本文關(guān)鍵詞：Grb10在糖尿病腎病小鼠中作用機(jī)制研究

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【摘要】：背景:糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(Diabetic mellitus,DM)微血管并發(fā)癥之一,近年來(lái)發(fā)病率逐年升高,超過(guò)25%的糖尿病患者遭受了DN的困擾。DN已成為終末期腎病(End stage renal disease,ESRD)的首位病因,同時(shí)也是DM的嚴(yán)重并發(fā)癥和主要死亡原因之一。糖尿病腎病不僅嚴(yán)重影響了患者的健康和生活質(zhì)量,而且給醫(yī)療資源帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。近年來(lái)研究表明,生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白10(Growth factor receptor-bound protein 10,Grb10)作為胰島素和胰島素樣生長(zhǎng)因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)信號(hào)傳導(dǎo)通路上游的第一個(gè)關(guān)鍵分子,被證實(shí)對(duì)胰島素、IGF-1及其受體所介導(dǎo)的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)起著重要的負(fù)性調(diào)節(jié)作用,在該信號(hào)傳導(dǎo)通路障礙所致生長(zhǎng)發(fā)育功能受損中起著關(guān)鍵作用。然而,Grb10在腎臟作為胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)信號(hào)通路上的調(diào)節(jié)因子,其在體內(nèi)的作用機(jī)制以及作用方式目前鮮見(jiàn)報(bào)道。目的:從病理、基因和蛋白水平,觀察糖尿病小鼠腎臟Grb10、IGF-1和IGF-1R的表達(dá)及其腎功能的變化;然后予以梓醇治療糖尿病小鼠,再觀察其上述的改變,從而探討grb10在糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制中的潛在作用及梓醇對(duì)糖尿病腎病的保護(hù)作用。方法:單次腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,stz)(0.1m,ph4.5,180mg/kg)誘導(dǎo)建立糖尿病模型。三天后,用鼠尾靜脈血測(cè)血糖,血糖值高于16.7mmol/l的小鼠視為糖尿病模型初步建立成功,未達(dá)標(biāo)者直接從實(shí)驗(yàn)中排除。后期定期檢測(cè)糖尿病小鼠的血糖,以保證其保持長(zhǎng)期高血糖狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組如下:正常對(duì)照組(con)、糖尿病組(dm)和梓醇干預(yù)組(dm+cat),每組10只。糖尿病模型成功構(gòu)建8周后,給予梓醇(catalpol,10mg/kg/d)連續(xù)腹腔注射治療2周。10周后進(jìn)行動(dòng)物腎功能生化指標(biāo)檢測(cè),腎臟病理改變觀察,grb10和igf-1、igf-1r表達(dá)的檢測(cè)。結(jié)果:1.各組動(dòng)物血糖值結(jié)果是,dm組小鼠的血糖值明顯高于con組小鼠的血糖(p0.01),dm+cat組與dm組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。2.內(nèi)源性grb10在腎臟中表達(dá)的改變運(yùn)用westernblot和熒光定量pcr的方法檢測(cè)grb10在腎臟的表達(dá)情況。結(jié)果如下:在dm組中,grb10的蛋白和mrna表達(dá)與con組相比明顯升高(p0.01);而在dm+cat組中,grb10的蛋白和mrna表達(dá)與dm組相比則是具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的下降(p0.05)。3.腎功能指標(biāo)檢查結(jié)果通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物24h尿蛋白定量檢測(cè)、血尿素氮和肌酐的檢測(cè),結(jié)果顯示:dm組的24h尿蛋白定量、血尿素氮和血肌酐水平與con組相比明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。dm+cat組與dm組相比這三項(xiàng)指標(biāo)均降低,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.dm組中igf-1mrna表達(dá)和igf-1r磷酸化水平與con組相比均有明顯的降低(p0.01);而dm+cat組與dm組相比,這兩者的表達(dá)均升高(p0.05)。5.腎臟病理改變和免疫組織化學(xué)結(jié)果病理pas和masson結(jié)果顯示,在dm組中,腎臟組織出現(xiàn)了一定程度的腎小球肥大和其基底膜增厚,腎間質(zhì)出現(xiàn)了少許纖維化;dm+cat組中腎小球肥大程度沒(méi)有dm組中明顯,腎小球基底膜增厚和腎間質(zhì)纖維化均得到了一定的改善。免疫組化結(jié)果顯示grb10在腎臟的表達(dá)主要位于腎小球和腎小管。半定量分析結(jié)果顯示,dm組的grb10蛋白表達(dá)水平明顯高于con組(p0.01),而dm+cat組grb10的表達(dá)較dm組有所下降(p0.05)。在顯微鏡下可見(jiàn),腎臟caspase-3的表達(dá)在dm組中增加,但在dm+cat組中明顯降低(p0.05)。結(jié)論:1.stz腹腔注射成功的建立了糖尿病小鼠模型。慢性高血糖引起了糖尿病小鼠腎臟一系列的病理生理改變,從而出現(xiàn)腎功能的受損和腎臟的病理改變,導(dǎo)致糖尿病腎病。2.梓醇治療能夠通過(guò)改善糖尿病腎病小鼠的腎功能受損和病理改變,一定程度上保護(hù)糖尿病腎病。同時(shí),梓醇治療后下調(diào)了腎臟組織Grb10的表達(dá)水平,說(shuō)明通過(guò)梓醇直接或間接地下調(diào)Grb10的表達(dá)可能是改善糖尿病腎病的潛在機(jī)制。3.隨著糖尿病腎病病程的進(jìn)展,可使糖尿病小鼠腎臟Grb10的表達(dá)升高、IGF-1mRNA和IGF-1R磷酸化表達(dá)水平降低,表明在糖尿病腎病中Grb10可能是IGF-1/IGF-1R介導(dǎo)的信號(hào)通路的負(fù)性調(diào)節(jié)因子。綜上所訴,慢性高血糖可導(dǎo)致糖尿病小鼠腎臟出現(xiàn)一系列的病理生理改變,引起了Grb10表達(dá)的增加、IGF-1和IGF-1R磷酸化表達(dá)水平的降低,從而表明在糖尿病腎病中,Grb10對(duì)IGF1/IGF-1R介導(dǎo)的信號(hào)通路可能具有負(fù)性調(diào)節(jié)作用。梓醇能夠下調(diào)糖尿病小鼠腎臟Grb10的過(guò)表達(dá),上調(diào)IGF-1/IGF-1R的低表達(dá),可在一定程度上改善糖尿病腎病小鼠病理變化和腎功能損害,對(duì)糖尿病腎病具有保護(hù)作用。以上研究提示,Grb10在糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,從而為糖尿病腎病的防治提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 Grb10 梓醇 IGF-1/IGF-1R
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照4-5
• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-15
• 前言15-17
• 第一部分 Grb10過(guò)表達(dá)對(duì)糖尿病小鼠腎臟病理變化、腎功能和IGF-1/IGF-1R信號(hào)通路的影響17-26
• 1 材料和方法17-23
• 2 結(jié)果23-24
• 3 討論24-26
• 第二部分 梓醇對(duì)糖尿病小鼠腎臟Grb10,IGF-1/IGF-1R表達(dá)的影響及其腎臟保護(hù)作用的機(jī)制26-32
• 1 材料和方法26-29
• 2 結(jié)果29-30
• 3 討論30-32
• 全文總結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 附表37-38
• 附圖38-41
• 文獻(xiàn)綜述：Grb10在糖尿病及其相關(guān)并發(fā)癥中研究進(jìn)展41-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 致謝47-48
• 碩士期間發(fā)表的論文48

【相似文獻(xiàn)】

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7 姜e，

本文編號(hào)：1043417