本文關(guān)鍵詞：卵巢早衰患者來(lái)源的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的建系、鑒定及誘導(dǎo)分化

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【摘要】：目的:建立和鑒定卵巢早衰(又稱原發(fā)性卵巢功能不全,primary ovarian insufficiency,POI)患者來(lái)源的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs),研究其向原始生殖細(xì)胞分化的潛能。方法:將表達(dá)Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4和Lin28基因的p EB-C5和表達(dá)SV40 T抗原的p EB-Tg質(zhì)粒轉(zhuǎn)染POI患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞,將其重編程為i PSCs并檢測(cè)其干細(xì)胞多能性特性。添加轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transfroming growth factor-β1,TGF-β1)和骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)后,應(yīng)用real-time PCR和Western blot方法分別檢測(cè)原始生殖細(xì)胞標(biāo)志物的mRNA及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:通過堿性磷酸酶染色、細(xì)胞免疫熒光、擬胚體及畸胎瘤形成檢測(cè),證明了POI患者外周血來(lái)源的i PSCs可成功向3胚層細(xì)胞分化并保持多能性。添加TGF-β1和BMP4后,誘導(dǎo)組原始生殖細(xì)胞特異性標(biāo)志物干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(stem cell growth factor receptor,c-Kit)、發(fā)育多能性相關(guān)蛋白3(developmental pluripotency-associated 3,STELLA/DPPA3)和DEAD盒多肽4(DEAD box polypeptide 4,VASA/DDX4)的mRNA水平明顯升高(P0.05),VASA/DDX4蛋白表達(dá)水平亦明顯增加(P0.05)。結(jié)論:POI患者外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外可被成功誘導(dǎo)成無(wú)外源性基因整合的i PSCs,并且具有多能分化特性,添加TGF-β1和BMP4后可向原始生殖細(xì)胞分化。
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心;中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心;廣東省中醫(yī)院生殖科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81170533) 廣東省科技計(jì)劃(No.2013B021800091) 廣東省大學(xué)生創(chuàng)新計(jì)劃(No.20132049)
【分類號(hào)】：R711.75
【正文快照】： adding TGF-β1 and BMP4.卵巢早衰(premature ovarian failure;又稱原發(fā)性卵巢功能不全,primary ovarian insufficiency,POI)是指育齡女性40歲以前出現(xiàn)卵巢功能減退,表現(xiàn)閉經(jīng)、高促性腺激素和低雌激素狀態(tài)[1],是女性不孕的常見原因。其診斷標(biāo)準(zhǔn)為40歲之前出現(xiàn)原發(fā)或繼發(fā)性閉，

本文編號(hào)：1217594