發(fā)布時(shí)間：2017-08-19 10:27

  本文關(guān)鍵詞：低表達(dá)C3aR人腎足細(xì)胞的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：目的前期的研究中發(fā)現(xiàn)過敏性毒素C3a受體(C3aR)在糖尿病腎病病中表達(dá)增加,但在糖尿病腎中的病理意義及其在腎組織足細(xì)胞中的生理作用尚不清楚,文中通過建立C3aR低表達(dá)的腎足細(xì)胞系(HPC-C3aRsiRNA),為研究C3aR在腎足細(xì)胞中的生理功能提供細(xì)胞模型。方法設(shè)計(jì)合成人C3aR小干擾RNA(C3aRsiRNA),將其克隆到慢病毒表達(dá)載體中,通過與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,包裝成C3aRsiRNA慢病毒,利用C3aRsiRNA慢病毒感染人腎足細(xì)胞HPC,根據(jù)C3aRsiRNA慢病毒具有嘌呤霉素抗性基因的特點(diǎn)篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的人腎足細(xì)胞。通過熒光定量PCR分析穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的足細(xì)胞C3aR的mRNA表達(dá)水平,Western blot和免疫組化染色分析穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的腎足細(xì)胞C3aR蛋白水平,鑒定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染C3aR低表達(dá)的腎足細(xì)胞系。結(jié)果熒光定量PCR結(jié)果顯示,與HPC-C3aRsiRNA細(xì)胞C3aR的mRNA水平(0.26±0.04)比較,非轉(zhuǎn)染HPC細(xì)胞(1.00±0.13)和陰性對照(1.07±0.16)顯著升高(P0.05)。免疫組化染色顯示HPC-C3aRsiRNA細(xì)胞的C3aR蛋白水平顯著降低。Western blot結(jié)果顯示,與HPC-C3aRsiRNA C3aR蛋白表達(dá)(0.62±0.09)比較,正常HPC、陰性轉(zhuǎn)染的HPC表達(dá)(1.00±0.08、1.00±0.22)顯著升高(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建了C3aR低表達(dá)的腎足細(xì)胞系,可為進(jìn)一步了解C3aR在腎中的生理作用提供細(xì)胞模型。
【作者單位】： 南京軍區(qū)南京總醫(yī)院國家腎臟疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心全軍腎臟病研究所;
【關(guān)鍵詞】： 低表達(dá) CaR 轉(zhuǎn)染 人腎足細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81370828)
【分類號】：R692
【正文快照】： 0引言補(bǔ)體系統(tǒng)是先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分,參與具有識別自身和免疫清除等作用,裂解C3成C3a和C3b兩部分是其活化的重要過程。C3b可以與免疫復(fù)合物、細(xì)胞表面及其他相關(guān)循環(huán)蛋白結(jié)合,發(fā)揮調(diào)理作用[1-2]。C3a通過與其受體過敏性毒素C3a受體(C3aR)結(jié)合,發(fā)揮起生物學(xué)功能。早期，

本文編號：700202