本文關(guān)鍵詞：ERK通路在慢性高原病患者骨髓有核紅細胞中的初步研究

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【摘要】：目的通過觀察慢性高原病患者骨髓有核紅細胞中Ras、Raf、MEK、ERK水平的變化,探討ERK信號通路在CMS發(fā)生、發(fā)展中的作用。并進一步通過應用ERK信號通路抑制劑PD98059,探討PD98059在該信號通路中的作用,進一步驗證ERK信號通路對CMS發(fā)病機制的影響。方法選擇青海大學附屬醫(yī)院收治的男性CMS患者及單純陳舊性骨折患者各16例,采集骨髓液提取單個核細胞,用CD71與CD235a抗體篩選陽性細胞。其中CMS組骨髓有核紅細胞分為5組:空白對照組、DMSO溶劑對照組、PD98059 5?mol/L、PD98059 10?mol/L、PD98059 20?mol/L。于37℃、5%CO2、3%O2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h,用Elisa法測定上清液中Ras-GTP的水平,用RT-PCR法測BRaf、MEK、ERK1/2 m RNA的表達,用Western Blot方法檢測p-BRaf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白的表達。結(jié)果1 CMS組骨髓有核紅細胞中Ras-GTP水平[(21.34?0.78)pg/mL]高于對照組[(19.38?0.88)pg/m L],差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。CMS組BRaf、MEK、ERK1/2 m RNA的水平(1.60?0.38、2.57?1.50、1.11?0.59、1.08?0.79)均高于對照組(0.81?0.44、0.95?0.41、0.52?0.55、0.38?0.28),差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2 PD98059對Ras-GTP的影響:各組間Ras-GTP的水平差異無統(tǒng)計學意義(P=0.798)。3 PD98059對BRaf、MEK、ERK1/2 m RNA的影響:與溶劑對照組相比,BRaf、MEK m RNA的表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P值為0.826、0.298)。與PD98059 20?mol/L比較,ERK1/2 m RNA的表達水平差異有統(tǒng)計學意義(P值為0.001、0.002)。4 PD98059對p-BRaf、p-MEK、p-ERK1/2蛋白的影響:與溶劑對照組相比,p-BRaf、p-MEK蛋白的表達差異無統(tǒng)計學意義(P值為0.370、0.351)。與PD98059 20?mol/L比較,p-ERK1/2蛋白水平差異有統(tǒng)計學意義(P值為0.001、0.007)。結(jié)論1 Ras/Raf/MEK/ERK通路的異常激活可能參與了CMS紅細胞過度積累的發(fā)生、發(fā)展過程,推測其可能是CMS發(fā)生機制中的信號傳導通路之一。2PD98059能夠下調(diào)ERK1/2 m RNA及p-ERK1/2蛋白的表達。
【學位授予單位】：青海大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R594.3

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