本文關(guān)鍵詞：CPEB1調(diào)控人膀胱癌RT112細(xì)胞增殖和遷移的機(jī)制研究

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【摘要】：背景與目的：在世界范圍內(nèi)，膀胱癌在惡性腫瘤中十分常見(jiàn)的。在中國(guó)，其發(fā)病率位居泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤之首。膀胱癌的發(fā)病過(guò)程是的一個(gè)多基因參與、多因素混合、多步驟形成的，現(xiàn)認(rèn)為主要是病毒和芳香胺類化合物導(dǎo)膀胱癌的發(fā)生。非侵入性低級(jí)別的膀胱癌，以染色體9p/q缺失為特征，并且在FGFR3, PIK3CA and HRAS表現(xiàn)為激活突變。CPEB1是胞質(zhì)多聚腺苷酸化元件結(jié)合蛋白家族的一員，它招募翻譯抑制物到其目的mRNA3’非翻譯區(qū)的CPE，，與其特異性序列（UUUUUAU）結(jié)合，調(diào)控mRNA的多聚腺苷酸化，從而調(diào)控mRNA的翻譯。CPEB1在胃癌、乳腺癌、骨髓瘤等細(xì)胞系中是低表達(dá)的，其表達(dá)水平的下降與這些惡性細(xì)胞促進(jìn)侵襲和血管生成能力有關(guān)。為了探究CPEB1與膀胱癌細(xì)胞增殖、遷移的關(guān)系，本課題通過(guò)CPEB1shRNA干擾載體和Migr1-CPEB1真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染RT112細(xì)胞，特異性的沉默與過(guò)表達(dá)CPEB1基因，觀察CPEB1對(duì)RT112細(xì)胞增殖、遷移的影響。 方法：1.首先建立shCPEB1干擾載體和CPEB1過(guò)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染RT112細(xì)胞。2.采用CFU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CPEB1對(duì)膀胱癌RT112細(xì)胞克隆形成能力的影響。3.CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CPEB1對(duì)RT112細(xì)胞增殖能力的影響。4.AnnexinV-FITC染色流式檢測(cè)CPEB1對(duì)RT112細(xì)胞凋亡的影響。5.劃痕實(shí)驗(yàn)和TransWell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CPEB1對(duì)RT112細(xì)胞遷移的影響。5.WesternBlot檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：1.CFU結(jié)果顯示CPEB1過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組克隆數(shù)量少，而shCPEB1干擾組比對(duì)照形成的克隆數(shù)量增多。2.CCK-8結(jié)果顯示shCPEB1干擾組比對(duì)照組增殖快，而CPEB1過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組增殖慢。3.AnnexinV染色流式檢測(cè)結(jié)果顯示CPEB1過(guò)表達(dá)和干擾組與對(duì)照組相比細(xì)胞凋亡率均無(wú)差異。4.劃痕實(shí)驗(yàn)顯示CPEB1干擾組比對(duì)照組遷移速率慢而CPEB1過(guò)表達(dá)組比對(duì)照遷移速率快。5.TransWell結(jié)果顯示CPEB1干擾組與對(duì)照組相比從上室遷移到下室的速率慢，而CPEB1過(guò)表達(dá)組比對(duì)照組比從上室遷移到下室的速率快。6.WB結(jié)果顯示CPEB1過(guò)表達(dá)后與對(duì)照組相比cyclinB1蛋白表達(dá)水平下調(diào)而p21、c-myc、Hif1-α蛋白表達(dá)水平上調(diào)，CPEB1沉默后cyclinB1蛋白表達(dá)水平上調(diào)而p21、c-myc、Hif1-α蛋白表達(dá)水平下調(diào)。 結(jié)論：CPEB1能抑制RT112細(xì)胞增殖和克隆形成的能力，并且能促進(jìn)RT112細(xì)胞的遷移能力，可能是通過(guò)調(diào)控p21、cyclinB1、c-myc和Hif1-α等基因的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌RT112細(xì)胞 CPEB1 增殖 遷移
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮略詞8-11
• 第一章 緒論11-21
• 1 膀胱癌概述11-12
• 1.1 發(fā)病原因11
• 1.2 分子機(jī)制11-12
• 1.3 膀胱癌治療的研究現(xiàn)狀12
• 1.4 展望12
• 2 CPEB1 研究進(jìn)展12-20
• 2.1 翻譯調(diào)控的簡(jiǎn)介13-14
• 2.2 CPEB1 調(diào)控 mRNA 轉(zhuǎn)錄后修飾14-17
• 2.3 CPEB 在增殖的作用17-18
• 2.4 CPEB 在衰老中的作用18-19
• 2.5 CPEB1 在癌癥中的作用19-20
• 3 CPEB1 與膀胱癌20-21
• 第二章 材料與方法21-40
• 1 常用實(shí)驗(yàn)材料21-25
• 1.1 主要生化和分子生物學(xué)試劑21-23
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器23
• 1.3 細(xì)胞系23
• 1.4 質(zhì)粒及載體23-25
• 2 實(shí)驗(yàn)方法25-40
• 2.1 建立 CPEB1 表達(dá)載體25-37
• 2.2 CPEB1 對(duì) RT112 細(xì)胞增殖的影響37-38
• 2.3 CPEB1 影響 RT112 細(xì)胞增殖和遷移的分子機(jī)制研究38-40
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-51
• 1 CPEB1 表達(dá)載體和干擾載體的建立40-45
• 1.1 CPEB1 干擾質(zhì)粒的真核表達(dá)載體構(gòu)建40-42
• 1.2 CPEB1 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的真核表達(dá)載體構(gòu)建42-44
• 1.3 RT112 細(xì)胞轉(zhuǎn)染44-45
• 2 CPEB1 對(duì) RT112 細(xì)胞增殖和遷移的影響45-50
• 2.1 CFU 實(shí)驗(yàn)45-46
• 2.2 AnnexinV-FITC 染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡46-47
• 2.3 Cell Counting Kit-8 檢測(cè)細(xì)胞增殖47-48
• 2.4 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè) CPEB1 對(duì) RT112 細(xì)胞遷移的影響48-49
• 2.5 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè) CPEB1 對(duì) RT112 細(xì)胞遷移的影響49-50
• 3 CPEB1 影響 RT112 細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的檢測(cè)50-51
• 第四章 討論51-54
• 第五章 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 致謝61-62
• 附錄62-64

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：618116