本文關(guān)鍵詞：胞漿轉(zhuǎn)導肽介導抑癌基因NPRL2對腎癌細胞凋亡及Bax-Caspase3凋亡通路的影響

  更多相關(guān)文章： CTP-NPRL融合蛋白 腎細胞癌 Bax-Caspase凋亡通路

【摘要】：目的:證實胞漿轉(zhuǎn)導肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)介導抑癌基因NPRL2以CTP-NPRL2融合蛋白形式對人腎癌細胞株786-O的作用,檢測其誘導的腎癌細胞凋亡及其對Bax-Caspase3凋亡通路的影響。方法:構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET28aCTP-NPRL2和p ET28a-NPRL2并轉(zhuǎn)染大腸桿菌DH5α,從而得到原核表達體系用于CTP-NPRL2融合蛋白及NPRL2蛋白的表達和提取;Western blot驗證CTP-NPRL2蛋白和NPRL2蛋白的表達;將腎癌786-O細胞分為2組,分別與等量的NPRL2蛋白和CTP-NPRL2蛋白共培養(yǎng),采用免疫熒光染色和激光共聚焦顯微鏡檢測2種蛋白在腎癌細胞786-O的亞細胞定位情況;將在96孔板培養(yǎng)的786-O細胞分為5組,其中4組分別用1.0μmol/L CTP-NPRL2蛋白、2.0μmol/L CTP-NPRL2蛋白、4.0μmol/L CTP-NPRL2蛋白、4.0μmol/L NRPL2蛋白處理,剩余1組為對照組;MTT法檢測各組786-O細胞增殖的情況;流式細胞儀分析各組細胞周期和細胞凋亡情況;real-time PCR、Western blot檢測各組786-O細胞中Bax和Caspase-3在m RNA及蛋白水平的表達情況。結(jié)果:質(zhì)粒測序結(jié)果顯示成功構(gòu)建所需的原核表達載體;Western blot結(jié)果顯示CTP-NPRL2融合蛋白在原核表達載體中有表達。激光共聚焦顯微鏡結(jié)果提示CTP-NPRL2蛋白導入786-O細胞后定位于胞漿;MTT發(fā)現(xiàn)CTP-NPRL2組細胞增殖較NPRL2組及空白對照組受到明顯的抑制(P0.05);流式細胞分析顯示,相對于空白對照組和NPRL2組,CTP-NPRL2組的凋亡率顯著增高且處于G0/G1期細胞明顯增多(P0.05)。real-time PCR和Western blot結(jié)果提示,與空白對照組和NPRL2組比較,CTP-NPRL2組Bax和Caspase-3在m RNA和蛋白質(zhì)水平的表達均明顯上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:CTP介導抑癌基因NRPL2以CTP-NPRL2融合蛋白形式導入腎癌786-O細胞中并對其有明顯的抑制作用,可能通過影響B(tài)ax-Caspase3凋亡通路的活性,抑制786-O細胞的增殖,并誘導其凋亡將細胞周期阻滯于G0/G1期,從而發(fā)揮抑癌作用。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院泌尿外科;
【關(guān)鍵詞】： CTP-NPRL融合蛋白 腎細胞癌 Bax-Caspase凋亡通路
【基金】：重慶市渝中區(qū)科技計劃資助項目(編號:20130130)
【分類號】：R737.11
【正文快照】： 腎癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,在所有泌尿系腫瘤中,腎癌的死亡率最高,其對人類健康有極大的危害。腎癌的治療以手術(shù)治療為主,術(shù)后放療以及化療均不敏感,患者復發(fā)率和死亡率較高。因此,尋找1種安全有效的治療方法勢在必行。目前,隨著生物大分子藥物的出現(xiàn),分子治療肽的研發(fā)已

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 Antonella Virtuoso;Tania Policastro;Michela Izzo;Piera Federico;Carlo Buonerba;Pasquale Rescigno;Giuseppe Di Lorenzo;;Long lasting response to second-line everolimus in kidney cancer[J];World Journal of Clinical Cases;2013年05期

2 胡在敏;王川;季文;劉波;蔡璨;姜政;;重組質(zhì)粒pEGFP-N1-NPRL2對人胃癌細胞生物學特性的影響[J];細胞與分子免疫學雜志;2012年10期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 國宏莉;李江華;李斌;徐臣利;田林;;兩種藤梨根制劑促凋亡作用的實驗研究[J];貴州醫(yī)藥;2013年08期

2 李敏;林俊;;細胞凋亡途徑及其機制[J];國際婦產(chǎn)科學雜志;2014年02期

3 許正新;王tgtg;王然;謝林俊;薛京倫;陳金中;;一種新的Bax異構(gòu)體Baxθ促進細胞凋亡(英文)[J];復旦學報(自然科學版);2014年03期

4 湯琴;鄧媛元;張雁;張瑞芬;魏振承;張名位;;苦瓜對腫瘤細胞的抑制作用及其活性成分研究進展[J];廣東農(nóng)業(yè)科學;2014年13期

5 鄧琳;隋海靜;楊雪;李文志;林長賦;李冬梅;;丙泊酚對大鼠心肌缺血再灌注損傷時凋亡蛋白Bax、Bcl-2的影響[J];哈爾濱醫(yī)科大學學報;2013年03期

6 張琰;;二苯乙烯苷對氧糖剝奪星形膠質(zhì)細胞凋亡的影響及其機制[J];濟寧醫(yī)學院學報;2013年04期

7 肖恒;王海霞;陶];劉鑫;鐘梁;黃世峰;馮文莉;;CTP-OD1-HA和CTP-OD2-HA融合肽在K562細胞中的定位及其與BCR-ABL蛋白的相互作用[J];解放軍醫(yī)學雜志;2013年11期

8 蘇正元;舒利民;Jong Hun Lee;Franciso Fuentes;王虎;吳天元;余四旺;Ah-Ng Tony Kong;;食用植物成分和中藥用于癌癥化學預防:Nrf2,表觀基因組學,癌癥干細胞(英文)[J];化學進展;2013年09期

9 欒巍;胡曉冬;;核轉(zhuǎn)錄因子-kappa B與炎癥和凋亡的關(guān)系[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學雜志;2010年S5期

10 唐雋;田志強;蘆東徽;楊曉晶;王躍萍;黃瑋;;HIV-1 Tat_(49-57)/HPV16 E7_(49-57)/pGM-CSF納米顆粒疫苗抗腫瘤研究[J];免疫學雜志;2013年10期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 姚聲濤;李剛;范瑞明;王長明;焦松;夏湘平;陳偉;韓沖;;氧自由基一線粒體信號通路在Edaravone治療創(chuàng)傷性腦損傷中的作用[A];2013年貴州省神經(jīng)外科年會論文集[C];2013年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙翠榮;吉西他濱衍生物SL-01和吲唑雙芳基脲類化合物抗癌活性研究[D];山東大學;2013年

2 周亮;Ataxin-3的抗氧化損傷功能研究[D];中國科學技術(shù)大學;2013年

3 金兌煥;Khz（靈芝，，豬苓融合菌絲體提取物）誘導人類癌細胞凋亡的機制[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

4 葉志堅;T細胞亞群在淋巴細胞性胸腔積液中的免疫學特征[D];華中科技大學;2013年

5 謝明征;多器官功能障礙綜合征大鼠小腸神經(jīng)-cajal間質(zhì)細胞—平滑肌網(wǎng)絡(luò)損傷和大承氣湯防治作用實驗研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

6 安濤;NRG-1保護阿霉素所致心肌細胞損傷的機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

7 王喜梅;Sitagliptin對缺氧環(huán)境下骨髓間充質(zhì)干細胞的保護作用及相關(guān)機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

8 劉曉麗;SIRT1在銅綠假單胞菌LPS誘導A549細胞凋亡中的作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

9 蔡美婷;髓系細胞觸發(fā)受體-1在單核細胞凋亡中的作用及其機制的研究[D];浙江大學;2012年

10 楊景文;5-Fu誘導人結(jié)腸癌HCT-116細胞自噬與凋亡的關(guān)系及機制研究[D];天津醫(yī)科大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙燕;BH3 mimetics分子優(yōu)化的量熱學研究[D];大連理工大學;2013年

2 孫倩倩;單細胞內(nèi)氧化還原相關(guān)活性小分子的原位動態(tài)分析與細胞功能的研究[D];山東師范大學;2013年

3 夏冰;Caspase-3抑制劑對體外循環(huán)時心臟的保護作用[D];鄭州大學;2013年

4 張明;環(huán)境激素雙酚A對SD大鼠睪丸生精細胞凋亡作用的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2013年

5 林南靜;多肽藥物細胞內(nèi)體釋放技術(shù)及其用于促癌細胞凋亡的研究[D];華東理工大學;2013年

6 車磊;線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔在缺血預處理腦保護中的作用及機制[D];青島大學;2013年

7 佘慧鈺;參麥注射液對術(shù)前阿霉素化療乳腺癌裸鼠模型心肌保護作用的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

8 孟泳圳;卵巢上皮癌側(cè)群細胞（side population,Sp）研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

9 聶振;穿膜肽促進β-葡萄糖苷酶/苦杏仁苷酶解前藥系統(tǒng)殺傷膀胱癌細胞的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

10 夏璐;槐耳浸膏誘導人胃腺癌細胞株MKN28、MKN45凋亡機制研究[D];遵義醫(yī)學院;2013年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 于廣晴;張家軍;石亞男;;基因NPRL2在急性白血病中的表達[J];黑龍江醫(yī)藥科學;2011年01期

2 程智勇;韓猛;門曉彥;易喜賢;;胃癌組織中NPRL2蛋白的表達變化[J];山東醫(yī)藥;2011年14期

3 裴鳳華;趙晶;杜雅菊;程艷秋;王曉芬;陳晶;張會濤;劉冰熔;高善玲;;外周血DNA TUSC4基因缺失在大腸癌分子篩查及早期診斷中的應(yīng)用[J];世界華人消化雜志;2010年31期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 江擁軍;新抑癌基因NPRL2抑制人肺癌細胞生長和逆轉(zhuǎn)耐藥性作用的體外實驗研究[D];中南大學;2008年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李天富,羅玉敏,呂傳真;細胞凋亡與caspase機制的調(diào)控[J];中國臨床神經(jīng)科學;2003年03期

2 Marco Ramadani;;Overexpression of Caspase-1 in adenocarcinoma of pancreas and chronic pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2003年12期

3 曾志勇,王志農(nóng),何斌,徐志云,張寶仁;貓體外循環(huán)時心肌caspase3 mRNA表達的變化[J];第二軍醫(yī)大學學報;2004年04期

4 王利民,劉華鋒,陳孝文;caspase-1及下游炎性因子與急性腎缺血-再灌注損傷[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2004年06期

5 朱愿,馬勇,陳立軍;Caspase與細胞凋亡[J];武警醫(yī)學院學報;2004年04期

6 ;Allitridi induces apoptosis by affecting Bcl-2 expression and caspase-3 activity in human gastric cancer cells[J];Acta Pharmacologica Sinica;2004年02期

7 徐新運,周雪,王廷華,張連雙,趙秀軍,章為;Caspase-3在成年貓脊髓和背根節(jié)的分布[J];四川解剖學雜志;2004年04期

8 ;Parthenolide protects human lens epithelial cells from oxidative stress-induced apoptosis via inhibition of activation of caspase-3 and caspase-9[J];Cell Research;2007年06期

9 許言午;趙煥新;劉清華;李曉宇;鄭志東;劉慧榮;吳博威;;比色法檢測Caspase-3相對活性[J];中國藥物與臨床;2008年05期

10 張曉華;季洪贊;楊妙芳;孫泉;吳曉蔚;許小兵;朱人敏;;Caspase-1抑制劑對實驗性重癥急性胰腺炎肺損傷的保護作用[J];解放軍醫(yī)學雜志;2008年10期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱秋華;江煥峰;李佳;劉叔文;;新型Caspase-3抑制劑二氫吡咯衍生物的研究[A];第十屆全國抗炎免疫藥理學學術(shù)會議論文集[C];2010年

2 ;Potent and Novel Nonpeptide Small Molecule Inhibtors of Caspase-3[A];中國化學會第四屆有機化學學術(shù)會議論文集[C];2005年

3 ;Apoptin induces apoptosis through ICEBERG/caspase-1 and caspase 3 signal pathway[A];中華醫(yī)學會腫瘤學分會第七屆全國中青年腫瘤學術(shù)會議——中華醫(yī)學會腫瘤學分會“中華腫瘤 明日之星”大型評選活動暨中青年委員全國遴選論文匯編[C];2011年

4 ;Non-apoptotic role of caspase-3 in synapse refinement[A];中國神經(jīng)科學學會第九屆全國學術(shù)會議暨第五次會員代表大會論文摘要集[C];2011年

5 ;The effect of cocaine on germ cell apoptosis in rats at different ages[A];2006年浙江省泌尿外科學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

6 ;Study on HepG-2 apoptosis induced by saponins isolated from Asparagus and the effects on the activities of caspase-3,8,9[A];兩岸三地藥理學與臨床藥理學術(shù)會議論文集[C];2008年

7 Wei Wang;Weihua Wang;Zhen Yan;Jinghua Yang;;Antiviral effects of dsRNA-dependent caspase recruiter[A];生命的分子機器及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)——2012年全國生物化學與分子生物學學術(shù)大會摘要集[C];2012年

8 吳思榮;惠國楨;李向東;祁震宇;王之敏;胡錦;俞文華;王清;;大鼠創(chuàng)傷性腦損傷后神經(jīng)細胞凋亡的動態(tài)變化及其與caspase-3基因表達的關(guān)系[A];《中華急診醫(yī)學雜志》第七屆組稿會論文匯編[C];2008年

9 湯海峰;王一葦;林厚文;陳協(xié)群;;草苔蟲內(nèi)酯5通過激活PUMA和caspases誘導急性單核細胞性白血病細胞凋亡(英文)[A];2012年中國藥學大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

10 臧志軍;鄧春華;孫祥宙;黃曉卉;王浩;蘇勝華;;caspase-1在良性前列腺增生組織中的表達及意義[A];21世紀男科學——中華醫(yī)學會第五次全國男科學學術(shù)會議論文集[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 一帆;caspase—8缺陷導致免疫紊亂[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

2 張?zhí)锟?細胞焦亡假說與艾滋病防治[N];中國醫(yī)藥報;2014年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林居強;細胞凋亡過程中caspase蛋白酶激活的光學成像研究[D];華中科技大學;2006年

2 楊銳;硬脂酰酪氨酸對非caspase依賴的細胞損傷的神經(jīng)保護作用及其機制研究[D];上海交通大學;2013年

3 薛寅佳;小型豬自體移植腎灌注短效Caspase-3小干擾RNA冷保存導致腎損傷加劇的機制初探[D];復旦大學;2013年

4 廖文韜;Tn-IAP1v的結(jié)構(gòu)與功能分析[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2002年

5 徐華;Caspase-3蛋白在重離子輻照肺癌細胞中的功能研究[D];蘭州大學;2012年

6 賈林濤;靶向性重組caspase-3基因的構(gòu)建、表達及其對腫瘤細胞的殺傷作用[D];第四軍醫(yī)大學;2001年

7 路斌;小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中caspase抑制劑對caspase活性的影響和對細胞凋亡抑制作用的研究[D];中國醫(yī)科大學;2007年

8 王暉;接頭蛋白NRBP及蛋白酶caspase-10新剪切體的功能研究[D];上海交通大學;2007年

9 楊橙;Caspase-3小干擾RNA在豬自體腎移植模型中對供腎的保護作用及機制研究[D];復旦大學;2013年

10 王穎;2'-5'寡核苷酸合成酶基因啟動子介導的重組Caspase-3基因治療丙型肝炎的體外實驗研究[D];中南大學;2009年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邱炯;促紅細胞生成素對大鼠缺血再灌注心肌的保護作用及對caspase信號通路影響的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2006年

2 蘇騰;卡托普利晚期預處理對缺氧復氧誘導內(nèi)皮細胞凋亡Caspase蛋白表達的影響[D];吉林大學;2005年

3 董迪榮;診斷超聲輻射對人早孕絨毛細胞Caspase-3、8蛋白表達的影響[D];武漢大學;2005年

4 周麗君;Caspase-14在宮頸鱗癌組織中表達意義的實驗研究[D];中南大學;2012年

5 薛子成;樺木酸及其衍生物與Caspase-3分子對接及分子動力學研究[D];哈爾濱理工大學;2014年

6 石磊;股骨頭壞死組織中Caspase-3調(diào)控成骨細胞分化的研究[D];福建醫(yī)科大學;2008年

7 郝曉斌;Caspase-3-siRNA預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究[D];蘇州大學;2009年

8 韓偉強;金屬硫蛋白對皮瓣缺血再灌注損傷時相關(guān)凋亡基因Caspase-3表達影響的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2011年

9 周舟;Caspase-3激活在缺氧誘導心肌細胞凋亡過程中的作用[D];第三軍醫(yī)大學;2002年

10 雷艷榮;Caspase-3-928A/G基因多態(tài)性和大腸癌易感性及侵襲性的關(guān)聯(lián)性研究[D];華中科技大學;2010年

本文編號：853854