本文關(guān)鍵詞：IgA腎病患者外周B淋巴細(xì)胞miR-374b致病機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： MiR-374b B淋巴細(xì)胞 IgA1 O-糖基化 IgA腎病

【摘要】：目的：IgA腎病(IgAN)是世界最常見的原發(fā)性腎小球疾病,也是導(dǎo)致終末期腎衰的重要原因。在中國(guó)約45%的原發(fā)性腎小球腎炎患者表現(xiàn)為IgAN。IgAN患者IgA1分子鉸鏈區(qū)O-糖鏈半乳糖基減少,異常糖基化的IgA1在系膜區(qū)沉積,導(dǎo)致系膜活化和腎臟損傷。但目前為止IgAN患者低糖基化IgA1的發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明。多種證據(jù)表明miRNAs可參與基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,并且在包括腎臟疾病在內(nèi)的多種疾病的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。我們?cè)谇捌谛酒治鲋邪l(fā)現(xiàn)IgAN患者外周B淋巴細(xì)胞中miR-374b顯著上調(diào)。本研究驗(yàn)證了miR-374b表達(dá)水平變化及其臨床意義,并深入研究了miR-374b的致病機(jī)制。方法：入組30例在南京軍區(qū)南京總醫(yī)院國(guó)家腎臟疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心行腎穿刺明確診斷為原發(fā)性IgAN患者,腎活檢病理檢查包括光鏡和免疫病理,部分病例行電鏡檢查以排除薄基底膜腎病。臨床上已排除諸如過敏性紫癜、肝硬化等繼發(fā)性IgAN。正常對(duì)照組由15名健康志愿者組成,收集血液標(biāo)本。經(jīng)抗-CD19磁珠分離外周血B淋巴細(xì)胞,利用RT-PCR, western blot(WB)及原位雜交(ISH)或原代培養(yǎng)等技術(shù)進(jìn)行相關(guān)分析。利用HAA凝集素結(jié)合實(shí)驗(yàn)分析患者血清及細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中IgA1異常糖基化水平。通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)miRNA結(jié)合靶點(diǎn)。MiR-374b轉(zhuǎn)染B淋巴細(xì)胞,觀察靶基因Cosmc和PTEN表達(dá)水平,并檢測(cè)B淋巴細(xì)胞增殖速度。本研究符合赫爾辛基宣言原則并經(jīng)南京軍區(qū)南京總醫(yī)院倫理委員會(huì)審查通過。結(jié)果：IgAN患者平均年齡34.8±12.1歲,男/女性別比16/14,24h尿蛋白、尿沉渣紅細(xì)胞、血清肌酐分別為1.53±1.19g/d、157.0(63.0～290.0)×104/ml、1.09±0.49mg/d1。在IgAN患者B淋巴細(xì)胞中Cosmc和PTEN的mRNA和蛋白水平明顯下降,并分別與IgA1異常糖基化水平及B淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)正相關(guān)。最近有研究報(bào)道,在IgAN患者外周血單核細(xì)胞(PBMCs)中有37個(gè)差異表達(dá)的miRNAs,在這些差異表達(dá)的miRNAs中,miR-374b表達(dá)增加。我們利用抗CD19磁珠分離IgAN患者外周血B淋巴細(xì)胞,并分析miRNAs表達(dá)譜發(fā)現(xiàn)miR-374b在IgAN患者B淋巴細(xì)胞中表達(dá)水平顯著升高。經(jīng)相關(guān)分析,我們發(fā)現(xiàn)miR-374b可能靶向PTEN和Cosmc。而且,IgAN患者miR-374b水平與MEST評(píng)分和蛋白尿水平正相關(guān)。通過熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)和WB證實(shí)miR-374b可靶向PTEN和Cosmc。對(duì)來自正常對(duì)照B淋巴細(xì)胞原代培養(yǎng)后轉(zhuǎn)染miR-374b mimics,可降低內(nèi)源性PTEN和Cosmc水平,并且導(dǎo)致B淋巴細(xì)胞增殖和異常糖基化IgA1的產(chǎn)生。相反,抑制原代培養(yǎng)的B淋巴細(xì)胞中miR-374b表達(dá),可增加PTEN和Cosmc水平,并可抑制B淋巴細(xì)胞增殖和異常糖基化IgA1的產(chǎn)生。結(jié)論：IgAN患者miR-374b表達(dá)上調(diào)通過靶向PTEN和Cosmc促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖和IgA1異常糖基化。抑制miR-374b可阻止B淋巴細(xì)胞增殖和IgA1異常糖基化,可能成為治療IgAN的新方法。
【關(guān)鍵詞】：MiR-374b B淋巴細(xì)胞 IgA1 O-糖基化 IgA腎病
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692.31
【目錄】：

• 高頻英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-24
• 1. 材料14-16
• 2. 方法16-23
• 統(tǒng)汁學(xué)分析23-24
• 結(jié)果24-31
• 討論31-34
• 全文總結(jié)34
• 創(chuàng)新性34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 綜述：IGA腎病發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展39-57
• 引言39
• IGAN中的GD-IGA1及抗GD-IGA1抗體39-42
• 基于基因組研究的其它發(fā)現(xiàn)42-44
• IGAN IGA1分泌細(xì)胞中的信號(hào)通路44-46
• MICRORNA在IGAN中的作用46-49
• 小結(jié)49-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 附錄57-59
• 碩士期間工作58-59
• 致謝59-60

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