本文關(guān)鍵詞：膀胱腫瘤檢測(cè)微流控芯片的設(shè)計(jì)與制備

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【摘要】：膀胱癌是發(fā)生在膀胱粘膜上的惡性腫瘤,是泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤,其發(fā)病率和致死率較高。而目前臨床的技術(shù)手段對(duì)于膀胱癌的診斷和檢測(cè)有諸多缺點(diǎn)和不足,例如檢測(cè)過(guò)程有創(chuàng)傷,且敏感性特異性不高。為了更便捷準(zhǔn)確地檢測(cè)出膀胱癌,本文設(shè)計(jì)并制備出一種新型的用于膀胱癌早期檢測(cè)的微流控芯片。本研究選取PDMS (polydimethylsiloxane)作為芯片材料,采用模塑法制作芯片；采用三步離心的方式從患者尿液樣品中收集膀胱腫瘤細(xì)胞,并經(jīng)過(guò)特異抗體的免疫組織化學(xué)染色對(duì)其進(jìn)行鑒定；使用硅烷化修飾在玻片上固定特異性抗體,在芯片通過(guò)與細(xì)胞尺寸相符合的圓柱形陣列結(jié)構(gòu)和細(xì)胞抓捕室采用抗原抗體免疫吸附反應(yīng)進(jìn)行細(xì)胞抓捕與鑒定,調(diào)整灌流速度和抓捕條件,通過(guò)顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果顯示,在本研究搭建的微流控芯片中,特異性抗體可以成功固定在玻片表面并保存,通過(guò)熒光強(qiáng)度反映不同條件下玻片固定熒光抗體的能力,探究得到在硅烷化時(shí)間為5 min,抗體孵育時(shí)間2 h時(shí),特異性抗體固定效果最好。從尿液樣品中提取膀胱癌細(xì)胞后,采用特異性抗體Anti-CD15對(duì)其進(jìn)行鑒定實(shí)驗(yàn),免疫組化反應(yīng)后,部分細(xì)胞特異性被熒光標(biāo)記。芯片內(nèi)膀胱癌細(xì)胞抓捕與鑒定實(shí)驗(yàn)顯示微流控芯片特異性抓捕到的細(xì)胞均被熒光標(biāo)記,顯示微流控芯片特異地捕獲到了樣品中的膀胱癌細(xì)胞。以上結(jié)果證明本研究成功設(shè)計(jì)并制備了可用于膀胱腫瘤檢測(cè)和診斷的微流控芯片系統(tǒng),在此基礎(chǔ)上成功探究出微流控芯片底部固定特異性抗體的最適宜條件,并以病人尿液為樣品,特異性提取鑒定出樣品中的膀胱癌細(xì)胞,為膀胱癌的早期檢測(cè)和診斷提供了有力的平臺(tái)。
【關(guān)鍵詞】：微流控芯片 膀胱癌細(xì)胞 早期診斷
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：TN492;R737.14
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 緒論8-21
• 1.1 研究背景及意義8-9
• 1.2 微流控芯片上的腫瘤細(xì)胞檢測(cè)概述9-17
• 1.2.1 微流控芯片的材料和制備方式9-10
• 1.2.2 微流控芯片上的腫瘤細(xì)胞捕獲10-11
• 1.2.3 氣動(dòng)微閥驅(qū)動(dòng)11-13
• 1.2.4 不同種類(lèi)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)方法13-17
• 1.3 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀17-20
• 1.4 本章小結(jié)20-21
• 2 膀胱癌檢測(cè)的微流控芯片系統(tǒng)的搭建21-33
• 2.1 引言21
• 2.2 芯片結(jié)構(gòu)21-27
• 2.2.1 芯片設(shè)計(jì)方案21-22
• 2.2.2 流體通道結(jié)構(gòu)22-25
• 2.2.3 微流體控制25-26
• 2.2.4 雙層芯片結(jié)構(gòu)26-27
• 2.3 微流控芯片的制作27-30
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-31
• 2.5 討論31-32
• 2.6 本章小結(jié)32-33
• 3 膀胱癌檢測(cè)微流控芯片的功能實(shí)現(xiàn)33-43
• 3.1 引言33
• 3.2 材料與方法33-37
• 3.2.1 材料33-34
• 3.2.2 方法34-37
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-40
• 3.3.1 抗體包被與固定37-38
• 3.3.2 膀胱癌細(xì)胞的提取與鑒定38-39
• 3.3.3 芯片內(nèi)膀胱癌細(xì)胞的抓捕與鑒定39-40
• 3.4 討論40-42
• 3.5 本章小結(jié)42-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況47-48
• 致謝48-49

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