本文關(guān)鍵詞：熱射病大鼠認(rèn)知功能遠(yuǎn)期損害及其海馬NMDA受體表達(dá)的研究

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【摘要】：背景熱射病(heat stroke,HS)是一種危及生命的急癥,以中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙為主要表現(xiàn),神經(jīng)功能后遺癥以小腦和認(rèn)知功能損害最為突出,但目前并沒有針對熱射病引起遠(yuǎn)期認(rèn)知功能損害的實(shí)驗(yàn)研究。熱射病后認(rèn)知功能損害的機(jī)制尚不完全清楚,離子型谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受體可通過改變突觸可塑性和興奮性氨基酸毒性作用影響學(xué)習(xí)記憶能力,參與缺血缺氧損傷、神經(jīng)退行性變等多種生理和病理過程,熱射病后海馬NMDA受體的表達(dá)變化及其與認(rèn)知功能障礙的關(guān)系目前仍不清楚。目的通過建立熱射病大鼠模型,觀察發(fā)病7天及21天后水迷宮實(shí)驗(yàn),研究熱射病認(rèn)知功能的遠(yuǎn)期損害。檢測熱射病大鼠發(fā)病即刻、7天及21天后海馬NMDA受體亞基NR2A、NR2B的表達(dá),探討熱射病后海馬神經(jīng)元NMDA受體的動態(tài)表達(dá)變化及其與認(rèn)知功能損害的關(guān)系。方法1.熱射病大鼠模型的建立及分組建立熱射病大鼠模型,將造模成功后的大鼠按照隨機(jī)原則分為3組,熱射病即刻組(HS0,n=10)、熱射病7天組(HS7,n=21)、熱射病21天組(HS21,n=21)。18只大鼠作為手術(shù)對照組(Sham,n=18)。HS0組大鼠在造模成功后立即斷頭取腦,留取海馬組織。2.Morris水迷宮測試HS7和HS21組分別于造模后對應(yīng)時間行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為兩部分:定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)。在最后一次水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,各組大鼠隨機(jī)抽取4只立即斷頭取腦,留取海馬組織。3.mRNA及蛋白檢測應(yīng)用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技術(shù)和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot,WB)分析HS0、HS7、HS21及Sham組大鼠海馬組織中NR2A、NR2B基因轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平的變化。4.統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS20.0及Graph Pad Prism 5統(tǒng)計軟件。P0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.定位航行實(shí)驗(yàn)HS7組與Sham組:HS7組較Sham組逃避潛伏期明顯延長(P0.05);HS21組與Sham組:1-3 d時,HS21組與Sham組潛伏期無顯著性差異(P0.05);4-5 d時,HS21組較Sham組潛伏期延長(P0.05);HS21組與HS7組:3-5 d時,HS21組較HS7組潛伏期縮短(P0.05)。2.空間探索實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)象限停留時間:HS7組較Sham組縮短(P0.05);HS21組與Sham組無顯著性差異(P0.05);HS21組較HS7組延長(P0.05)。穿越平臺次數(shù):HS7組和HS21組較Sham組減少(P0.05);HS21組與HS7組無顯著性差異(P0.05)。3.RT-PCR檢測結(jié)果(1)各組NR2A mRNA水平:HS0、HS7、HS21組NR2A mRNA的表達(dá)水平呈升高趨勢,在第7天升高至峰值,第21天較第7天稍下降。各熱射病組與Sham組相比均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(2)各組NR2B mRNA水平:HS0、HS7、HS21組NR2B mRNA的表達(dá)水平呈升高趨勢。各熱射病組與Sham組相比均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。4.Western-Blot檢測結(jié)果:(1)各組NR2A蛋白水平:HS0與Sham組比較NR2A蛋白水平明顯下降(P0.05),HS7、HS21組與Sham組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。在熱射病發(fā)生后即刻N(yùn)R2A蛋白水平下降,隨著熱射病后恢復(fù)期時間的延長,NR2A蛋白水平呈升高趨勢。(2)各組NR2B蛋白水平:HS0與Sham組比較NR2B蛋白水平明顯下降(P0.05),HS7、HS21組與Sham組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。在熱射病發(fā)生后即刻N(yùn)R2B蛋白水平下降,隨著熱射病后恢復(fù)期時間的延長,NR2B蛋白水平在第7天升高,21天時稍下降。結(jié)論1.熱射病后大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力下降,并可遺留遠(yuǎn)期認(rèn)知功能損害。2.熱射病后海馬組織中NMDA受體表達(dá)變化可能與認(rèn)知功能損害有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R594.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1168118