發(fā)布時間：2017-08-08 15:06

  本文關(guān)鍵詞：Cullin1在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： Cullin1 腎癌 細(xì)胞增殖 遷移 侵襲

【摘要】：目的:研究Cullin1基因在腎癌中的表達(dá)情況及其在腎癌細(xì)胞增殖、遷移與侵襲中的作用,并深入研究Cullin1基因在腎癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮上述作用的分子機(jī)制。方法:體外實驗:首先利用組織微列陣技術(shù)及免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測Cullin1在307例腎癌組織與34正常腎組織中的表達(dá)情況,分析Cullin1(Cul1)表達(dá)與臨床病理因素及腎癌患者生存預(yù)后的關(guān)系;然后用在體外化學(xué)合成的Cullin1 si RNA和Control si RNA轉(zhuǎn)染人腎癌786-O及ACHN細(xì)胞,用Western Blot技術(shù)檢測Cullin1si RNA干涉Cullin1蛋白表達(dá)的效果,用CCK-8及細(xì)胞周期流式分析檢測Cullin1si RNA轉(zhuǎn)染后腎癌細(xì)胞增殖情況的變化,用遷移及侵襲實驗檢測轉(zhuǎn)染Cullin1 si RNA后腎癌細(xì)胞遷移與侵襲能力的變化,用Western Blot實驗研究Cullin1 si RNA干涉腎癌786-O及ACHN細(xì)胞后,腎癌細(xì)胞中Cyclins、p21、p27、MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2蛋白表達(dá)的變化情況。體內(nèi)實驗:通過慢病毒重組技術(shù)將Cullin1 si RNA和Control si RNA序列整入慢病毒中,再用整合好的慢病毒轉(zhuǎn)染786-O-Luc細(xì)胞,用嘌呤霉素篩選轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞一個月,之后選擇BALB/c裸鼠,用PBS重懸786-O-Luc-Cullin1-sh RNA及786-O-Luc-Control-sh RNA細(xì)胞,細(xì)胞密度約為1×107個/200μL,每只老鼠皮下注射Control sh RNA及Cullin1 sh RNA細(xì)胞200μL,一月后用小動物活體成像系統(tǒng)檢測皮下成瘤生物發(fā)光信號,觀察其成瘤情況。結(jié)果:體外實驗:1、免疫組織化學(xué)法(IHC)顯示:Cullin1在腎癌組織的表達(dá)高于正常腎組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),Cullin1的表達(dá)在T4期腎癌患者中明顯高于T1-T3期患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),Cullin1的表達(dá)情況與患者的疾病相關(guān)存活率及總生存率無關(guān)(P0.05)。2、Western Blot實驗顯示:與Control si RNA組相比,轉(zhuǎn)染Cullin1 si RNA后腎癌786-O和ACHN細(xì)胞中的Cullin1蛋白表達(dá)量下降;3、細(xì)胞增殖實驗顯示:轉(zhuǎn)染Cullin1 si RNA的腎癌786-O和ACHN細(xì)胞增殖能力與Control si RNA組相比明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(786-O組P0.05,ACHN組P0.05),流式分析顯示在干涉Cullin1的表達(dá)后兩種細(xì)胞G1期細(xì)胞數(shù)增多,S期減少;4、細(xì)胞遷移實驗顯示:Cullin1 si RNA轉(zhuǎn)染腎癌786-O和ACHN細(xì)胞后,其穿過Transwell小室的細(xì)胞的數(shù)目與Control si RNA組相比分別下降了53%和79%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(786-O組P0.05,ACHN組P0.05);5、細(xì)胞侵襲實驗顯示:Cullin1si RNA轉(zhuǎn)染腎癌786-O和ACHN細(xì)胞后,其穿過Transwell小室的細(xì)胞數(shù)目與Control si RNA組相比分別下降了95%和74%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(786-O組P0.05,ACHN組P0.05);6、Western Blot實驗顯示:腎癌786-O和ACHN細(xì)胞轉(zhuǎn)染Cullin1 si RNA后,與對照組相比其p21、p27、TIMP-1蛋白表達(dá)量增多,Cyclin D1、Cyclin E2、MMP-9蛋白表達(dá)量下降,MMP-2及TIMP-2蛋白表達(dá)量無變化。體內(nèi)實驗:與Control sh RNA組相比,Cullin1 sh RNA組裸鼠皮下生物發(fā)光信號明顯減弱,兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:Cullin1在腎癌組織中呈高表達(dá),表明其可能是一個促癌基因,干涉Cullin1基因可以通過增加周期蛋白抑制p21及p27蛋白的表達(dá)來抑制周期蛋白Cyclin D1及Cyclin E2的表達(dá)從而抑制細(xì)胞增殖,此外干涉腎癌Cullin1基因可以通過增強(qiáng)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑TIMP-1蛋白的表達(dá)來抑制MMP-9信號通路,從而降低腎癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力。由實驗結(jié)果推斷,Cullin1可以作為腎癌患者預(yù)后監(jiān)測指標(biāo),是一個潛在治療靶點。
【關(guān)鍵詞】：Cullin1 腎癌 細(xì)胞增殖 遷移 侵襲
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-11
• 材料和方法11-27
• 1 材料11-17
• 2 方法17-26
• 3 數(shù)據(jù)分析26-27
• 結(jié)果27-37
• 1.CULLIN1蛋白在腎癌組織中的表達(dá)情況27-28
• 2.CULLIN1的表達(dá)情況與腎癌患者臨床資料間的關(guān)系28-29
• 3.CULLIN1的表達(dá)與患者的生存及預(yù)后無關(guān)29
• 4.干涉CULLIN1的表達(dá)抑制腎癌細(xì)胞的增殖能力29-32
• 5.干涉CULLIN1的表達(dá)抑制腎癌細(xì)胞的遷移與侵襲能力32-35
• 6.干涉腎癌 786-O細(xì)胞CULLIN1的表達(dá)可以抑制其在動物模型中的生長35-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 綜述45-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 縮略詞表52-54
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文54-55
• 致謝55-56

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1 王維民;周蘇君;顧賢成;談永飛;葛志軍;周建偉;周炎;;Cullin1蛋白在胃癌中的表達(dá)及臨床意義[J];世界華人消化雜志;2012年25期

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1 王飛;Cullin1在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其分子機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2016年

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本文編號：640580