本文關(guān)鍵詞：創(chuàng)面負(fù)壓治療對(duì)糖尿病足創(chuàng)面肉芽組織TGF-β1的影響

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【摘要】：目的:通過(guò)分析創(chuàng)面負(fù)壓治療前后和傳統(tǒng)紗布換藥治療前后糖尿病足創(chuàng)面肉芽組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表達(dá)差異,探討創(chuàng)面負(fù)壓治療對(duì)糖尿病足肉芽組織TGF-β1的影響,為創(chuàng)面負(fù)壓治療促進(jìn)糖尿病足創(chuàng)面愈合提供理論依據(jù)。方法:1選取2013年11月至2015年3月間于解放軍白求恩國(guó)際和平醫(yī)院內(nèi)分泌科住院并符合入組標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn)的糖尿病足患者40例。通過(guò)計(jì)算機(jī)進(jìn)行完全隨機(jī)化分組將患者隨機(jī)分為創(chuàng)面負(fù)壓治療組(NPWT組)和傳統(tǒng)紗布換藥治療組(對(duì)照組),每組20例。2 NPWT組予以創(chuàng)面負(fù)壓治療,對(duì)照組予以傳統(tǒng)紗布換藥治療。兩組受試者分別于治療前(0天)及治療第7天(7天)取創(chuàng)面肉芽組織,每份創(chuàng)面肉芽組織均分為三組,并分別標(biāo)記為A組、B組和C組。3 A組取材后于4%多聚甲醛溶液中固定,4℃保存,標(biāo)本收齊后集中行蠟塊包埋保存。4取部分石蠟包埋的A組組織,切片并行HE染色,于光學(xué)顯微鏡(400×)下觀察肉芽組織生長(zhǎng)情況。5取部分石蠟包埋的A組組織,切片并行免疫組織化學(xué)染色,于光學(xué)顯微鏡(400×)下定性觀察TGF-β1表達(dá)情況,鏡下觀察棕黃色或棕褐色顆粒表示染色陽(yáng)性。每個(gè)切片隨機(jī)選取5個(gè)視野拍照;用數(shù)字醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(MoticMedical 6.0)對(duì)每個(gè)切片的5個(gè)隨機(jī)視野行光密度分析,平均光密度值(optical density,OD)表示每個(gè)切片TGF-β1含量,對(duì)TGF-β1行定量分析。6 B組于-80℃冰箱中保存,標(biāo)本收齊后行Western blot分析,β-actin為內(nèi)參照蛋白,Image J軟件分析條帶灰度。用TGF-β1與β-actin條帶灰度比值表示每個(gè)條帶TGF-β1含量,對(duì)TGF-β1蛋白表達(dá)行定量分析;7 C組取材后活組織立即放入液氮中送實(shí)驗(yàn)室于-80℃冰箱中保存,并立即行real-timepcr。所有實(shí)驗(yàn)過(guò)程在無(wú)rna酶環(huán)境下行擴(kuò)增并對(duì)pcr行熒光定量檢測(cè)。上游和下游引物對(duì)被設(shè)計(jì)為5′cccacaacgaaatctatgaca3′和5′agagcaacacgggttcag3′。gapdh為內(nèi)參照基因,設(shè)置對(duì)照組的第1號(hào)樣品為標(biāo)準(zhǔn)1,得到各樣本各目的基因的ct值。按照公式rq=2-ΔΔct計(jì)算各目的基因表達(dá)的相對(duì)定量值(rq值),用rq代表tgf-β1mrna表達(dá)量并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1肉眼觀察npwt組和對(duì)照組治療前創(chuàng)面,見(jiàn)肉芽組織色澤晦暗,觸之發(fā)硬;鏡下觀察兩組治療前創(chuàng)面he染色切片,見(jiàn)新鮮肉芽組織少,成纖維細(xì)胞少,新生血管少,炎性細(xì)胞多。肉眼觀察治療npwt組和對(duì)照組治療第7天創(chuàng)面,見(jiàn)新鮮肉芽組織形成,其中npwt組較對(duì)照組新鮮肉芽組織形成明顯,表現(xiàn)為鮮紅色、顆粒狀,觸柔軟濕潤(rùn);鏡下觀察兩組治療第7天he染色切片,可見(jiàn)新生肉芽組織,npwt組較對(duì)照組明顯,表現(xiàn)為大量新生血管和大量成纖維細(xì)胞形成;2鏡下觀察經(jīng)免疫組織化學(xué)染色的切片,見(jiàn)npwt組和對(duì)照組治療前創(chuàng)面肉芽組織中代表tgf-β1陽(yáng)性的棕黃色或棕褐色顆粒少,兩組治療后第7天創(chuàng)面肉芽組織中其中代表tgf-β1陽(yáng)性的棕黃色或棕褐色顆粒增多,其中npwt組較對(duì)照組更明顯。用平均光密度代表tgf-β1含量,對(duì)tgf-β1行定量分析:較治療前,治療第7天的npwt組和對(duì)照組均存在創(chuàng)面肉芽組織tgf-β1表達(dá)上調(diào)(npwt組t=8.250,p0.01,α=0.05;對(duì)照組t=3.204,p0.01,α=0.05),其中npwt組tgf-β1上調(diào)較對(duì)照組明顯(t=5.96,p0.01,α=0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3western印跡分析顯示:較治療前,治療第7天的npwt組和對(duì)照組均存在創(chuàng)面肉芽組織tgf-β1表達(dá)上調(diào)(npwt組t=5.648,p0.01,α=0.05;對(duì)照組t=10.734,p0.01,α=0.05),其中npwt組tgf-β1上調(diào)較對(duì)照組明顯(t=9.62,p0.01,α=0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;4rt-pcr分析tgf-β1基因表達(dá)水平顯示,治療第7天的npwt組和對(duì)照組肉芽組織均存在tgf-β1基因表達(dá)上調(diào)(npwt組t=11.321,p0.01,α=0.05;對(duì)照組t=9.671,p0.01,α=0.05),其中npwt組tgf-β1基因表達(dá)上調(diào)較對(duì)照組明顯(t=8.02,p0.01,α=0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:創(chuàng)面負(fù)壓治療和傳統(tǒng)紗布換藥治療可在一定程度上促進(jìn)糖尿病創(chuàng)面肉芽組織tgf-β1蛋白表達(dá)上調(diào)及基因表達(dá)上調(diào),增加創(chuàng)面肉芽組織形成,促進(jìn)創(chuàng)面愈合。和傳統(tǒng)紗布換藥治療相比,創(chuàng)面負(fù)壓治療更能明顯促進(jìn)糖尿病足創(chuàng)面肉芽組織TGF-β1蛋白表達(dá)上調(diào)及基因表達(dá)上調(diào),增加創(chuàng)面肉芽組織形成,從而加速創(chuàng)面的愈合。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2

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1 陳大志;董松林;祁兆建;范廣峰;王富貴;顧榮勝;;負(fù)壓封閉引流技術(shù)加中藥治療對(duì)創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)的影響[J];中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志;2011年12期

2 梁小玲;羅鑒蘭;;重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子配合美皮康治療Ⅲ度壓瘡10例效果觀察[J];齊魯護(hù)理雜志;2013年05期

3 姜珠倩;殷子斐;蘇永華;;中醫(yī)藥促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)的研究進(jìn)展[J];上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2013年05期

4 張銳喬;;VSD技術(shù)治療Ⅳ期壓瘡的療效觀察[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2013年16期

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本文編號(hào)：1250299