本文關(guān)鍵詞：骨橋蛋白介導(dǎo)甲狀腺相關(guān)眼病發(fā)病機(jī)制的研究

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【摘要】：研究目的甲狀腺相關(guān)眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)是彌漫性毒性甲狀腺腫(Graves’disease,GD)最常見的甲狀腺外表現(xiàn),是累及眼眶的一種自身免疫性炎癥性疾病。TAO具體發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,至今仍不十分清楚,目前仍缺乏有效性治療手段。目前證據(jù)表明眼眶成纖維細(xì)胞(orbital fibroblasts,OFs)在TAO發(fā)病機(jī)制中起核心作用,參與TAO眼眶炎癥、組織重塑和纖維化等多種病理過(guò)程。骨橋蛋白(Osteopontin,OPN)是一種分泌型磷酸化糖蛋白,在一些自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用,具有多種生物學(xué)效應(yīng),可誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖,并且和組織纖維化有密切關(guān)系,最近研究發(fā)現(xiàn),GD患者血清中OPN水平明顯增高。為了探究OPN和TAO發(fā)病的關(guān)系,首先擬檢測(cè)TAO眼眶脂肪結(jié)締組織中OPN mRNA和蛋白表達(dá)情況,相關(guān)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)情況以及和OPN mRNA表達(dá)量之間的關(guān)系。然后進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn),用OPN刺激TAO患者來(lái)源OFs,觀察OPN對(duì)OFs增殖、移行以及對(duì)VEGF和CollagenⅠmRNA表達(dá)量的影響并探究其相關(guān)機(jī)制。研究方法1.OPN在TAO患者眼眶脂肪結(jié)締組織中的表達(dá)情況活動(dòng)期或穩(wěn)定期TAO患者行眼眶減壓手術(shù)時(shí),取眼眶脂肪結(jié)締組織,用行眼整形手術(shù)患者的正常眼眶脂肪結(jié)締組織作為對(duì)照組,每組6例。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)法和Western blotting法分別檢測(cè)OPN mRNA和蛋白表達(dá)情況。然后通過(guò)RT-PCR檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子包括CD40L、CollagenⅠ、HAS2、NF-κB、CCL20、CD44、IFN-α和IFN-γmRNA表達(dá)情況,并和OPN mRNA表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析。2.OPN對(duì)TAO患者OFs的影響及其作用機(jī)制探討排除其它免疫性及炎癥性疾病的TAO患者,行眼眶減壓手術(shù)時(shí),無(wú)菌條件下取眼眶脂肪結(jié)締組織,組織塊法培養(yǎng)OFs細(xì)胞。用OPN(5uM)進(jìn)行預(yù)處理后,采用MTT法觀察OFs增殖速率,并通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察OPN對(duì)OFs移行的影響,再通過(guò)RT-PCR法檢測(cè)OFs的VEGF和CollagenⅠmRNA表達(dá)量。同法培養(yǎng)OFs細(xì)胞,用PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002(20uM)、MAPK/ERK信號(hào)通路抑制劑PD98059(20uM)、LY294002和PD98059(20uM+20uM)以及OPN單克隆抗體1A12(20μg/ml)分別聯(lián)合OPN對(duì)OFs進(jìn)行預(yù)處理,通過(guò)MTT法、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和RT-PCR法分別觀察對(duì)OFs增殖、移行速率的影響,并檢測(cè)OFs的VEGF和CollagenⅠmRNA表達(dá)量的變化。結(jié)果1.活動(dòng)期TAO患者眼眶脂肪結(jié)締組織OPN mRNA和蛋白表達(dá)量及相關(guān)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)量升高活動(dòng)期TAO患者組眼眶脂肪結(jié)締組織中OPN mRNA比穩(wěn)定期TAO患者組和正常對(duì)照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);OPN蛋白表達(dá)量也明顯增加,和穩(wěn)定期TAO患者OPN蛋白表達(dá)量相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但和正常對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�；顒�(dòng)期TAO患者組眼眶脂肪結(jié)締組織中CD40L、CollagenⅠmRNA表達(dá)量比穩(wěn)定期TAO患者組和正常對(duì)照組高,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);HAS2 mRNA表達(dá)量也升高,但和穩(wěn)定期TAO患者組和正常對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);活動(dòng)期和穩(wěn)定期TAO患者組CD44 mRNA表達(dá)量均低于正常對(duì)照(P0.05)。TAO患者OPN mRNA表達(dá)量和CD40L、CD44、HAS2 mRNA表達(dá)量之間存在明顯的線性相關(guān)關(guān)系(P0.05)。2.OPN可促進(jìn)OFs的增殖、移行速率,并增加VEGF和CollagenⅠmRNA表達(dá)量。經(jīng)過(guò)OPN處理后,OFs增殖和移行速率加快,加入1A12和LY294002后,OFs增殖和移行速率變慢,而加入PD98059后對(duì)這些效應(yīng)無(wú)明顯影響。經(jīng)OPN預(yù)處理后,OFs的VEGF和CollagenⅠmRNA表達(dá)量明顯增加,加入1A12和LY294002后,VEGF和CollagenⅠmRNA表達(dá)量降低,加入PD98059后對(duì)兩種基因mRNA表達(dá)量無(wú)明顯影響。結(jié)論活動(dòng)期TAO患者眼眶脂肪結(jié)締組織OPN mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高,同時(shí)CD40L、CollagenⅠ和HAS2 mRNA表達(dá)量也增加,且CD40L、CD44、HAS2mRNA表達(dá)量和OPN mRNA表達(dá)量之間呈明顯的線性相關(guān)關(guān)系。OPN可以通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路促進(jìn)OFs增殖和移行,刺激OFs高表達(dá)CollagenⅠ和VEGF mRNA,說(shuō)明OPN可能在活動(dòng)期TAO發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用,通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路,協(xié)同CD40L、HAS2活化OFs以促進(jìn)眼眶炎癥的發(fā)生發(fā)展以及眼眶組織重塑和纖維化。
【關(guān)鍵詞】：骨橋蛋白 甲狀腺相關(guān)眼病 眼眶脂肪結(jié)締組織 眼眶成纖維細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R581;R771.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮略詞表10-11
• 前言11-13
• 第一部分 骨橋蛋白在TAO眼眶脂肪結(jié)締組織中的表達(dá)13-27
• 一、材料與方法13-19
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-24
• 三、討論24-27
• 第二部分 骨橋蛋白對(duì)TAO眼眶成纖維細(xì)胞的影響及其作用機(jī)制研究27-39
• 一、材料與方法27-32
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-36
• 三、討論36-39
• 全文總結(jié)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-48
• 綜述48-60
• 參考文獻(xiàn)52-60
• 在讀期間發(fā)表論文和參加科研工作情況說(shuō)明60-61
• 致謝61

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1 羅清禮;;眼眶脂肪與甲狀腺相關(guān)眼病[J];眼科;2005年06期

2 熊煜;;眼眶脂肪減壓術(shù)治療甲狀腺眼病的療效觀察[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年18期

3 李淑芬;用眶脂肪填充下瞼粘連性瘢痕[J];實(shí)用眼科雜志;1986年04期

4 邱曉東,周興亮,宮昔愿;結(jié)膜入路不去眶脂肪的眼袋整形術(shù)[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2000年03期

5 歐婉芳;;“雙眼皮”成形術(shù)[J];廣東醫(yī)學(xué);1964年S4期

6 何彥津,宋國(guó)祥,田文芳,肖利華,信惠敏;Tolosa-Hunt綜合征CT和MRI掃描分析[J];實(shí)用眼科雜志;1993年11期

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8 孫豪;宋建良;姚建民;譚曉燕;范希玲;吳守成;沈向前;葉坡;;保留眶脂肪的瞼袋整復(fù)術(shù)[J];中華整形燒傷外科雜志;1998年02期

9 楊景存;;一個(gè)簡(jiǎn)單的超聲波 B 型掃描器[J];河南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1975年01期

10 陳小劍;張志升;;眼袋分型及手術(shù)方法選擇[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué);2008年01期

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2 婁恒;骨橋蛋白介導(dǎo)甲狀腺相關(guān)眼病發(fā)病機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

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