本文關(guān)鍵詞：促甲狀腺激素對心肌細胞收縮功能的影響

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【摘要】：目的:探討亞臨床甲狀腺功能減退疾病中,升高的促甲狀腺激素(TSH)對心肌舒縮功能的影響及其作用機制。方法:采用酶分解法及差速貼壁法提取純凈的原代大鼠心肌細胞。免疫熒光和western-blot方法用于TSH受體在原代大鼠心肌細胞表達的檢測,激光共聚焦顯微鏡測定TSH濃度依賴性刺激中,心肌細胞對鈣離子的釋放。通過濃度和時間依賴性分組,采用實時定量PCR,western-blot方法檢測TSH對心肌肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶(serca2a),雷諾丁受體(ryanodine receptors)的表達影響。為明確TSH對serca2a調(diào)控機制,以不同濃度TSH分別作用于心肌細胞48h,western-blot檢測PKA,P-PKA,PLN,P-PLN,serca2a表達;其次分別給予細胞20 umol/L H89,4umol/LTSH 24小時刺激,RT-PCR及western-blot方法測定各組serca2a,P-PLN含量。結(jié)果:1.證明了心肌細胞表面確有TSH受體的表達;2.TSH可抑制心肌細胞中鈣離子的釋放。3.RT-PCR檢測顯示serca2a,雷諾丁受體的表達量在TSH刺激下表現(xiàn)出明顯的時間和濃度依賴性,即隨著時間和濃度的增加,其表達量逐漸下降。4.Western結(jié)果示P-PLN,P-PKA蛋白表達量隨著TSH濃度增加與作用時間增長而下降。5.依據(jù)不同刺激將細胞分組,分別為control組,H89組,TSH組,H89+TSH組,檢測SERCA2a,P-PLN mRNA,蛋白表達量。觀察發(fā)現(xiàn),H89可明顯降低SERCA2a,P-PLN表達量;TSH作用后也可使以上兩種物質(zhì)表達量下降,但趨勢不及H89組。當(dāng)H89與TSH共同作用時,SERCA2a,P-PLN表達量顯著下降,其幅度與H89組基本一致,二者之間無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:依據(jù)該現(xiàn)象可知,當(dāng)出現(xiàn)亞臨床甲狀腺功能減退時,隨著TSH的濃度增高以及病程的延長,可使心肌舒縮功能進行性下降。而且,TSH對serca2a的這種調(diào)控來自于PKA/PLN信號通路。
【關(guān)鍵詞】：促甲狀腺激素 原代大鼠心肌細胞 心肌肌漿網(wǎng)Ca~(2+)-ATP酶 鈣離子 雷諾丁受體
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R581.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 前言12-13
• 材料和方法13-20
• 1.原代大鼠心肌細胞的培養(yǎng)13-14
• 1.1 分離提取13
• 1.2 細胞純化13
• 1.3 細胞計數(shù)13-14
• 2.FRTL-5，H9C2，CHO細胞株的培養(yǎng)及傳代14
• 2.1 細胞培養(yǎng)14
• 2.2 細胞傳代14
• 3.熒光定量PCR14-15
• 4.細胞蛋白提取及western-blot15-18
• 4.1 提取細胞蛋白15
• 4.2 測定蛋白濃度15-16
• 4.3 western-blot16-18
• 5.免疫熒光18
• 6.激光共聚焦檢測心肌細胞內(nèi)鈣動態(tài)18-19
• 7.數(shù)據(jù)分析19-20
• 結(jié)果20-28
• 1.分離后的原代大鼠心肌細胞20
• 2.促甲狀腺激素受體在原代大鼠心肌細胞上的表達20-22
• 3.細胞內(nèi)鈣成像22-23
• 4.TSH作用后Ryr2表達23
• 5.TSH刺激后心肌細胞中serca2a的表達23-25
• 6.TSH對serca2a表達的抑制作用通過PKA/PLN通路實現(xiàn)25-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻31-34
• 文獻綜述34-40
• 文獻綜述參考文獻37-40
• 致謝40-41
• 個人簡歷41

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本文編號：1071227