本文關(guān)鍵詞：促甲狀腺激素對(duì)心肌細(xì)胞收縮功能的影響

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【摘要】：目的:探討亞臨床甲狀腺功能減退疾病中,升高的促甲狀腺激素(TSH)對(duì)心肌舒縮功能的影響及其作用機(jī)制。方法:采用酶分解法及差速貼壁法提取純凈的原代大鼠心肌細(xì)胞。免疫熒光和western-blot方法用于TSH受體在原代大鼠心肌細(xì)胞表達(dá)的檢測(cè),激光共聚焦顯微鏡測(cè)定TSH濃度依賴性刺激中,心肌細(xì)胞對(duì)鈣離子的釋放。通過(guò)濃度和時(shí)間依賴性分組,采用實(shí)時(shí)定量PCR,western-blot方法檢測(cè)TSH對(duì)心肌肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶(serca2a),雷諾丁受體(ryanodine receptors)的表達(dá)影響。為明確TSH對(duì)serca2a調(diào)控機(jī)制,以不同濃度TSH分別作用于心肌細(xì)胞48h,western-blot檢測(cè)PKA,P-PKA,PLN,P-PLN,serca2a表達(dá);其次分別給予細(xì)胞20 umol/L H89,4umol/LTSH 24小時(shí)刺激,RT-PCR及western-blot方法測(cè)定各組serca2a,P-PLN含量。結(jié)果:1.證明了心肌細(xì)胞表面確有TSH受體的表達(dá);2.TSH可抑制心肌細(xì)胞中鈣離子的釋放。3.RT-PCR檢測(cè)顯示serca2a,雷諾丁受體的表達(dá)量在TSH刺激下表現(xiàn)出明顯的時(shí)間和濃度依賴性,即隨著時(shí)間和濃度的增加,其表達(dá)量逐漸下降。4.Western結(jié)果示P-PLN,P-PKA蛋白表達(dá)量隨著TSH濃度增加與作用時(shí)間增長(zhǎng)而下降。5.依據(jù)不同刺激將細(xì)胞分組,分別為control組,H89組,TSH組,H89+TSH組,檢測(cè)SERCA2a,P-PLN mRNA,蛋白表達(dá)量。觀察發(fā)現(xiàn),H89可明顯降低SERCA2a,P-PLN表達(dá)量;TSH作用后也可使以上兩種物質(zhì)表達(dá)量下降,但趨勢(shì)不及H89組。當(dāng)H89與TSH共同作用時(shí),SERCA2a,P-PLN表達(dá)量顯著下降,其幅度與H89組基本一致,二者之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:依據(jù)該現(xiàn)象可知,當(dāng)出現(xiàn)亞臨床甲狀腺功能減退時(shí),隨著TSH的濃度增高以及病程的延長(zhǎng),可使心肌舒縮功能進(jìn)行性下降。而且,TSH對(duì)serca2a的這種調(diào)控來(lái)自于PKA/PLN信號(hào)通路。
【關(guān)鍵詞】：促甲狀腺激素 原代大鼠心肌細(xì)胞 心肌肌漿網(wǎng)Ca~(2+)-ATP酶 鈣離子 雷諾丁受體
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R581.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 前言12-13
• 材料和方法13-20
• 1.原代大鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)13-14
• 1.1 分離提取13
• 1.2 細(xì)胞純化13
• 1.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)13-14
• 2.FRTL-5，H9C2，CHO細(xì)胞株的培養(yǎng)及傳代14
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)14
• 2.2 細(xì)胞傳代14
• 3.熒光定量PCR14-15
• 4.細(xì)胞蛋白提取及western-blot15-18
• 4.1 提取細(xì)胞蛋白15
• 4.2 測(cè)定蛋白濃度15-16
• 4.3 western-blot16-18
• 5.免疫熒光18
• 6.激光共聚焦檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)鈣動(dòng)態(tài)18-19
• 7.數(shù)據(jù)分析19-20
• 結(jié)果20-28
• 1.分離后的原代大鼠心肌細(xì)胞20
• 2.促甲狀腺激素受體在原代大鼠心肌細(xì)胞上的表達(dá)20-22
• 3.細(xì)胞內(nèi)鈣成像22-23
• 4.TSH作用后Ryr2表達(dá)23
• 5.TSH刺激后心肌細(xì)胞中serca2a的表達(dá)23-25
• 6.TSH對(duì)serca2a表達(dá)的抑制作用通過(guò)PKA/PLN通路實(shí)現(xiàn)25-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 文獻(xiàn)綜述34-40
• 文獻(xiàn)綜述參考文獻(xiàn)37-40
• 致謝40-41
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷41

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1 蔡明清;心肌細(xì)胞再生和腔室重塑[J];中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志;2002年01期

2 李娜;;心肌細(xì)胞可以再生[J];科技導(dǎo)報(bào);2009年08期

3 薛惠文;章靜波;;人類心肌細(xì)胞的更新[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2009年07期

4 崔曉兵;;人類成年心肌細(xì)胞可以更新[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2010年06期

5 蘇倩文;;心肌細(xì)胞可以再生[J];心血管病防治知識(shí)(科普版);2013年05期

6 周亮 ,曾曉榮,楊艷,劉智飛,李妙齡,裴杰;豚鼠心肌細(xì)胞急性酶分離方法[J];四川生理科學(xué)雜志;2000年02期

7 萬(wàn)朝敏,俞紅吉,吳泰相,高云欽,周密,鄧建軍,王正榮;免疫損傷對(duì)離體培養(yǎng)心肌細(xì)胞力學(xué)特性的影響[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2000年02期

8 賈士東,修瑞娟;心肌細(xì)胞功能的研究[J];中國(guó)微循環(huán);2000年03期

9 何作云,劉健;心肌細(xì)胞核鈣信號(hào)的研究[J];重慶醫(yī)學(xué);2002年02期

10 張家平;絲裂素活化蛋白激酶與心肌細(xì)胞效應(yīng)[J];重慶醫(yī)學(xué);2002年11期

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1 張保國(guó);趙萍;張文杰;;鉬對(duì)培養(yǎng)心肌細(xì)胞存活的影響[A];中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)首屆微量元素專題討論會(huì)論文摘要匯編[C];1985年

2 房亞東;黃躍生;黨永明;張家平;張東霞;宋華培;張瓊;;上調(diào)微管相關(guān)蛋白4對(duì)缺氧早期心肌細(xì)胞活力影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷外科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

3 唐陶;王世騏;莊茁;;基底應(yīng)變對(duì)心肌細(xì)胞的影響[A];北京力學(xué)會(huì)第14屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

4 何作云;劉健;王培勇;;心肌細(xì)胞核鈣信號(hào)的研究[A];21世紀(jì)醫(yī)學(xué)工程學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2001年

5 何作云;劉健;;心肌細(xì)胞核鈣信號(hào)的研究[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

6 滕苗;黃躍生;黨永明;房亞東;張瓊;;微管干預(yù)劑對(duì)缺氧心肌細(xì)胞糖酵解途徑關(guān)鍵酶的影響[A];第六屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

7 宋新愛;林元喜;樊小力;;心肌細(xì)胞的純化[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)第九屆全國(guó)代表大會(huì)及學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2010年

8 劉興茂;陳昭烈;劉紅;熊福銀;;心肌細(xì)胞體外三維培養(yǎng)的初步研究[A];中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)第三次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

9 熊江輝;李瑩輝;聶捷琳;張曉鈾;丁柏;;槲皮素對(duì)回轉(zhuǎn)條件下心肌細(xì)胞—氧化氮合成的影響[A];中國(guó)宇航學(xué)會(huì)航天醫(yī)學(xué)工程專業(yè)委員會(huì)、中國(guó)空間科學(xué)學(xué)會(huì)空間生命專業(yè)委員會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2001年

10 陽(yáng)冬梅;吳才宏;程和平;;鈣調(diào)蛋白對(duì)心肌細(xì)胞興奮—收縮耦聯(lián)的調(diào)節(jié)作用[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉黎;荷蘭培育心肌細(xì)胞取得進(jìn)展[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2008年

2 編譯 曉魚;人類心肌細(xì)胞可再生[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

3 孫國(guó)根;心肌細(xì)胞的形成和再生有望被誘導(dǎo)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2012年

4 吳偉農(nóng);心肌細(xì)胞能自我修復(fù)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

5 陳丹;移植的人體細(xì)胞可與豚鼠受體心肌同步跳動(dòng)[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

6 記者胡德榮;心肌細(xì)胞能體外培養(yǎng)[N];健康報(bào);2002年

7 楊洋;骨髓細(xì)胞生成心肌細(xì)胞[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2003年

8 吳理茂 李連達(dá);中藥在心肌細(xì)胞移植中的作用[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

9 ;急性心梗治療獲重要突破 心肌細(xì)胞可以再生[N];中國(guó)保險(xiǎn)報(bào);2003年

10 記者 張曄;基因調(diào)控讓壞死的心肌細(xì)胞“復(fù)活”[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

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1 吳東棟;硫化氫提高Cu/Zn-SOD和Mn-SOD活性的作用及其機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

2 徐磊;MMI-0100通過(guò)對(duì)心肌細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中MK2的抑制作用降低心肌纖維化程度的研究[D];山東大學(xué);2015年

3 牟永潮;基于納米材料再造心肌組織生物學(xué)評(píng)價(jià)與心梗治療研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

4 李娜;PDE5抑制劑Sildenafi1對(duì)心梗后心衰線粒體能量代謝保護(hù)及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 陳亮;miR-199a對(duì)大鼠心肌細(xì)胞自噬的調(diào)控研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 王曉麗;附子人參配伍對(duì)大鼠心肌細(xì)胞保護(hù)作用的研究[D];長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 肖劍鋒;碘化-N-正丁基氟哌啶醇對(duì)缺氧心肌細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)的保護(hù)作用[D];汕頭大學(xué);2011年

8 張翠翠;MG53調(diào)節(jié)心臟輔助亞基KChIP2表達(dá)的分子機(jī)制及在心電穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

9 張海彬;miR-711在心肌缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制[D];吉林大學(xué);2016年

10 位庚;心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷對(duì)心肌細(xì)胞的影響及通絡(luò)干預(yù)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 付麗;硫化氫后處理對(duì)大鼠缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

2 黃玉潔;miR-218調(diào)控小鼠胚胎干細(xì)胞體外定向分化心肌細(xì)胞研究[D];浙江大學(xué);2015年

3 李品雅;華蟾毒精對(duì)心肌細(xì)胞L型鈣電流，，鈣瞬變和收縮力的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 劉洋;野薔薇苷對(duì)H_2O_2誘導(dǎo)心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 朱燕梅;銀杏葉提取物保護(hù)心肌細(xì)胞抗氧化損傷及其基于Keap1/Nrf2/ARE通路的作用機(jī)制[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

6 劉莉;心肌細(xì)胞TLR4促進(jìn)心梗后心臟炎癥反應(yīng)的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

7 盧杏;體外轉(zhuǎn)染CyclinA2基因?qū)υ笫笮募〖?xì)胞增殖的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

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9 蘭曉東;微管解聚對(duì)心肌細(xì)胞電生理特性的影響及微管定量分析方法研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 李熠;TGR5在高糖誘導(dǎo)小鼠心肌細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

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