本文關鍵詞：Sunitinib經(jīng)STAT3通路抑制LPS誘導樹突狀細胞表達PD-L1的實驗研究

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【摘要】：目的研究分子靶向藥物舒尼替尼(sunitinib)對腎癌患者外周血單核細胞來源的樹突狀細胞(DC)表面表達的共抑制分子程序性死亡蛋白配體1(PD-L1)、PD-L2、CD80、CD86、B7-H4及皰疹病毒侵入介體(HVEM)表達的影響以及探討sunitinib是否經(jīng)過STAT3信號通路調控DC表面共抑制分子的表達變化,為sunitinib聯(lián)合DC免疫治療提供一定的理論依據(jù)。方法體外誘導培養(yǎng)腎癌患者外周血單核細胞來源的DC,隨機分為sunitinib聯(lián)合LPS組、LPS組、STAT3通路特異性阻斷劑JSI-124聯(lián)合LPS組及DMSO組。Sunitinib聯(lián)合LPS組用200 ng/m L sunitinib預處理DC12 h,再用1μg/m L脂多糖(LPS)刺激24h;LPS組用1μL/m L DMSO預處理12h,再用1μg/m L LPS刺激24h;JSI-124聯(lián)合LPS組用500 nmol/m L JSI-124預處理12h,再用1μg/m L脂多糖(LPS)刺激24h;DMSO組用1μL/m L DMSO作用36h。倒置顯微鏡觀察各組形態(tài)變化;臺酚藍染色法檢測各組DC活性;流式細胞儀檢測各組DC表型HLA-DR、CD83及CCR7表達變化和DC表面共抑制分子PD-L1、PD-L2、CD80、CD86、B7-H4及HVEM表達水平;蛋白印跡實驗(Westren blot)檢測各組STAT3蛋白及磷酸化-STAT3蛋白(p-STAT3)的變化。應用SPSS19.0軟件分析,所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x_+s)表示,方差齊性檢驗(Levene檢驗)后,進行兩樣本t檢驗,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果1.倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),隨著培養(yǎng)時間的增長,可見各組貼壁細胞呈集落生長,逐漸增大,細胞逐漸呈半懸浮狀態(tài),細胞體積變大,形狀不規(guī)則,表面突起明顯。經(jīng)LPS誘導24h后,sunitinib聯(lián)合LPS組和LPS組的細胞顯著增大,毛刺狀更明顯,表現(xiàn)為典型的“樹枝狀”形態(tài),而JSI-124組聯(lián)合LPS組的細胞顯著變大變圓,毛刺狀不明顯,且細胞均呈懸浮狀態(tài)。另外,DMSO組的DC形態(tài)變化不明顯。2.通過臺盼藍染色法檢測各組DC活性,根據(jù)公式:活細胞率(%)=活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))×100%,計算得出,與LPS組相比,各組活細胞率均無明顯差異。3.流式細胞術檢測結果顯示,本研究DC的百分比為79.92%,獲得了較高純度的DC;各組DC表型CCR7、CD83、HLA-DR分析:與LPS組相比,sunitinib聯(lián)合LPS組和DMSO組的CCR7百分比顯著減低(P0.01);sunitinib聯(lián)合LPS組的CD83百分比高于LPS組,而LPS組明顯高于DMSO組(P0.01);另外,在各組表達HLA-DR的平均熒光強度中,sunitinib聯(lián)合LPS組和JSI-124聯(lián)合LPS組均無顯著差異,而DMSO組明顯低表達(P0.01)。各組DC共抑制分子分析:相比較LPS組,sunitinib聯(lián)合LPS組表達的B7-H4百分比和PD-L1、CD80平均熒光強度均顯著減低(P0.01,P0.05,P0.01),而PD-L2、CD86及HVEM平均熒光強度卻無明顯差別;JSI-124聯(lián)合LPS組表達PD-L1的平均熒光強度降低(P0.05),CD80、CD86、PD-L2、B7-H4及HVEM無顯著差異;DMSO組的各共抑制分子PD-L1、PD-L2、CD80、CD86、B7-H4及HVEM均呈低水平表達(P0.01)。4.sunitinib聯(lián)合LPS組、JSI-124聯(lián)合LPS組及DMSO組的p-STAT3蛋白灰度比分別為1.24±0.11、0.51±0.1、0.02±0.004均低于LPS組2.1±0.3,而STAT3蛋白灰度比無明顯變化。結論1.LPS誘導腎癌患者外周血單核細胞來源的DC快速成熟,sunitinib不影響DC的形態(tài)變化。2.LPS促進DC表達抑制性信號,而sunitinib降低LPS誘導DC的共抑制分子PD-L1、CD80及B7-H4的表達,抑制表達部分抑制性信號。3.Sunitinib抑制LPS誘導DC的STAT3信號通路活化。4.STAT3通路調控LPS誘導DC表達PD-L1。5.Sunitinib可能經(jīng)STAT3通路抑制LPS誘導DC表達共抑制分子PD-L1。結論
【關鍵詞】：舒尼替尼 樹突狀細胞 共抑制分子
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-25
• 結果25-32
• 討論32-36
• 結論36-37
• 參考文獻37-43
• 附錄43-44
• 致謝44-45
• 綜述45-56
• 參考文獻51-56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙飛龍;麥海星;董金凱;李學超;湯永永;陳立軍;張斌;;舒尼替尼抑制小鼠骨髓來源樹突狀細胞表面PD-L1和PD-L2的表達[J];細胞與分子免疫學雜志;2015年01期

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本文編號：888840