本文關(guān)鍵詞：糖尿病前期和2型糖尿病患者血漿中差異表達(dá)microRNAs的篩選及臨床診斷價(jià)值研究

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【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分析正常對(duì)照組、2型糖尿病(T2D)患者和糖尿病前期患者血漿微小核糖核酸(miRNA)表達(dá)譜的變化,發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的miRNAs,并從血漿mi RNA水平探討T2D的發(fā)病機(jī)制,為T(mén)2D早期診斷尋找可能的新的生物標(biāo)志物。方法:(1)采集糖尿病前期組、T2D組和健康對(duì)照組各3例血漿,提取RNA,利用安捷倫miRNA芯片檢測(cè)miRNAs表達(dá)量,并根據(jù)芯片結(jié)果,從中挑選兩兩對(duì)比表達(dá)均有顯著性差異的miRNAs以進(jìn)行后續(xù)驗(yàn)證分析。(2)于2014年3月~2015年10月,收集年齡及性別匹配的、由貴州省人民醫(yī)院內(nèi)分泌科門(mén)診確診為T(mén)2D和糖尿病前期病人以及同期健康體檢正常者各50例血漿樣本,對(duì)研究對(duì)象的臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,并提取樣本RNA,采用SYBR Green法進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)驗(yàn)證差異表達(dá)的mi RNAs在3組樣本中的表達(dá)情況。(3)在生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)—Targetscan、microRNAorg和pita,對(duì)miRNA靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè),得到在3個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)均有預(yù)測(cè)的miRNA靶基因并分析其生物學(xué)功能。(4)最后用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并進(jìn)一步建立受試者工作曲線(xiàn)(ROC曲線(xiàn)),再通過(guò)計(jì)算ROC曲線(xiàn)下面積(AUC)來(lái)判斷每一個(gè)miRNA的臨床診斷能力。結(jié)果:(1)同正常對(duì)照組相比,空腹血糖(FPG)、餐后2小時(shí)血糖(2hPG)和糖化血紅蛋白(HbA1c)在糖尿病前期和T2D組中呈現(xiàn)顯著性遞增(P0.0001)。(2)miRNA芯片分析結(jié)果發(fā)現(xiàn):在健康對(duì)照組、T2D和糖尿病前期中,hsa-miRNA-1249(hsa-miR-1249)、hsa-mi R-320b和hsa-miR-6069呈遞減式下調(diào),而hsa-miR-572在T2D、糖尿病前期和健康對(duì)照組中遞減式下調(diào)。(3)通過(guò)qRT-PCR驗(yàn)證顯示:hsa-miR-1249在健康對(duì)照組、T2D和糖尿病前期中呈遞減式下調(diào),hsa-miR-320b在健康對(duì)照組、糖尿病前期和T2D中呈遞減式下調(diào),hsa-miR-572在T2D、糖尿病前期和健康對(duì)照組中遞減式下調(diào),而hsa-miR-6069未得到驗(yàn)證。qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果與芯片結(jié)果基本一致。(4)hsa-miR-1249預(yù)測(cè)到相應(yīng)靶基因18個(gè),hsa-miR-572找到29個(gè),hsa-miR-320b找到915個(gè),GO和KEGG通路分析得到這些靶基因主要與多細(xì)胞有機(jī)體的發(fā)展、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化、凋亡、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞代謝過(guò)程調(diào)控等生物學(xué)功能相關(guān)。(5)對(duì)于區(qū)分T2D和正常對(duì)照組,hsa-miR-1249、hsa-miR-320b和hsa-miR-572的AUC值分別為0.784(95%CI:0.685~0.883)、0.946(95%CI:0.906~0.985)和0.843(95%CI:0.766~0.920),而對(duì)于區(qū)分糖尿病前期和正常對(duì)照組,hsa-miR-1249、hsa-miR-320b和hsa-miR-572的AUC值分別為0.887(95%CI:0.818~0.957)、0.635(95%CI:0.525~0.744)和0.69(95%CI:0.580~0.793)。結(jié)論:本研究獲得的T2D和糖尿病前期血漿中存在差異表達(dá)的miRNAs(hsa-miR-1249、hsa-miR-320b和hsa-miR-572),可能在T2D早期診斷發(fā)揮重要作用,并可能參與了T2D的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1;R440

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