發(fā)布時(shí)間：2017-10-23 04:03

  本文關(guān)鍵詞：姜黃素化合物對急性高脂血癥大鼠肝臟脂代謝的影響及其作用機(jī)制

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【摘要】：目的:隨著人們生活方式及飲食結(jié)構(gòu)的顯著改變,高脂血癥(Hyperglipemia,HLP)已經(jīng)成為我國重要的公共健康問題。調(diào)查顯示,目前我國18歲及以上成人的血脂異�；疾÷室迅哌_(dá)18.6%,其中高甘油三脂血癥患病率11.9%,明顯高于膽固醇血癥患病率2.9%及低高密度脂蛋白血癥7.4%等類型[1]。眾所周知,肝臟是人體脂肪代謝的重要器官,涉及脂肪的合成、分解、轉(zhuǎn)運(yùn)等過程。而肝臟的脂代謝失衡,將會(huì)逐漸引起脂肪在肝臟的大量聚集并沉積,最終導(dǎo)致出現(xiàn)非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD),NAFLD與糖尿病和肥胖關(guān)系密切,近二十年間,NAFLD的患病率增加了一倍,成為西方國家頭號(hào)肝病[2]。NAFLD包括非酒精性單純性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver,NAFL)、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis,NASH)甚至肝硬化和肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。肝臟脂質(zhì)代謝過程非常復(fù)雜,而脂肪酸的β氧化是脂肪分解的重要形式。肉毒堿棕櫚�；D(zhuǎn)移酶(camitine palmitoyltransferase,CTP-1A)是脂肪酸β氧化過程中的重要限速酶,CTP-1A的水平變化與高脂血癥的發(fā)生關(guān)系密切。過氧化物酶體增殖物激活受體-α(peroxisome proliferativeactivated receptor-α,PPAR-α)是脂肪酸氧化過程中的上游轉(zhuǎn)錄因子,CTP-1A是其下游的關(guān)鍵靶基因,CTP-1A的表達(dá)變化受PPAR-α的調(diào)控[3]。PPAR-α/CTP-1A通路是肝臟脂代謝的重要通路。姜黃素是我們從植物姜黃的根莖中提取出的一種天然多酚類物質(zhì),具有降血脂、改善脂代謝、抗氧化、抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤等多種作用。降脂通絡(luò)軟膠囊(神威藥業(yè))是以姜黃素化合物為主要原料制成的軟膠囊,是臨床應(yīng)用的一種降脂中成藥,但其降低血脂的具體機(jī)制是否與肝臟PPAR-α/CTP-1A通路有關(guān),目前尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過蛋黃乳劑法建立大鼠急性高脂血癥模型,觀察急性高脂狀態(tài)下SD大鼠肝臟脂肪沉積情況、脂代謝相關(guān)酶類的變化,明確姜黃素化合物是否可以通過PPAR-α/CPT-1A信號(hào)途徑促進(jìn)脂肪氧化從而改善肝臟脂代謝,探討其降脂機(jī)制和可能的肝臟保護(hù)作用,為臨床提供理論依據(jù)并指導(dǎo)臨床用藥。方法:1實(shí)驗(yàn)對象及分組:健康雄性SD大鼠48只(月齡5-6周,體質(zhì)量180±20g),隨機(jī)分為正常對照組、高脂模型組、姜黃素化合物低劑量組(姜黃素化合物溶液125mg/kg.d)、姜黃素化合物中劑量組(姜黃素化合物溶液250mg/kg.d)、姜黃素化合物高劑量組(姜黃素化合物溶液500mg/kg.d)、非諾貝特組(非諾貝特30mg/kg.d)6組。正常對照組、高脂模型組給予西王玉米油(2.5ml/kg.d)灌胃,實(shí)驗(yàn)組分別給予相應(yīng)上述藥物灌胃,均于每日同一時(shí)間進(jìn)行灌胃1次,共干預(yù)10天。2急性高脂血癥大鼠模型的制備:第10天灌胃1小時(shí)后,分別給予高脂模型組、實(shí)驗(yàn)組大鼠一次性腹腔注射75%新鮮蛋黃乳液25ml/kg制備急性高脂模型;給予正常對照組大鼠生理鹽水25ml/kg腹腔注射。3標(biāo)本制備及檢測指標(biāo):腹腔注射24小時(shí)后斷尾取血(取血前10小時(shí)禁食水),全自動(dòng)化學(xué)分析法測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C),采用試劑盒檢測SD大鼠血清及其肝臟游離脂肪酸(FFA)、肝臟TG的含量。取血后給予4%水合氯醛(10ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠,無菌環(huán)境下開腹取出肝臟,部分肝組織用于冰凍切片,進(jìn)行HE染色及油紅O染色觀察其肝臟結(jié)構(gòu)變化及脂肪變程度;剩余部分肝組織立即液氮速凍,-80℃冰箱保存用于測定PPAR-α、CPT-1A m RNA及蛋白含量。4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料結(jié)果使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x|-±s)來表示,各組間比較采用單因素方差分析。多重比較則應(yīng)用LSD、SNK-q檢驗(yàn)分析。P0.05則認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1證實(shí)急性高脂模型成立:腹腔注射蛋黃乳液6小時(shí)后血TG(9.66±10.98mmol/L),TC(8.72±2.17mmol/L),LDL-C(0.78±0.57mmol/L)水平開始升高。至24小時(shí)TG(20.97±15.85mmol/L),TC(10.34±4.24mmol/L),LDL-C(0.58±0.25mmol/L)達(dá)高峰,HDL-C(2.49±0.88mmol/L)較前降低,與0h時(shí)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),證實(shí)SD大鼠急性高脂血癥模型造模成功;2各組大鼠血脂、血清游離脂肪酸水平比較:急性高脂模型組大鼠血脂及血清FFA的水平均明顯高于正常對照組(P0.01);與急性高脂模型組比較,姜黃素化合物各劑量組及非諾貝特組均可顯著降低大鼠血清TG、TC、LDL-C以及FFA水平(P0.05),且升高血HDL-C水平(P0.05),各組中尤以姜黃素高劑量組作用最為明顯;非諾貝特組及姜黃素中劑量組降低血脂及FFA作用次之,但非諾貝特組和姜黃素中劑量組之間比較差異不明顯(P0.05);3各組大鼠肝臟甘油三酯、游離脂肪酸含量比較:急性高脂模型組大鼠肝臟TG、FFA含量明顯高于正常對照組(P0.01);姜黃素化合物各劑量組能夠明顯降低大鼠肝臟TG、FFA含量(P0.05),且上述作用具有顯著的藥物劑量依賴性;非諾貝特組也可明顯降低大鼠肝臟TG、FFA的含量(P0.05),但與姜黃素中劑量組間比較差異不明顯(P0.05);4各組大鼠肝功水平比較:各組大鼠血ALT、AST水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);5各組大鼠肝臟組織光鏡結(jié)果比較:5.1 HE染色:正常對照組大鼠肝臟細(xì)胞的結(jié)構(gòu)清晰完整,排列整齊一致,胞漿呈均勻紅染;急性高脂模型組肝細(xì)胞腫脹顯著、透明變性,結(jié)構(gòu)紊亂,局部細(xì)胞溶解,其內(nèi)可見大小不等、數(shù)量不一的小空泡;姜黃素化合物低、中、高劑量組隨藥物劑量的增加,肝細(xì)胞腫脹程度較模型組逐漸減輕,細(xì)胞排列較整齊,胞內(nèi)空泡數(shù)量逐漸減少,其中高劑量組改變最為顯著,僅可見肝細(xì)胞輕度水腫,細(xì)胞排列整齊;非諾貝特組肝細(xì)胞輕度水樣變,結(jié)構(gòu)稍紊亂;5.2油紅O染色:正常對照組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,胞漿淡藍(lán)色,未見紅色脂滴;急性高脂模型組肝細(xì)胞內(nèi)可見少量微小的紅色類圓形脂滴,未見明顯的脂質(zhì)聚集、沉積;各藥物干預(yù)組肝細(xì)胞內(nèi)的紅色脂滴均有不同程度地減少,且此作用呈藥物劑量依賴性,其中姜黃素化合物高劑量組改變最顯著,細(xì)胞內(nèi)未見脂滴存在;6姜黃素化合物對脂代謝通路中脂酸β氧化關(guān)鍵酶CPT-1A的影響:6.1各組大鼠肝臟CPT-1A m RNA表達(dá)水平的比較:急性高脂模型組大鼠肝臟中CPT-1A m RNA的表達(dá)水平較正常對照組顯著下降(P0.01);姜黃素化合物低、中、高劑量組CPT-1A m RNA表達(dá)水平較急性高脂模型組均顯著升高(P0.01),且具有劑量依賴性;非諾貝特組CPT-1A m RNA表達(dá)水平較急性高脂模型組亦升高(P0.01),但與姜黃素中劑量組間差異不明顯(P0.05);6.2各組大鼠肝臟CPT-1A的蛋白表達(dá)水平比較:急性高脂模型組大鼠肝臟中CPT-1A蛋白表達(dá)量較正常對照組顯著下降(P0.01);姜黃素化合物低、中、高劑量組CPT-1A蛋白表達(dá)量較急性高脂模型組均顯著升高(P0.01),且具有劑量依賴性;非諾貝特組CPT-1A蛋白表達(dá)量較急性高脂模型組亦升高(P0.01),但與姜黃素中劑量組間差異不明顯(P0.05);7姜黃素化合物對PPAR-α的影響:急性高脂模型組大鼠肝臟中PPAR-αm RNA和蛋白的表達(dá)水平較正常對照組顯著下降(P0.01);姜黃素化合物低、中、高劑量組PPAR-αm RNA和蛋白表達(dá)水平較急性高脂模型組均顯著升高(P0.01),且具有劑量依賴性;非諾貝特組PPAR-αm RNA和蛋白表達(dá)水平較急性高脂模型組亦升高(P0.01),但與姜黃素中劑量組間差異不明顯(P0.05)。結(jié)論:1一次性腹腔注射75%蛋黃乳液成功制備大鼠急性高脂血癥模型,表現(xiàn)為注射24h后血TG、TC、LDL-C水平達(dá)高峰,血FFA升高,并且肝臟結(jié)構(gòu)開始紊亂,可見輕度脂質(zhì)沉積,但轉(zhuǎn)氨酶水平較正常組無明顯差異。2姜黃素化合物低、中、高劑量組和非諾貝特組可不同程度地改善急性高脂大鼠的血脂異常,并且降低血清FFA及肝臟FFA、TG的水平,減輕肝細(xì)胞損傷程度及脂肪沉積,且姜黃素高劑量組作用最為顯著。3急性高脂可抑制大鼠肝臟調(diào)控脂肪酸β氧化途徑PPAR-α/CPT-1A表達(dá);姜黃素化合物低、中、高劑量組和非諾貝特組可不同程度地激活PPAR-α/CPT-1A表達(dá),促進(jìn)脂肪酸β氧化;且姜黃素高劑量組效果最為顯著。
【關(guān)鍵詞】：姜黃素化合物 急性高脂血癥 SD大鼠 CPT-1A PPAR-α FFA、脂肪酸β氧化 非諾貝特 脂質(zhì)沉積
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R589.2
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-28
• 結(jié)果28-31
• 附圖31-39
• 附表39-42
• 討論42-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 綜述 PPAR-α對非酒精性脂肪肝的影響50-58
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 致謝58-59
• 個(gè)人簡歷59

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1081473