本文關(guān)鍵詞：NKAIN2真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)鑒定

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【摘要】：目的 NKAIN2基因位于6號染色體長臂,6號染色體長臂的缺失現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生于各種腫瘤�，F(xiàn)構(gòu)建候選抑癌基因NKAIN2真核表達(dá)載體,使其在前列腺癌細(xì)胞22RV1中過表達(dá)并觀察其細(xì)胞定位,為進(jìn)一步功能研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法采用PCR方法擴(kuò)增NKAIN2基因序列,將其重組于pc DNA4載體中,利用PCR和DNA測序鑒定克隆正確性;并轉(zhuǎn)染到22RV1細(xì)胞,Western blot檢測其蛋白表達(dá),免疫熒光檢測其在細(xì)胞中的定位。結(jié)果重組質(zhì)粒中插入正確目的片段,片段大小為627 bp,與預(yù)計位置相符。Western blot檢測表明,在25 000處檢測到目的蛋白條帶,與預(yù)計大小相符,而陰性對照未檢測到相應(yīng)條帶,說明真核表達(dá)載體成功轉(zhuǎn)染細(xì)胞,并且能夠瞬時表達(dá)。轉(zhuǎn)染了pc DNA4-FLAG-NKAIN2質(zhì)粒的22RV1細(xì)胞在Petri皿培養(yǎng)24 h后可測到轉(zhuǎn)染的帶FLAG-NKAIN2片段的蛋白表達(dá),且過表達(dá)的蛋白主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。轉(zhuǎn)染未帶FLAG標(biāo)簽的pc DNA4質(zhì)粒未檢測到蛋白熒光信號。結(jié)論成功構(gòu)建了pc DNA4-FLAG-NKAIN2真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染22RV1細(xì)胞后高表達(dá),為進(jìn)一步研究NKAIN2在前列腺癌中的生物行為和其發(fā)生發(fā)展的相互作用機(jī)制提供基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院泌尿外科;南方醫(yī)科大學(xué)病理生理教研室;倫敦大學(xué)瑪麗皇后學(xué)院Barts腫瘤研究所分子腫瘤研究室;
【關(guān)鍵詞】： NKAIN 抑癌基因 真核細(xì)胞 載體構(gòu)建
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81328017) 廣東省科技計劃項(xiàng)目(2013B051000050)
【分類號】：R737.25
【正文快照】： 0引言NKAIN2基因最初被命名為T細(xì)胞淋巴瘤斷裂點(diǎn)相關(guān)靶標(biāo)1(T-cell lymphoma breakpoint associatedtarget 1,TCBA1)[1]。根據(jù)其功能,它又被稱為鈉鉀轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶相互作用蛋白2(Na+/K+transportingATPase interacting 2,NKAIN2)。它是一種跨膜蛋白,是NKAIN家族成員之一,其家族成員

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