本文關鍵詞：IGF-1對腎小管上皮細胞轉分化作用機制的影響

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【摘要】：目的:探討PI3K/Akt通路在IGF-1誘導的人腎小管上皮細胞(human kidney proximal tubular epithelial cell line,HKCs)間質(zhì)轉分化過程中的作用和意義。方法:用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)液將HKCs細胞培養(yǎng)于6孔板或培養(yǎng)瓶中,待細胞生長至亞融合狀態(tài),吸棄培養(yǎng)基,換成無血清(free serum medium,FSM)的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h,然后分成:①正常對照組:用10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞;②IGF-1(50ug/L)組:用50ug/L IGF-1培養(yǎng)細胞;③IGF-1+PI3K/Akt抑制劑LY294002組:用50ug/L IGF-1+15umol/L LY294002培養(yǎng)細胞;按以上分組分別培養(yǎng)24h、48h和72h。免疫印跡法(western blotting)方法檢測a-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)、總Akt(t-Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表達。再按上述方法將細胞分為:①正常對照組;②IGF-1(50ug/L)組;③IGF-1+不同濃度的LY294002(5、15、20umol/L)組,共同培養(yǎng)48h。倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化;聚合酶鏈式反應(RT-PCR)方法檢測a-SMA和p-Akt m RNA表達水平。DAPI染色法檢測HKCs細胞凋亡的情況。結果:(1)WB結果顯示:隨著IGF-1(50ug/L)作用時間的延長,a-SMA蛋白表達上調(diào)(p0.05),Akt蛋白表達上調(diào)(p0.05),p-Akt蛋白表達上調(diào)(p0.05),且作用呈時間依賴性。(2)與IGF-1(50ug/L)單獨作用于HKCs細胞相比,IGF-1(50ug/L)和LY294002(15umol/L)共同作用后,a-SMA蛋白表達下調(diào)(p0.05),Akt蛋白表達下調(diào)(p0.05),p-Akt蛋白表達下調(diào)(p0.05),且作用呈時間依賴性。(3)IGF-1(50ug/L)作用48h后,RT-PCR結果顯示:a-SMA m RNA表達明顯增加(p0.05),p-Akt m RNA表達明顯增加(p0.05)。(4)不同濃度的LY294002均能使p-Akt m RNA表達減少(p0.05),a-SMA m RNA表達減少(p0.05),且作用呈濃度依賴性。(5)相差顯微鏡結果顯示:正常對照組細胞呈卵石樣緊密排列生長;IGF-1刺激使HKCs細胞形態(tài)顯著變化,由橢圓形變?yōu)樗笮?同時促進HKCs細胞增殖;LY294002可阻礙這種變化。(6)DAPI結果顯示:IGF-1能夠抑制細胞凋亡,促進細胞增殖,而加入不同的LY294002后卻表現(xiàn)出典型的凋亡形態(tài)特征,且呈濃度和時間依賴性。結論:(1)IGF-1能誘導HKCs細胞中PI3K/Akt激活,從而促進腎小管上皮細胞轉分化,參與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展;(2)PI3K/Akt通路參與IGF-1誘導的轉分化過程,PI3K/Akt是IGF-1誘導EMT信號轉導通路中的下游因子之一;(3)PI3K/Akt特異性抑制劑LY294002可抑制IGF-1誘導的轉分化作用,提示LY294002可能通過抗纖維化作用保護腎臟。
【關鍵詞】：胰島素樣生長因子 腎小管上皮細胞 轉分化 PI3K/Akt
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 常用英文縮略詞表9-10
• 前言10-15
• 材料與方法15-24
• 結果24-33
• 討論33-38
• 結論38-39
• 參考文獻39-43
• 綜述43-52
• 參考文獻49-52
• 致謝52

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：599419