本文關(guān)鍵詞：基于液滴懸掛方法的體外三維胰島微組織構(gòu)建研究

  更多相關(guān)文章： 三維胰島模型 體外三維胰島微組織 液滴懸掛 β細(xì)胞 原代胰島

【摘要】：【背景】糖尿病是世界上主要的慢性疾病之一,給人類健康帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。而糖尿病主要的發(fā)病機制之一是胰島功能障礙,所以有關(guān)胰島的糖尿病研究已成為世界各醫(yī)學(xué)研究院的一個熱點問題。目前,研究糖尿病的常規(guī)體外實驗?zāi)Ｊ绞菃螌蛹?xì)胞培養(yǎng),但它不能再現(xiàn)體內(nèi)的三維組織結(jié)構(gòu)。隨著微-納米技術(shù)的發(fā)展,利用一些組織工程的方法構(gòu)建的體外三維胰島模型可更好地模擬體內(nèi)胰腺的胰島。體外三維胰島模型可比傳統(tǒng)的單層細(xì)胞培養(yǎng)具有更佳的細(xì)胞功能,在生理或病理條件下都能夠作為實驗平臺,更好的觀察胰島行為,在研究糖尿病的分子機制和臨床胰島移植等方面具有潛在的應(yīng)用前景。近年來,多項研究利用組織工程方法探索構(gòu)建體外三維胰島模型,但采用液滴懸掛法構(gòu)建體外三維胰島模型并將其與二維單層細(xì)胞和原代胰島進行形態(tài)與功能方面對比的研究較少。本課題將利用液滴懸掛法構(gòu)建體外三維β細(xì)胞球微組織作為體外三維胰島模型,對這一問題進行探討�！灸康摹�1.采用液滴懸掛法探索構(gòu)建適宜大小體外三維胰島微組織。2.從形態(tài)和功能兩個方面對所構(gòu)建的體外三維胰島微組織和二維β細(xì)胞進行對比。3.從形態(tài)和功能兩個方面對所構(gòu)建的體外三維胰島微組織和原代胰島進行對比�！痉椒ā�1.制備液滴懸掛板,培養(yǎng)β細(xì)胞,根據(jù)不同條件,探索制備適宜形態(tài)大小的體外三維胰島微組織的條件,成功制備后,運用細(xì)胞活性鑒定試劑盒鑒定其活性。2.采用倒置顯微鏡和免疫熒光技術(shù)觀察體外三維胰島微組織和二維β細(xì)胞形態(tài)上的異同,采用葡萄糖刺激胰島素釋放實驗觀察體外三維胰島微組織和二維β細(xì)胞功能上的異同。3.提取大鼠原代胰島,建立原代胰島模型,采用倒置顯微鏡、免疫熒光技術(shù)和電鏡技術(shù)觀察體外三維胰島微組織和原代胰島形態(tài)上的異同,采用葡萄糖刺激胰島素釋放實驗觀察體外三維胰島微組織和原代胰島功能上的異同�！窘Y(jié)果】1.采用液滴懸掛法構(gòu)建適宜形態(tài)大小體外三維胰島微組織的條件是用密度105個/mlβ細(xì)胞液滴30μl鋪展為直徑5 mm的懸滴。2.體外三維胰島微組織培養(yǎng)7天后,絕大部分細(xì)胞活性良好。3.體外三維胰島微組織與二維β細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上相比,體外三維胰島微組織中β細(xì)胞聚集成球形、橢球形或不規(guī)則形的立體結(jié)構(gòu),直徑大小約100-200μm,細(xì)胞與細(xì)胞之間排列緊密;免疫熒光實驗顯示,體外三維胰島微組織表達豐富的胰島素。4.在功能上進行對比,體外三維胰島微組織胰島素釋放指數(shù)(2.08±0.14)高于二維β細(xì)胞胰島素釋放指數(shù)(1.49±0.21)(P0.05)。5.體外三維胰島微組織和原代胰島在形態(tài)學(xué)上進行對比,原代胰島呈球形、橢球形或不規(guī)則形立體結(jié)構(gòu),直徑大小約100-200μm,細(xì)胞與細(xì)胞之間排列緊密,原代胰島外表面光滑,有一層膜包裹;體外三維胰島微組織形態(tài)大小和原代胰島類似,但沒有包膜包裹,細(xì)胞裸露在表面。免疫熒光實驗顯示,體外三維胰島微組織的β細(xì)胞分布和胰島素的表達量與原代胰島類似。6.在功能上進行對比,三維胰島微組織胰島素釋放指數(shù)(2.08±0.14)低于原代胰島胰島素釋放指數(shù)(2.72±0.31)(P0.05)�！窘Y(jié)論】1.通過探索實驗條件,采用液滴懸掛法可以構(gòu)建適宜形態(tài)大小且活性良好的體外三維胰島微組織。2.體外三維胰島微組織與二維β細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上相比,體外三維胰島微組織為立體結(jié)構(gòu);功能上相比,體外三維胰島微組織的胰島素分泌功能優(yōu)于二維β細(xì)胞。3.體外三維胰島微組織與原代胰島在形態(tài)學(xué)上相比,體外三維胰島微組織與原代胰島類似;功能上相比,體外三維胰島微組織胰島素分泌功能尚不及原代胰島。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.1

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔云甫,閆朝歧,周文學(xué),郭筠秋;兩種酶對豬胰島消化分離效果的對比[J];中華器官移植雜志;2000年06期

2 張家慶;胰島移植有突破性進展[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)分泌學(xué)分冊);2000年04期

3 馬玉珍,李鳳歧,李冬英;胰島移植治療胰島素依賴型糖尿病[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2001年02期

4 張鑫 ,高居忠;胰島移植現(xiàn)狀[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年03期

5 李保國,華澤釗,張洪德,王煜非,王國興;微膠囊化胰島移植研究進展[J];上海醫(yī)學(xué);2002年07期

6 孫銘,寧剛,宋繼昌;異種胰島移植研究的新進展[J];透析與人工器官;2002年02期

7 陳玉泉,江春平;胰島移植臨床應(yīng)用進展[J];肝膽胰外科雜志;2003年02期

8 張雷,單世光;胰島移植的現(xiàn)狀與展望[J];中國糖尿病雜志;2003年04期

9 宋振順,顧克菊,張建國;成人胰島大容量分離技術(shù)的改進及胰島功能檢測[J];中華外科雜志;2004年15期

10 黃躍南,郭欣,田素禮,吳德全,單世光;成年豬胰島分離純化方法的改良[J];世界華人消化雜志;2005年15期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐晶晶;黃曉萍;崔岱;;胰島移植的臨床應(yīng)用及護理新進展[A];長三角糖尿病教育研討會資料匯編——行動、健康、和諧[C];2008年

2 吳育連;;胰島移植現(xiàn)況[A];2005年浙江省器官移植學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

3 張梅;劉超;徐書杭;劉翠萍;;短期體外培養(yǎng)胰島提高胰島移植的效果[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會糖尿病分會第十次全國糖尿病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

4 陳小平;;胰島移植治療糖尿病的研究應(yīng)用進展[A];中華醫(yī)學(xué)會第十一屆全國胰腺外科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2006年

5 邵益;嚴(yán)盛;鄭樹森;;小鼠不同部位胰島移植的對比研究[A];2012中國器官移植大會論文匯編[C];2012年

6 邵益;嚴(yán)盛;鄭樹森;;小鼠不同部位胰島移植的對比研究[A];2012年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

7 馬俊磊;;胰島與間充質(zhì)干細(xì)胞共移植改善胰島移植效果[A];2013中國器官移植大會論文匯編[C];2013年

8 石玉濤;馬玉珍;;胰島移植治療胰島素依賴型糖尿病[A];新世紀(jì)中國低溫生物醫(yī)學(xué)發(fā)展研討會論文匯編[C];2000年

9 陳津;馬予潔;黃梁滸;蔡錦全;付云峰;王慶華;譚建明;;胰島與間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合移植治療糖尿病的實驗研究[A];2012中國器官移植大會論文匯編[C];2012年

10 劉定志;肖衡;杜成友;羅詩樵;;移植胰島血管化的觀察[A];2012中國器官移植大會論文匯編[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳英云 鄒大鵬;世界首例人胚及成人胰島移植手術(shù)成功實施[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

2 彭永德 胡遠峰;胰島干細(xì)胞移植-l型糖尿病患者的希望[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

3 記者 王璐　通訊員 梁國清;“養(yǎng)豬”治病救人[N];大眾衛(wèi)生報;2012年

4 應(yīng)慶;異種胰島移植開辟糖尿病治療新途徑[N];中國醫(yī)藥報;2005年

5 梁闊，首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院普外科主治醫(yī)師，，博士研究生。 羅斌，首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院普通外科主任醫(yī)師。;豬胰島救治糖尿病[N];北京科技報;2009年

6 青云;胰島移植免疫排斥反應(yīng)的防治[N];中國醫(yī)藥報;2004年

7 通訊員 陳英云 施e

本文編號：1170765