本文關鍵詞：低表達C3aR人腎足細胞的構建及鑒定

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【摘要】：目的前期的研究中發(fā)現(xiàn)過敏性毒素C3a受體(C3aR)在糖尿病腎病病中表達增加,但在糖尿病腎中的病理意義及其在腎組織足細胞中的生理作用尚不清楚,文中通過建立C3aR低表達的腎足細胞系(HPC-C3aRsiRNA),為研究C3aR在腎足細胞中的生理功能提供細胞模型。方法設計合成人C3aR小干擾RNA(C3aRsiRNA),將其克隆到慢病毒表達載體中,通過與包裝質粒共轉染293T細胞,包裝成C3aRsiRNA慢病毒,利用C3aRsiRNA慢病毒感染人腎足細胞HPC,根據(jù)C3aRsiRNA慢病毒具有嘌呤霉素抗性基因的特點篩選穩(wěn)定轉染的人腎足細胞。通過熒光定量PCR分析穩(wěn)定轉染的足細胞C3aR的mRNA表達水平,Western blot和免疫組化染色分析穩(wěn)定轉染的腎足細胞C3aR蛋白水平,鑒定穩(wěn)定轉染C3aR低表達的腎足細胞系。結果熒光定量PCR結果顯示,與HPC-C3aRsiRNA細胞C3aR的mRNA水平(0.26±0.04)比較,非轉染HPC細胞(1.00±0.13)和陰性對照(1.07±0.16)顯著升高(P0.05)。免疫組化染色顯示HPC-C3aRsiRNA細胞的C3aR蛋白水平顯著降低。Western blot結果顯示,與HPC-C3aRsiRNA C3aR蛋白表達(0.62±0.09)比較,正常HPC、陰性轉染的HPC表達(1.00±0.08、1.00±0.22)顯著升高(P0.05)。結論成功構建了C3aR低表達的腎足細胞系,可為進一步了解C3aR在腎中的生理作用提供細胞模型。
【作者單位】： 南京軍區(qū)南京總醫(yī)院國家腎臟疾病臨床醫(yī)學研究中心全軍腎臟病研究所;
【關鍵詞】： 低表達 CaR 轉染 人腎足細胞
【基金】：國家自然科學基金(81370828)
【分類號】：R692
【正文快照】： 0引言補體系統(tǒng)是先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分,參與具有識別自身和免疫清除等作用,裂解C3成C3a和C3b兩部分是其活化的重要過程。C3b可以與免疫復合物、細胞表面及其他相關循環(huán)蛋白結合,發(fā)揮調理作用[1-2]。C3a通過與其受體過敏性毒素C3a受體(C3aR)結合,發(fā)揮起生物學功能。早期，

本文編號：700202