本文關(guān)鍵詞：柚皮苷對(duì)廢用性骨質(zhì)疏松的預(yù)防作用及其機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 廢用性骨質(zhì)疏松 柚皮苷 Semaphorin3A 骨膜素 β-catenin

【摘要】：目的:1.探究柚皮苷對(duì)大鼠廢用性骨質(zhì)疏松的預(yù)防作用。2.探究柚皮苷是否通過(guò)促進(jìn)骨膜素(Periostin)和Semphorin3A(Sema3A)表達(dá),進(jìn)而激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路,從而預(yù)防廢用性骨質(zhì)疏松的發(fā)生。3.體外實(shí)驗(yàn)條件下,探究柚皮苷是否通過(guò)促進(jìn)骨膜素表達(dá),進(jìn)而激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路,從而促進(jìn)成骨細(xì)胞分化。方法:1.選取6個(gè)月齡雄性SD大鼠90只,隨機(jī)分為5組,每組18只:正常對(duì)照組(Control),單純骨質(zhì)疏松造模組和低、中、高劑量柚皮苷預(yù)防組,后4組通過(guò)鼠尾懸吊4周建立廢用性骨質(zhì)疏松模型,后3組分別于造模前4周和造模后4周灌服30mg·kg-1·d-1,100mg·kg-1·d-1和300mg·kg-1·d-1柚皮苷,前2組灌服等量生理鹽水。造模4周后處死取材,取各組大鼠血清進(jìn)行骨代謝指標(biāo)I型膠原C端肽(CTX-1)和I型前膠原氨基端肽(P1NP)檢測(cè),取各組大鼠股骨,檢測(cè)股骨干和股骨頸生物力學(xué)性能,測(cè)量股骨遠(yuǎn)端骨密度(BMD),對(duì)各組大鼠股骨遠(yuǎn)端進(jìn)行Micro-CT掃描、蘇木素-伊紅染色液(HE)染色、骨鈣素(osteocalcin,OCN)免疫組化染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色。2.取各組脛骨,通過(guò)RT-PCR和q RT-PCR檢測(cè)脛骨中Sema3A、Neuropilin-1(NRP1)、骨膜素、骨硬化蛋白(Sclerostin)和β-catenin的m RNA水平,通過(guò)Western-blot檢測(cè)Sema3A、骨膜素、骨硬化蛋白和細(xì)胞核β-catenin蛋白的表達(dá)情況,并對(duì)各組股骨行Sema3A、骨膜素和骨硬化蛋白免疫組化染色。3.體外培養(yǎng)小鼠成骨前體樣細(xì)胞MC3T3-E1,分為空白對(duì)照組,以及0.2ng/ml、2ng/ml、20ng/ml、100ng/ml柚皮苷處理組,檢測(cè)各組堿性磷酸酶(ALP)的活性以篩選出促進(jìn)成骨細(xì)胞分化的最佳柚皮苷濃度。相對(duì)于空白對(duì)照組,在最佳濃度柚皮苷刺激下,通過(guò)PCR檢測(cè)成骨細(xì)胞分化特異性基因BMP-2、OCN和Runx2的表達(dá)情況,通過(guò)PCR和Western-blot檢測(cè)Sema3A、骨膜素以及β-catenin的m RNA及蛋白的表達(dá)情況。觀察骨膜素特異性抗體能否抑制柚皮苷促進(jìn)成骨細(xì)胞ALP活性的上調(diào)。結(jié)果:1.造模4周后,相對(duì)于正常對(duì)照組,單純?cè)炷＝M股骨力學(xué)性能和股骨遠(yuǎn)端BMD顯著下降,股骨遠(yuǎn)端骨小梁微結(jié)構(gòu)遭到顯著破壞,單純?cè)炷＝M血清P1NP顯著下降,CTX-1顯著上升,股骨遠(yuǎn)端成骨細(xì)胞OCN免疫組化強(qiáng)度顯著下降,股骨遠(yuǎn)端TRAP染色顯示破骨細(xì)胞數(shù)量顯著增加。100mg·kg-1·d-1和300mg·kg-1·d-1柚皮苷能夠顯著預(yù)防懸吊引起的股骨力學(xué)性能下降和骨密度降低,并改善懸吊破壞的骨小梁微結(jié)構(gòu),中、高劑量柚皮苷能夠顯著上調(diào)血清P1NP水平,下調(diào)CTX-1,并顯著增強(qiáng)股骨遠(yuǎn)端OCN的免疫組化強(qiáng)度,減少小梁周?chē)乒羌?xì)胞數(shù)量。2.造模4周后,相對(duì)于正常對(duì)照組,脛骨Sema3A、骨膜素和核β-catenin的表達(dá)水平顯著下降,骨硬化蛋白表達(dá)顯著增加,股骨免疫組化染色顯示骨外膜成骨細(xì)胞分泌的骨膜素顯著減少,股骨遠(yuǎn)端成骨細(xì)胞分泌的Sema3A顯著下調(diào),股骨干骨細(xì)胞骨硬化蛋白免疫染色陽(yáng)性強(qiáng)度顯著上升。相對(duì)于單純?cè)炷＝M,中、高劑量柚皮苷顯著增加脛骨Sema3A、骨膜素與核β-catenin的表達(dá)水平,減少骨硬化蛋白表達(dá),股骨免疫組化染色顯示骨外膜成骨細(xì)胞分泌的骨膜素顯著增加,股骨遠(yuǎn)端成骨細(xì)胞分泌的Sema3A顯著上調(diào),股骨干骨硬化蛋白免疫染色陽(yáng)性強(qiáng)度顯著下降。3.相對(duì)于空白對(duì)照組,20ng/ml柚皮苷促進(jìn)成骨細(xì)胞分化的能力最強(qiáng),20ng/ml柚皮苷顯著促進(jìn)BMP-2、OCN、Runx2、Sema3A、骨膜素、Nrp1和β-catenin的m RNA的表達(dá),Western-blot結(jié)果顯示20ng/ml柚皮苷顯著增加Sema3A、骨膜素和核β-catenin蛋白的表達(dá)。骨膜素特異性抗體能夠抑制20ng/ml柚皮苷對(duì)成骨細(xì)胞分化的促進(jìn)作用。結(jié)論:1.柚皮苷具有促進(jìn)骨形成并抑制骨重吸收的雙重作用,能夠預(yù)防大鼠廢用性骨質(zhì)疏松的發(fā)生。2.柚皮苷可能是通過(guò)上調(diào)骨膜素,進(jìn)而下調(diào)骨硬化蛋白,從而激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路,以及上調(diào)Semaphorin3A進(jìn)而激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路這兩條信號(hào)路徑促進(jìn)骨質(zhì)合成。3.柚皮苷可能通過(guò)上調(diào)成骨前體樣細(xì)胞中骨膜素的表達(dá),以自分泌或旁分泌的方式激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路從而促進(jìn)成骨細(xì)胞分化。
【關(guān)鍵詞】：廢用性骨質(zhì)疏松 柚皮苷 Semaphorin3A 骨膜素 β-catenin
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R580
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-14
• 前言14-17
• 研究現(xiàn)狀、成果14-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、柚皮苷對(duì)廢用性骨質(zhì)疏松的預(yù)防作用17-36
• 1.1 對(duì)象和方法17-25
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組17-18
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑18
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器18
• 1.1.4 常用溶液配制18-19
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)方法19-25
• 1.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25
• 1.2 結(jié)果25-30
• 1.2.1 柚皮苷對(duì)失力學(xué)載荷下股骨遠(yuǎn)端骨密度的影響25
• 1.2.2 柚皮苷對(duì)失力學(xué)載荷下股骨生物力學(xué)性能的影響25-26
• 1.2.3 柚皮苷對(duì)失力學(xué)載荷下股骨遠(yuǎn)端干骺端骨小梁微結(jié)構(gòu)的影響26-28
• 1.2.4 各組股骨遠(yuǎn)端HE染色結(jié)果28
• 1.2.5 柚皮苷對(duì)各組血清中骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)的影響28-29
• 1.2.6 柚皮苷對(duì)骨小梁局部成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化的影響29-30
• 1.3 討論30-35
• 1.3.1 廢用性骨質(zhì)疏松的治療現(xiàn)狀30-32
• 1.3.2 柚皮苷對(duì)廢用性骨質(zhì)疏松的預(yù)防效果32-35
• 1.4 小結(jié)35-36
• 二、柚皮苷預(yù)防廢用性骨質(zhì)疏松發(fā)生的分子機(jī)制36-57
• 2.1 對(duì)象和方法36-45
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組36
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料及試劑36-37
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器37-38
• 2.1.4 常用溶液配制38
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)方法38-45
• 2.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45
• 2.2 結(jié)果45-51
• 2.2.1 柚皮苷對(duì)各組脛骨Wnt/β-catenin信號(hào)通路活性的影響45-46
• 2.2.2 柚皮苷對(duì)Postn，，Sost的mRNA表達(dá)的影響46-47
• 2.2.3 各組骨膜素和骨硬化蛋白在蛋白水平的表達(dá)情況47-49
• 2.2.4 柚皮苷對(duì)Sema3a，Nrp1的mRNA表達(dá)的影響49-50
• 2.2.5 各組Sema3A在蛋白水平的表達(dá)情況50-51
• 2.3 討論51-56
• 2.3.1 Wnt/β-catenin信號(hào)通路失活導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的發(fā)生51-53
• 2.3.2 骨膜素通介導(dǎo)柚皮苷對(duì)Wnt信號(hào)通路的激活53-54
• 2.3.3 Sema3A介導(dǎo)柚皮苷對(duì)Wnt信號(hào)通路的激活54-56
• 2.4 小結(jié)56-57
• 三、柚皮苷通過(guò)激活Wnt信號(hào)通路促進(jìn)成骨細(xì)胞分化57-70
• 3.1 對(duì)象和方法57-63
• 3.1.1 細(xì)胞來(lái)源57
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料及試劑57-58
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器58
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑和常用溶液配制58-60
• 3.1.5 實(shí)驗(yàn)方法60-63
• 3.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析63
• 3.2 結(jié)果63-67
• 3.2.1 MC3T3-E1細(xì)胞形態(tài)63
• 3.2.2 柚皮苷對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞ALP活性的影響63-64
• 3.2.3 柚皮苷對(duì)成骨細(xì)胞分化特異性基因表達(dá)的影響64-65
• 3.2.4 柚皮苷對(duì)Postn，β-catenin和Sema3a的mRNA的表達(dá)影響65
• 3.2.5 柚皮苷對(duì)骨膜素、Sema3A及核 β-catenin蛋白的表達(dá)影響65-66
• 3.2.6 骨膜素抗體對(duì)各組細(xì)胞ALP活性的影響66-67
• 3.3 討論67-69
• 3.3.1 柚皮苷對(duì)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化的影響及其機(jī)制67-68
• 3.3.2 柚皮苷通過(guò)促進(jìn)骨膜素表達(dá)促進(jìn)成骨細(xì)胞分化68-69
• 3.4 小結(jié)69-70
• 結(jié)論70-71
• 參考文獻(xiàn)71-77
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明77-78
• 綜述 柚皮苷防治骨質(zhì)疏松的研究現(xiàn)狀78-89
• 綜述參考文獻(xiàn)84-89
• 致謝89-90
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷90

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1011025