本文關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞極化在白塞病發(fā)病機(jī)制中作用的研究

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【摘要】：研究背景和目的：白塞病(BD)是一種累及全身多系統(tǒng)的慢性血管炎性疾病,發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,目前認(rèn)為是遺傳、感染、免疫和環(huán)境等多種因素共同作用的結(jié)果。固有免疫異常是BD發(fā)病機(jī)制中的重要因素,巨噬細(xì)胞是天然免疫的關(guān)鍵成員,巨噬細(xì)胞按照其表型和分泌的細(xì)胞因子可分為兩大類,即經(jīng)典活化型巨噬細(xì)胞(M1型)和替代活化型巨噬細(xì)胞(M2型)。但目前BD發(fā)病過程中巨噬細(xì)胞極化的類型、作用和機(jī)制未明。本研究的目的是揭示初治活動(dòng)BD患者血清對巨噬細(xì)胞表型和功能的影響,為探索新型治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。研究方法：1. ELISA檢測30名初治活動(dòng)BD血清和健康人血清中細(xì)胞因子IL10, IL6, IL8, TNFα和IFNΥ水平差異。2.人單核細(xì)胞來源巨噬細(xì)胞制備：Ficoll-Hypaque密度梯度離心法分離健康志愿者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs), CD14磁珠陽性分選單核細(xì)胞后,培養(yǎng)人單核細(xì)胞來源巨噬細(xì)胞(M0)。3.巨噬細(xì)胞極化標(biāo)準(zhǔn)亞型的建立：分別以IFN-Υ/LPS和IL4刺激M0巨噬細(xì)胞48小時(shí),誘導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)M1和M2型巨噬細(xì)胞,流式細(xì)胞儀測定巨噬細(xì)胞表面標(biāo)記CD86、CD163和CD206, ELISA檢測培養(yǎng)液上清細(xì)胞因子TNF-a和IL12,作為標(biāo)準(zhǔn)對照。4.檢測BD患者和HC血清對巨噬細(xì)胞極化表型的影響：收集14名初治活動(dòng)BD患者血清和14名姓名年齡匹配的健康志愿者血清,以1/10體積血清誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)分型的表面標(biāo)記和分泌細(xì)胞因子鑒定其表型。5.BD血清誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞極化的功能改變：流式細(xì)胞儀檢測不同巨噬細(xì)胞分型的吞噬功能；通過巨噬細(xì)胞與Naive CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng),流式細(xì)胞儀檢測胞內(nèi)細(xì)胞因子IFNΥ和IL17A的表達(dá),以測定不同巨噬細(xì)胞分型對Thl/17增殖分化的影響。6.BD血清誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化的可能分子機(jī)制探討：Western Blot檢測初治活動(dòng)BD患者血清刺激巨噬細(xì)胞不同時(shí)間后(p/T) STAT1和(p/T)NF-KBp65的蛋白水平,探索巨噬細(xì)胞極化的分子機(jī)制。結(jié)果：1.與健康人血清相比,初治活動(dòng)BD患者血清中細(xì)胞因子TNFα[BD 10.24pg/ml(0-93.5) vs HC 3.29pg/ml (0-10.67),p0.001], IFN y [BD 5.39pg/ml (0-57.89) vs HC 1.27pg/ml (0-12.31), p=0.029]、 IL8 [BD 22.28pg/ml (4.72-82.43) vs HC 3.29pg/ml (0-6.53),p0.001]和IL6 [BD 1O.Opg/ml (2.0-39.9) vs HC 2.09pg/ml (0-5.41),p0.001]水平均顯著增高,而IL10水平無明顯差異[BD 2.41pg/ml (0-27.21) vs HC 3.57pg/ml (0-60.21),p=0.172]。 BD患者血清IL-6水平與ESR之間呈明顯正相關(guān)(r=0.61,p=0.012),IL6水平與hCRP (r=0.626,p=0.009), L-8水平與hCRP (r=0.65,p=0.005), IL-10水平與hCRP均具有明顯相關(guān)性(r=0.446,p=0.013),余細(xì)胞因子與ESR或hCRP無相關(guān)性。BD患者血清IL-6, IL-8, IL-10, TNFα和IFNΥ水平與BDCAF2006評分均無相關(guān)性。2.與M0巨噬細(xì)胞相比,初治活動(dòng)BD血清可誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分化為M1樣巨噬細(xì)胞,表現(xiàn)為CD86表達(dá)增高(MBD 66.67 ± 15.85% vs MO 45.88 ± 9.75%, p=0.024),CD163表達(dá)降低(MBD 2.2 ± 1.57% vs MO 5.69 ± 2.43%, p=0.009),培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子IL12 [MBD 139.7 pg/ml (36.59-1038.17) vs MO 8.48 pg/ml (5.27-132.93),p=0.019]水平增高,TNF-a水平有增高趨勢(MBD 205.6± 232.37 pg/ml vs MO 56.02 ±45.99 pg/ml, p=0.189),而HC血清誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞符合M0巨噬細(xì)胞。3.與M0巨噬細(xì)胞相比,M1型巨噬細(xì)胞(Ml 51.38 ± 16.83% vs MO 27.03 ± 11.14%, p=0.014)和初治活動(dòng)BD血清(MBD 50.53 ± 16.93% vs MO 27.03 ± 11.14%, p=0.011)均可誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞吞噬功能顯著增加,HC誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞吞噬功能有增強(qiáng)趨勢,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(MHC 39.26 ± 15.47% vs MO 27.03 ± 11.14%, p=0.134).4.與M0巨噬細(xì)胞相比,M1型巨噬細(xì)胞與Naive CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)后CD4+IFNγ+水平增高(Ml 19.5 ± 2.62% vs MO 11.78 ± 3.45%, p=0.037),同樣,初治活動(dòng)BD血清誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞與Naive CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)后T細(xì)胞CD4+IFNΥ表達(dá)亦有增高(MBD 18.5 ± 2.29% vs Mo 11.78 ± 3.45%, p=0.048),而HC誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞則不然(MBD 10.89 ± 3.8% vs Mo 11.89 ± 3.25%, p=0.745).5.與M0巨噬細(xì)胞相比,M1型巨噬細(xì)胞和初治活動(dòng)BD血清誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞與Naive CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)后CD4+IL17A+水平增高,但尚未未達(dá)到統(tǒng)計(jì)型差異。6. LPS/IFNΥ和初治活動(dòng)BD血清刺激巨噬細(xì)胞后,STAT1和NF-KBp65蛋白磷酸化水平均顯著增加。結(jié)論：初治活動(dòng)BD血清刺激巨噬細(xì)胞可誘導(dǎo)產(chǎn)生M1樣巨噬細(xì)胞,并增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能,誘導(dǎo)T細(xì)胞向Thl為主的細(xì)胞增殖分化。BD血清中TNFa、 IFNΥ、 IL8和IL6水平高表達(dá),可能通過激活JAK-STAT和NF-kB信號(hào)通路起作用。研究結(jié)果為揭示BD發(fā)病機(jī)制提供了新線索,為探索新型治療靶點(diǎn)提供了一定的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R597.9

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本文編號(hào)：1219722