本文關(guān)鍵詞：高糖對(duì)小球系膜細(xì)胞生物鐘基因表達(dá)的影響及機(jī)制探討

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【摘要】：目的:晝夜節(jié)律(Circadian rhythm)是自然界最普遍的自然現(xiàn)象之一,晝夜節(jié)律生物鐘(Circadian clock)就是設(shè)定并調(diào)控機(jī)體出現(xiàn)這種晝夜節(jié)律的系統(tǒng),是一種以近似24小時(shí)為周期的晝夜節(jié)律振蕩器(Circadian oscillator)。生物鐘與太陽(yáng)光周期變化、物質(zhì)代謝和能量攝取同步。血糖作為物質(zhì)代謝和能量攝取的重要環(huán)節(jié)及組成部分,大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究證實(shí)生物鐘基因表達(dá)水平高低與血糖水平密切相關(guān),生物鐘基因的缺失可導(dǎo)致胰島素分泌減少、胰島素分泌節(jié)律紊亂,生物鐘節(jié)律紊亂成為糖尿病發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素。但目前尚無(wú)研究系統(tǒng)探討高糖對(duì)生物鐘基因的影響及生物鐘基因在糖尿病并發(fā)癥發(fā)病中的作用及機(jī)制,故本研究通過(guò)觀(guān)察小鼠腎小球系膜細(xì)胞(glomerular mesangial cell,GMC)生物鐘基因在不同濃度高糖及在活性氧(Reactive oxygen species,ROS)抑制劑N-乙酰半胱氨酸(N-acctyl-L-cystcinc,NAC)干預(yù)下的表達(dá)變化,同時(shí)檢測(cè)小鼠腎小球系膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎癥因子表達(dá)變化,旨在探討高糖對(duì)腎小球系膜8個(gè)生物鐘基因表達(dá)的影響及作用機(jī)制。方法:1.細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組:體外培養(yǎng)小鼠腎小球系膜細(xì)胞,以不同濃度高糖作為刺激因素,活性氧抑制劑NAC作為ROS阻斷劑干預(yù)高糖作用,分別設(shè)為以下4組:(1)正常對(duì)照組(normal control group,NC組):培養(yǎng)基含5.6mmol/L葡萄糖;(2)滲透壓對(duì)照組(osmotic pressure group,op組):培養(yǎng)基含5.6mmol/l葡萄糖+24.4mmol/l甘露醇(滲透壓約等于30mmol/l高糖組);(3)不同濃度高糖組(highglucosegroup,hg組):培養(yǎng)基分別含10mmol/l葡萄糖(hg1組)、20mmol/l葡萄糖(hg2組)、30mmol/l葡萄糖(hg3組);(4)nac+高糖組(nac+hg組):表達(dá)變化最強(qiáng)濃度的高糖組預(yù)先加入10μmol/l活性氧抑制劑nac工作液作為干預(yù)因素,了解活性氧在高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞生物鐘基因改變中的作用。2.檢測(cè)方法:(1)各組小鼠腎小球系膜細(xì)胞適時(shí)隨機(jī)分別加入不同作用物培養(yǎng)24小時(shí)后用rt-pcr法檢測(cè)細(xì)胞中8個(gè)生物鐘基因clock,bmal1,rev-erbα,per1,per2,per3,cry1,cry2mrna表達(dá)水平變化;(2)各組小鼠腎小球系膜細(xì)胞適時(shí)隨機(jī)分別加入作用物培養(yǎng)24小時(shí)后裝載2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽探針(2',7'-dichlorofluorescindiacetate,dcfh-da),用分光光度計(jì)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ros水平變化;(3)各組小鼠腎小球系膜細(xì)胞適時(shí)隨機(jī)分別加入作用物培養(yǎng)24小時(shí)后收集細(xì)胞培養(yǎng)液,離心后取上清液用elisa法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎癥因子白介素-6(interleukin-6,il-6)及c-c趨化因子配體-2(c-cchemokineligand2,ccl-2;又稱(chēng)為單核細(xì)胞趨化蛋白-1,monocytechemotacticprotein1,mcp-1)的表達(dá)變化。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件spss20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)表示,組內(nèi)比較采用方差齊性檢驗(yàn),各組間比較采用單因素方差分析,組間多重比較用lsd-t法,我們定義p0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.與正常對(duì)照組相比,高糖組小鼠腎小球系膜細(xì)胞生物鐘基因CLOCK,BMAL1,REV-ERBα,Per1,Per2,Per3,Cry1,Cry2 mRNA表達(dá)水平均增加(P0.05),其中CLOCK,BMAL1,REV-ERBα,Per1,Per2,Per3,Cry2 mRNA表達(dá)增加呈濃度依賴(lài)性;同時(shí),與正常對(duì)照組相比,高糖組小鼠腎小球系膜細(xì)胞內(nèi)ROS水平及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6及CCL-2表達(dá)水平均呈濃度依賴(lài)性增加(P0.05)。2.與高糖組相比,預(yù)先加入NAC干預(yù)高糖氧化應(yīng)激作用后可阻止高糖誘導(dǎo)的小鼠腎小球系膜細(xì)胞CLOCK,BMAL1,REV-ERBα,Per1,Per2,Per3,Cry1,Cry2 mRNA高表達(dá)(P0.05),加入NAC干預(yù)高糖作用后同樣能降低小鼠腎小球系膜細(xì)胞內(nèi)ROS水平及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6、CCL-2表達(dá)水平(P0.05)。結(jié)論:高糖通過(guò)氧化應(yīng)激機(jī)制上調(diào)小鼠腎小球系膜細(xì)胞生物鐘基因CLOCK,BMAL1,REV-ERBα,Per1,Per2,Per3,Cry1,Cry2的表達(dá),可能參與了糖尿病腎病炎癥反應(yīng)的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 生物鐘 氧化應(yīng)激 炎性介質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R692
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-16
• 材料與方法16-30
• 結(jié)果30-41
• 討論41-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 英文縮略詞表52-53
• 致謝53-54
• 個(gè)人撰寫(xiě)、發(fā)表文章54-55
• 生物鐘基因與糖尿病 綜述55-66
• 參考文獻(xiàn)62-66

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王佩瑤;;生物鐘 生命的“發(fā)條”[J];新晉商;2012年09期

2 張繼峰;美國(guó)科學(xué)家克隆出小鼠生物鐘基因[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1998年01期

3 項(xiàng)安波;;揭開(kāi)神奇的生物鐘之謎[J];健康管理;2010年08期

4 王雅平;華魯純;張延齡;;生物鐘基因與腫瘤[J];國(guó)際外科學(xué)雜志;2006年04期

5 項(xiàng)安波;;您總是打瞌睡?可能是生物鐘在作怪[J];健康管理;2010年10期

6 劉宏偉;;隱藏在眼睛里的生物鐘[J];保健醫(yī)苑;2013年02期

7 ;生物鐘[J];科技經(jīng)濟(jì)市場(chǎng);2002年02期

8 熊娟;李光明;;生物鐘基因與腫瘤時(shí)辰治療的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2013年11期

9 牛占鋒;夏鶴春;;生物鐘基因及其在膠質(zhì)瘤治療中的前景[J];國(guó)際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2008年01期

10 李瑞文;成姝婷;王正榮;;生物鐘基因與哺乳動(dòng)物生殖[J];生物學(xué)雜志;2013年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐祖元;;血紅素對(duì)小鼠外周生物鐘基因表達(dá)節(jié)律的影響[A];湖北省遺傳學(xué)會(huì)第七次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2004年

2 張永虹;余萬(wàn)霰;;積極開(kāi)展生物鐘基因?qū)Π┘?xì)胞調(diào)控的研究[A];2004全國(guó)時(shí)間生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

3 王正榮;;生物鐘基因與疾病的關(guān)系[A];2009全國(guó)時(shí)間生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

4 夏洪平;;生物鐘基因與腫瘤時(shí)辰治療[A];2006全國(guó)時(shí)間生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

5 施定基;賈曉會(huì);王曉燕;徐林;冉凌飛;王軍成;殷文博;;藍(lán)藻生物鐘分子生物學(xué)的研究[A];泛環(huán)渤海地區(qū)九省市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)——2011年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2011年

6 汪啟明;游玲;黃愛(ài)國(guó);謝鳳欣;饒力群;;受熱脅迫調(diào)控的植物生物鐘元件的篩選與生物信息學(xué)分析[A];2013全國(guó)植物生物學(xué)大會(huì)論文集[C];2013年

7 施定基;冉凌飛;王軍成;賈曉會(huì);CJohnson;鄧元告;;聚球藻7942生物鐘基因KaiA的克隆與敲除載體的構(gòu)建[A];慶祝中國(guó)藻類(lèi)學(xué)會(huì)成立30周年暨第十五次學(xué)術(shù)討論會(huì)摘要集[C];2009年

8 賈曉會(huì);徐林;施定基;王曉燕;殷文博;鄧元告;徐仰倉(cāng);;生物鐘基因kaiB的正反義表達(dá)與聚球藻的形態(tài)、生長(zhǎng)與含油率[A];中國(guó)藻類(lèi)學(xué)會(huì)第八次會(huì)員代表大會(huì)暨第十六次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2011年

9 施定基;王軍成;冉凌飛;賈曉會(huì);CJohnson;徐仲;;聚球藻7942生物鐘基因KaiB的克隆與敲除載體的構(gòu)建[A];慶祝中國(guó)藻類(lèi)學(xué)會(huì)成立30周年暨第十五次學(xué)術(shù)討論會(huì)摘要集[C];2009年

10 賈曉會(huì);施定基;冉凌飛;王軍成;C.Johnson;杜桂森;;聚球藻7942中生物鐘基因kaiC的克隆和敲除[A];慶祝中國(guó)藻類(lèi)學(xué)會(huì)成立30周年暨第十五次學(xué)術(shù)討論會(huì)摘要集[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬友英;特定基因令生物鐘“我行我素”[N];大眾科技報(bào);2001年

2 ;生物鐘基因孵子時(shí)期就工作[N];新華每日電訊;2000年

3 夏文燕 姚臻;我國(guó)生物鐘研究領(lǐng)域首個(gè)973項(xiàng)目落戶(hù)蘇大[N];江蘇科技報(bào);2012年

4 ;我國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)生物鐘調(diào)節(jié)新機(jī)制[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

5 錢(qián)錚;嬰兒護(hù)理室長(zhǎng)明燈,可能擾亂孩子生物鐘[N];新華每日電訊;2006年

6 小華;基因改造讓蒼蠅生物期延長(zhǎng)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

7 張涌濱;長(zhǎng)明燈可能擾亂新生兒生物鐘[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

8 記者 張可喜;果蠅也有生物鐘[N];新華每日電訊;2001年

9 日紋;生物鐘基因能調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

10 胡月;健康調(diào)節(jié)“頻率” 為生命締造福音[N];科技日?qǐng)?bào);2013年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 錢(qián)智勇;β腎上腺素能受體慢性激活對(duì)心臟外周生物鐘基因的調(diào)控[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

2 李成偉;小鼠肝臟內(nèi)生物鐘發(fā)育表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2014年

3 季耀庭;哺乳動(dòng)物生物鐘相關(guān)基因的發(fā)育表達(dá)及調(diào)控機(jī)制的研究[D];武漢大學(xué);2010年

4 杜玉珍;大鼠外周血淋巴細(xì)胞生物鐘基因的晝夜表達(dá)及鐘控基因的篩選鑒定[D];蘇州大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 林長(zhǎng)潑;斑塊來(lái)源血管平滑肌細(xì)胞中生物鐘基因、凋亡及纖溶系統(tǒng)基因表達(dá)改變的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 韓野;生物鐘基因NPAS2對(duì)腸癌細(xì)胞株DLD-1生物學(xué)行為影響的基礎(chǔ)與臨床研究[D];蘇州大學(xué);2015年

3 陶燕來(lái);BEC對(duì)哺乳動(dòng)物外周生物鐘的影響及其有效成分的判定[D];浙江工業(yè)大學(xué);2013年

4 向潤(rùn);生物鐘基因Period2對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響及相關(guān)分子研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

5 李晗雪;生物鐘基因Per1對(duì)人口腔鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響和調(diào)控機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

6 王永鵬;中華大蟾蜍（Bufo bufo gargarigans）生物鐘和內(nèi)分泌對(duì)低溫的應(yīng)激響應(yīng)與適應(yīng)[D];浙江師范大學(xué);2016年

7 王吉英;高糖對(duì)小球系膜細(xì)胞生物鐘基因表達(dá)的影響及機(jī)制探討[D];西南醫(yī)科大學(xué);2016年

8 黃潔;高脂對(duì)小鼠心肌細(xì)胞生物鐘基因表達(dá)的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

9 羅志勇;銅綠微囊藻生物鐘蛋白的節(jié)律檢測(cè)及其相互作用蛋白的篩選[D];廈門(mén)大學(xué);2007年

10 雷雅琪;水稻生物鐘相關(guān)基因的功能預(yù)測(cè)分析及CSA節(jié)律性表達(dá)機(jī)理初步探討[D];寧夏大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：794306