發(fā)布時間：2017-08-13 08:28

  本文關(guān)鍵詞：血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)HMC細(xì)胞中SOCS-1和相關(guān)炎癥因子的表達(dá)及荔枝核皂苷的干預(yù)作用研究

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【摘要】：目的:(1)通過體外細(xì)胞實驗,探討血管緊張素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)在糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)中的作用機(jī)制,明確Ang Ⅱ?qū)δI小球系膜細(xì)胞(human glomerular mesangial cells,HMC)的增殖及荔枝核皂苷(Saponin of Litchi Seed,SLD)的干預(yù)作用和機(jī)制。(2)明確炎癥因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)在DN發(fā)生發(fā)展中的重要作用。(3)研究細(xì)胞因子信號抑制因子-1(Suppressor of cytokine signaling-1,SOCS-1)在DN中的地位和作用,明確SOCS-1的表達(dá)可以減輕DN的炎癥反應(yīng)。方法:(1)將HMC細(xì)胞分為5組:(1)正常組:正常培養(yǎng)細(xì)胞(2)Ang Ⅱ 10-6mol/ml組(3)Ang Ⅱ 10-7mol/ml組(4)Ang Ⅱ 10-8 mol/ml組(5)空白調(diào)零組:無細(xì)胞。(2)首先以MTT比色法進(jìn)行Ang Ⅱ有效作用濃度的篩選,隨后采用不同濃度SLD(5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml)干預(yù),作用時間為48h后收集各組細(xì)胞上清液和細(xì)胞。(3)應(yīng)用MTT比色法檢測HMC細(xì)胞增殖;酶聯(lián)免疫實驗(Elisa法)檢測細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-6的含量;運(yùn)用蛋白免疫試驗(western blot法)檢測SOCS-1信號蛋白的表達(dá)。結(jié)果:(1)MTT法檢測結(jié)果顯示,Ang Ⅱ作用于HMC細(xì)胞后,吸光度值(OD值)明顯增加(P0.05),10-6 mol/ml Ang Ⅱ在48h作用最明顯(P0.01)。(2)MTT法檢測結(jié)果顯示,與Ang Ⅱ組相比,SLD高、中、低劑量組均顯著抑制HMC細(xì)胞的增殖(P0.01),其中以SLD高劑量組48h抑制率最高(55.43%);(3)ELISA法檢測結(jié)果顯示,與Ang Ⅱ組比較,SLD各劑量組能夠抑制HMC細(xì)胞的IL-1β、IL-6水平(P0.01或P0.05)(4)Western Blot結(jié)果顯示,Ang Ⅱ組示SOCS-1的蛋白表達(dá)量升高,明顯高于正常組,差異顯著(P*0.01)。Ang Ⅱ+SLD組與Ang Ⅱ組比較,蛋白表達(dá)量顯著下降(P*0.01),但與正常組比較仍然較高。結(jié)論:(1)Ang Ⅱ誘導(dǎo)HMC細(xì)胞增殖的最佳作用濃度為10-6 mol/ml,吸光度值在48小時作用最明顯。(2)隨著SLD濃度、時間的增長,抑制率也逐漸增加。說明SLD對HMC細(xì)胞增殖的抑制率與濃度、時間密切相關(guān)。(3)SLD可使HMC細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-6、IL-1β的含量顯著下降,且能抑制HMC細(xì)胞的增殖,可減少細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)分泌,從而延緩腎小球硬化的進(jìn)程。(4)Ang Ⅱ可以通過SOCS-1信號通路刺激HMC細(xì)胞炎癥因子的表達(dá),SLD可以抑制HMC細(xì)胞蛋白的表達(dá),為研究糖尿病腎病提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 血管緊張素Ⅱ 荔枝核皂苷
【學(xué)位授予單位】：長春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文縮略語10-11
• 前言11-12
• 文獻(xiàn)綜述12-18
• 1 病名的探討12-13
• 1.1 古代醫(yī)家的認(rèn)識12
• 1.2 現(xiàn)代醫(yī)家的認(rèn)識12-13
• 2 病因病機(jī)13-14
• 2.1 氣陰兩虛型13
• 2.2 脾腎虧虛型13
• 2.3 瘀血阻絡(luò)型13-14
• 2.4 毒損腎絡(luò)型14
• 2.5 肝腎兩虛型14
• 3 辨證論治14-16
• 3.1 分型辨證14-15
• 3.2 分期辨證15-16
• 4 專方驗方16-17
• 5 總結(jié)與展望17-18
• 實驗研究18-33
• 1 材料與儀器18-20
• 1.1 材料18-19
• 1.2 儀器19-20
• 2 方法20-29
• 2.1 溶液的配置20-22
• 2.2 HMC細(xì)胞培養(yǎng)22-23
• 2.3 實驗分組23
• 2.4 MTT法篩選AngⅡ有效作用濃度23-24
• 2.5 MTT法檢測荔枝核皂苷對HMC細(xì)胞增殖的影響：24-25
• 2.6 ELISA法檢測細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-6 的含量25-26
• 2.7 運(yùn)用Western blot方法檢測SOCS-1 信號蛋白的表達(dá)26-29
• 2.8 統(tǒng)計學(xué)方法29
• 3 結(jié)果29-33
• 3.1 AngⅡ?qū)MC細(xì)胞有效誘導(dǎo)濃度29-30
• 3.2 SLD對AngⅡ誘導(dǎo)HMC細(xì)胞增殖的影響30
• 3.3 SLD對HMC細(xì)胞IL-1β、IL-6 含量的影響30-31
• 3.4 Western blot檢測SOCS-1 蛋白表達(dá)結(jié)果31-33
• 討論33-37
• 1 本實驗研究的立題依據(jù)33
• 2 關(guān)于建立細(xì)胞模型的探討33-34
• 3 關(guān)于荔枝核的探討34-35
• 3.1 荔枝核的文獻(xiàn)記載34
• 3.2 荔枝核的實驗研究34-35
• 4 IL-1β、IL-6 在DN發(fā)病機(jī)制中的討論35
• 5 SOCS-1 在DN中的作用探討35-36
• 6 實驗結(jié)果的討論36-37
• 結(jié)語37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42

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本文編號：666350