SCL在ICC樣細(xì)胞中的表達(dá),為下一步研究利用SCL基因進(jìn)行體內(nèi)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R694.5

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